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- 百奥莱博
- 北京
- WE0228-TIH
- 2025年07月11日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20℃
- 保质期：
长期
- 英文名：
NGS Fast DNA Library Prep Set for Ion Torrent
- 库存：
357
- 供应商：
北京百奥莱博科技有限公司
特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
北京百奥莱博专业生产销*(代"售")二代测序DNA快速建库试剂盒(Ion Torrent平台)厂家，我公司供应的分子生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。
名称：二代测序DNA快速建库试剂盒(Ion Torrent平台)厂家
规格：24次|96次
编号：WE0228
品牌：百奥莱博
产地：国产|进口
英文名：NGS Fast DNA Library Prep Set for Ion Torrent
本试剂盒提供了构建DNA文库需要的酶预混体系及反应缓冲液，包含除接头以外的所有成分，制备的文库可用于Ion torrent PGM、Ion Proton二代测序平台的测序。和常规建库方法相比，该试剂盒将多个步骤进行了合并，省略了多个纯化步骤，因此显著降低了起始模板DNA的最少需求量，缩短了文库构建时间。另外，试剂盒采用高保真DNA聚合酶进行文库富集，无偏好的PCR扩增，扩大了序列的覆盖区域，可高效的制备用于Ion torrent二代测序平台的DNA文库。
试剂盒组成：
| 组份 | 24次 | 96次 |
| 10×End Repair Buffer | 200μl | 800μl |
| End Repair Enzyme Mix | 48μl | 192μl |
| Ligation and Nick Repair Buffer | 400μl | 2×800μl |
| T4 DNA Ligase | 48μl | 192μl |
| Bst DNA Polymerase | 48μl | 192μl |
| 2×HiFidelity PCR Mix | 600μl | 2×1.2ml |
| 10×Primer Mix(5μM each) | 150μl | 600μl |
自备仪器、试剂和耗材：
1、磁力架：建议使用Life公司磁力架。
2、DNA纯化回收试剂盒：建议使用百奥莱博磁珠法DNA纯化回收试剂盒(WE0205)。
3、样本接头引物试剂盒。
4、无水乙醇，EB(10 mM Tris-HCl, pH 8.0)，去离子水(pH 在7.0-8.0之间)。
5、反应管：建议使用低吸附的PCR管与1.5ml离心管；枪头：建议使用高质量过滤枪头防止试剂盒、文库样本污染。
实验前准备及重要注意事项/strong>：
1、避免试剂盒中Buffer的反复冻融，建议首次使用时将Buffer进行分装保存。酶在使用完应尽快放回-20℃保存，
2、PCR产物因操作不当极易产生污染，导致实验结果不准确，建议将PCR反应体系配制区与PCR产物纯化区隔离，并使用专门的移液器，定期对各实验区域进行清洁。
DNA建库流程示意图：
起始材料：5ng-1μg打断的双链DNA，溶于EB(10 mM Tris-HCl pH 8.0)或去离子水中，DNA纯度要求：OD260/OD 280=1.8-2.0。
DNA末端修复反应：
1、向200μl PCR管中加入以下成分，用枪头将上述溶液轻轻混匀，瞬时离心使所有组分收集到管底。
| 试剂 | 体积 |
| 10×End Repair Buffer | 6μl |
| End Repair Enzyme Mix | 2μl |
| fragmented DNA | X(10ng～1μg) |
| RNase-Free Water | Up to 60μl |
2、将管子置入PCR仪中，热盖打开，反应程序如下：
20 min @ 25℃
10 min @ 70℃
Hold on 4℃
Adaptor 连接：
建议使用百奥莱博adaptor进行连接，也可选择使用Life、Kapa公司的adaptor，具体连接方法可参考各公司的产品使用说明书。以下为使用百奥莱博adaptor进行连接的操作步骤：
1、向上述反应液中直接加入以下试剂, 用枪头将上述试剂混匀，短暂离心，使溶液收集到管底。
| 试剂 | 体积 |
| Ligation and Nick Repair Buffer | 10μl |
| T4 DNA Ligase | 2μl |
| Bst DNA Polymerase | 2μl |
| Adaptor A | 7μl |
| Adaptor P1 | 7μl |
| RNase-Free Water | 12μl |
| Total volume | 40μl |
注意：建议Adaptor的加入量与DNA片段的摩尔比为10:1-20:1，具体Adaptor的使用浓度请参照下表。如果DNA量为10-100ng, adaptor建议使用浓度为1μM(小于260 bp)或 0.5μM(300-400 bp)。
| 插入DNA 量/反应 | 不同大小DNA 建议Adaptor 使用浓度 | |||
| 130 bp | 260 bp | 320 bp | 410 bp | |
| 1μg | 10μM | 10μM | 5μM | 5μM |
| 500ng | 5μM | 5μM | 2.5μM | 2.5μM |
| 100ng | 1μM | 1μM | 0.5μM | 0.5μM |
2、反应步骤：
15 min @ 25℃
5 min @ 65℃
Hold on 4℃
Adaptor连接DNA片段的选择性回收：
构建不同大小的DNA文库时，需进行DNA片段的选择性回收。若起始样本量低于50ng，不建议进行DNA片段选择性回收。可参考另一种方案，直接进行DNA片段的纯化。建议使用百奥莱博磁珠法DNA纯化回收试剂盒(WE0205)进行DNA片段选择性回收。若使用除百奥莱博以外厂家的磁珠，需自行摸索最佳磁珠用量。以下操作步骤采用百奥莱博磁珠法DNA纯化回收试剂盒，可选择回收DNA片段长度范围为310-370bp(读长为200bp)，反应起始体积为100μl。
1、涡旋振荡MCPure 20秒，使其彻底混匀为均一溶液；
2、将100μl adaptor连接反应缓冲液转移至一新的1.5ml离心管中；
3、加入60μl混合均匀的MCPure，涡旋震荡5秒钟后室温静置5分钟；
4、短暂离心，将离心管置于磁力架上，使磁珠和上清溶液分离，直至溶液澄清(约需5分钟)，小心地将上清溶液转移至新的1.5ml离心管中,并弃去磁珠；
注意：不要弃除上清。
5、向上清中加入20μl混合均匀的MCPure，涡旋震荡5秒钟后室温放置5分钟；
6、短暂离心，将离心管放于磁力架上，使磁珠和上清溶液分离，直至溶液澄清(约需5分钟)，小心移取上清并弃除，期间避免接触结合目标DNA的磁珠；
注意：不要弃除磁珠。
7、继续保持离心管固定于磁力架上，向离心管中加入250μl新配置的80%乙醇，室温放置30秒，待悬起的磁珠完全吸附后，小心弃除上清；
8、重复步骤7；为彻底移除残留液体，可将离心管短暂离心后，再次移除残留液体。
9、保持离心管固定于磁力架上，室温静置5分钟，使磁珠在空气中干燥；
10、将离心管从磁力架上取下，加入25μl 10 mMTris-HCl(pH 8.0)或去离子水(自备)，涡旋振荡使磁珠完全重悬于洗脱液中，室温静置5分钟；
11、短暂离心，将离心管放于磁力架上直至溶液澄清(约需5分钟)，将25μl洗脱液转移至一个新的PCR管中；
另一种方案：Adaptor连接DNA片段的全部回收：
1、涡旋振荡MCPure20秒，使其彻底混匀为均一溶液。
2、将adaptor连接反应液转移至一新的1.5ml离心管中。
3、加入1倍样品体积的MCPure，涡旋震荡5秒钟后，室温静置5分钟。
4、短暂离心，将离心管放于磁力架上，使磁珠和上清溶液分离，直至溶液澄清(约需5分钟)，小心吸取上清并弃除，期间避免接触已结合目标DNA的磁珠。
注意：不要弃除磁珠。
5、继续保持离心管固定于磁力架上，向离心管中加入250μl新鲜配置的80%乙醇，室温放置30秒，待悬起的磁珠完全吸附后，小心弃除上清。
6、重复步骤5。为彻底移除残留液体，可将离心管短暂离心后，再次移除残留液体。
7、保持离心管固定于磁力架上，室温静置5分钟，使磁珠在空气中干燥。
8、将离心管从磁力架上取下，加入25μl EB(自备)或去离子水，涡旋振荡使磁珠完全重悬于洗脱液中，室温静置5分钟。
9、短暂离心，将离心管放于磁力架上直至溶液澄清(约需5分钟)，将25μl洗脱液转移至一个新的PCR管中。
PCR富集：
1、在PCR管中加入以下试剂并混匀：
| 试剂 | 体积 |
| 连接adaptor后的DNA片段 | 20μl |
| 2×HiFidelity PCR Mix | 25μl |
| 10×Primer Mix(5μM each) | 5μl |
| 总体积 | 50μl |
2、PCR反应条件：
| 步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
| 预变性 | 98℃ | 30s | |
| 变性 | 98℃ | 10s | 4～12个循环 |
| 退火 | 65℃ | 30 s | |
| 延伸 | 72℃ | 30 s | |
| 终延伸 | 72℃ | 5min |
注：样本量为1ug时，4-6个cycles，样本量100ng时6-8个cycles，样本量为10ng时10-12个cycles。PCR循环数可根据实验进行优化。
PCR产物的纯化：
1、涡旋振荡MCPure20秒，使其彻底混匀为均一溶液；
2、将PCR反应液转移至一新的1.5ml离心管中；
3、加入1倍样品体积的MCPure，涡旋震荡5秒钟后室温静置5分钟；
4、短暂离心，将离心管放于磁力架上，使磁珠和上清溶液分离，直至溶液澄清(约需5分钟)。小心移取上清并弃除，期间避免接触结合目标DNA的磁珠；
注意：不要弃除磁珠
5、继续保持离心管固定于磁力架上，向离心管中加入250μl新鲜配置的80%乙醇，室温放置30秒，待悬起的磁珠完全吸附后，小心弃除上清。
6、重复步骤5；为彻底移除残留液体，可将离心管短暂离心后，再次移除残留液体。
7、保持离心管固定于磁力架上，室温静置5分钟，使磁珠在空气中干燥。
8、将离心管从磁力架上取下，加入25μl EB(自备)或去离子水，涡旋振荡使磁珠完全重悬于洗脱液中，室温静置5分钟，短暂离心，将离心管放于磁力架上直至溶液澄清(约需5分钟)，将25μl洗脱液转移至一个新的PCR管中，DNA文库在-20℃保存。
储存条件：-20℃
更多有关二代测序DNA快速建库试剂盒(Ion Torrent平台)厂家的价格及使用说明等，请联系我们的业务经理王欣女士咨询，我公司还销*(代"售")以下产品：
·0.5 M Tris-HCl缓冲液(pH6.8)
编号：WE0285
英文名称：0.5 M Tris-HCl(pH6.8)
规格：500ml
·Bradford蛋白定量试剂盒
编号：WE0275
英文名称：Ultra Bradford Protein Assay Kit
规格：800次微孔板(100管次)
Bradford 法是最简单和快速的比色蛋白定量方法。 这一方法基于考马斯亮蓝G-250与蛋白质结合后， 产生蓝色化合物，反应迅速而稳定。反应化合物在465-595 nm处有最大的光吸收值，化合物颜色的深浅与蛋白浓度的高低成正比关系，因此可通过检测595 nm的光吸收值的大小来计算蛋白的含量。本产品将传统的Bradford方法进行了改良，最大限度的加大蛋白定量的线性范围，变异性小于普通考马斯亮蓝染色法，灵敏度范围为100-1,500μg/ml。使用本产品反应迅速，颜色产物1小时内保持稳定。本试剂盒适用于多种缓冲液系统，不受金属离子、还原剂和螯合剂的干扰。
试剂盒组成：
| 组成 | 规格 |
| Bradford Protein Assay Reagent | 2×100ml |
| BSA Standard Solution(2mg/ml) | 2ml |
注意事项：
1、BSA标准品的稀释液需与待测样品的稀释液一致(可用1×PBS或0.9%生理盐水进行稀释)。
2、本试剂盒不适合含有去污剂的蛋白定量，具体干扰物质(具体见附表1)，可采用BCA蛋白定量试剂盒(WE0276)或其他蛋白定量产品。
3、所测蛋白分子量必须大于3 kD。
使用方法：
1、稀释BSA标准品：用与待测蛋白样品相一致的稀释液按下表稀释BSA标准品。
| 管号 | 稀释液用量(μl) | BSA标准品用量(μl) | BSA标准品最终浓度(μg/ml) |
| A | 0 | 100 | 2000 |
| B | 50 | 150 | 1500 |
| C | 200 | 200 | 1000 |
| D | 200 | 200(从C管中取) | 500 |
| E | 200 | 200(从D管中取) | 250 |
| F | 200 | 200(从E管中取) | 125 |
| G | 200 | 0 | 0(空白) |
2、试管检测(检测范围：100-1500μg/ml)
1)按上表稀释标准品，将30μl稀释好的BSA标准品分别加到作好标记的试管中。
2)取干净的试管，分别加入30μl待测蛋白样品(原液或稀释液)，并作好标记，推荐每个测定做2-3个平行反应。
3)向步骤1)和步骤2)的试管中各加入1.5ml Bradford Protein Assay Reagent，充分混匀，室温放置10分钟。
4)用分光光度计测定595 nm处的吸光值。
5)绘制标准曲线，计算样品中的蛋白浓度。
注意：数据处理时需要去除明显错误的值。未知样品浓度可以从标准曲线中查得, 实际浓度需要乘以样品的稀释倍数。如果是计算机绘制的曲线，可以从计算机给出的线性方程式计算出未知样品的浓度。
6)如果所得到的蛋白浓度不在检测范围内，请重新稀释样品后再次测定。
3、微孔检测(检测范围：100-1500μg/ml)
1)将按表1稀释好的A-G BSA标准品和待测蛋白样品(原液或稀释液)各5μl分别加到作好标记的96孔板微孔中。
2)每孔加入250μl Bradford Protein Assay Reagent，充分混匀，盖上96孔板盖，室温放置10分钟。
3)用酶标仪测定595 nm处的吸光值。
4)绘制标准曲线，计算样品中的蛋白浓度。
注意：数据处理时需要去除明显错误的值。未知样品浓度可以从标准曲线中查得, 实际浓度需要乘以样品的稀释倍数。如果是计算机绘制的曲线，可以从计算机给出的线性方程式计算出未知样品的浓度。
5)如果所得到的蛋白浓度不在检测范围内，请重新稀释样品后再次测定。
附表1. 干扰物质表
| 化合物 | 耐受浓度 |
| 缓冲液 | |
| 乙酸盐 | 0.6M |
| 甘*酸 | 0.1M |
| HEPES | 0.1M |
| MES | 0.7M |
| MOPS | 0.2M |
| Na+-柠檬酸 | 50mM |
| PIPES | 500mM |
| 磷酸*/磷酸* | 1M |
| 乙酸* | 0.6M |
| Tris | 2M |
| 盐类 | |
| 硫*(代"酸")铵 | 1M |
| NaCl | 1M |
| 尿素 | 6M |
| 极性化合物 | |
| 甘油 | 99% |
| 还原剂 | |
| β-巯基乙醇 | 1M |
| DTT | 1M |
| 去垢剂和变性剂 | |
| Brij35 | 干扰 |
| 脱氧胆酸纳 | 0.25% |
| CHAPS | 1% |
| NP-40 | 干扰 |
| 辛葡糖 | 2% |
| SDS | 0.1% |
| Tween-20 | 干扰 |
| Triton X-100 | 0.1% |
| 糖类 | |
| 蔗糖 | 1mM |
| 螯合剂 | |
| EDTA | 100mM |
| EGTA | 50mM |
| 其他 | |
| HCl | 0.1M |
| NaOH | 0.1M |
| NAD | 1mM |
| * | 5% |
储存条件：2～8℃
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BL1056 马铃薯淀粉
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ARB10032 人8异前列腺素α(8-ISO-PGα)Elisa定量检测
SJ0684 100bp
59-30-3 叶酸(维生素B9)Folic acid(Vitamin M)
3-吲哚丁酸 Ammonium citrate tribasic 133-32-4
BL1308 Taq DNA Polymerase(含10x PCR buffer,预混*化*)
553-24-2 中性红 Neutral Red Certified
ARB12323 大鼠肝细胞生长因子(HGF)血清中含量检测 Rat hepatocyte growth factor,hgf ELISA KIT
9014-63-5 木聚糖
9031-11-2 β-半乳糖苷酶 β-galactosidase
HC0229 加样槽(可高压灭菌)
ARB11808 人鼻咽癌(NPC)检测服务 Human nasopharyngeal carcinoma,npc ELISA KIT
牛胆酸 Potassium stearate 81-25-4
DL-丝*酸甲酯盐*(代"酸")盐 Hyaluronidase 5619-04-5
ARB12922 小鼠白细胞介素6(IL-6)elisa检测说明书 Mouse interleukin 6,IL-6 ELISA KIT
PY02-206 胰酪胨大豆多粘菌素肉汤基础 250克
二代测序DNA快速建库试剂盒(Ion Torrent平台)厂家关键词：二代测序DNA快速建库试剂盒,二代测序DNA快速建库试剂盒(Ion Torrent平台),WE0228,NGS Fast DNA Library Prep Set for Ion Torrent
119-44-8 酵母粉
ARB11183 人视网膜母细胞瘤抑制蛋白(pRB)elisa测定使用说明书 Human retinoblastoma tumor suppressor protein,prb ELISA KIT
ARB13669 兔白细胞介素35(IL-35)含量分析 Rabbit interleukin 35,IL-35ELISA KIT
亮蓝 Enrofloxacin 3844-45-9
Na-*甲酰-L-精*酰胺盐*(代"酸")盐 TOOS sodiu*(代"m") salt 965-03-7
BTN70702 分枝杆菌DNAOUT Myco DNAOUT
BTN71204 柱式凝固血液DNAOUT Column Blood Clot DNAOUT
PY02-065 抗生素检定培养基Ⅲ号 250克
ARB12169 大鼠白介素4(IL-4)Elisa分析 Rat interleukin 4,IL-4 ELISA KIT
ARB10021 人5,10亚甲基四*叶酸还原酶(MTHFR)尿液中含量检测 Human5,10methylenetetrahydrafolatereductase(mthfr)ELISA KIT
N-*甲酰-N-*基羟胺 Dispase 304-88-1
BFD052 呋*(代"喃")妥因快速检测卡
BOC-L-谷*酸 CTAC 2419-94-5
L-丝*酸甲酯盐*(代"酸")盐 Indazole 5680-80-8
我公司生产供应销*(代"售")的基因结构和功能正全品类优惠促销，十分期待您的咨询选购二代测序DNA快速建库试剂盒(Ion Torrent平台)厂家。
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文献和实验相关实验
LightCycler通过实时荧光PCR技术进行DNA甲基化分析
品相似。HS578T乳腺癌细胞株非常有趣，因为它的熔解曲线与非甲基化和甲基化曲线都不同。该曲线以检测区出现异质性甲基化为特征。 LightCycler® 480实时荧光PCR仪是一款非常适合进行HRM的实时荧光PCR仪器，配合使用LightCycler® 480高分辨熔解扩增试剂盒，即成为了一套执行甲基化敏感性高分辨熔解分析（MS-HRM）检测的可靠平台，允许快速高通量研究DNA甲基化。相信这个新的研究方法的推出可以有效加快表观遗传学的研究进程，做到更快、更准、更好。 参考文献 1. Bird AP
离心吸附后再洗涤。注意的是紫外照射时间不要太长，因为紫外线对DNA （特别是对于较大的片段）有影响。还有就是溶胶要彻底，用枪头把胶块弄碎一点有助于50度下快速溶解。溶解完全后溶液的颜色指示溶液的pH值，如果变色需要调pH值以防止实验失败。需要用ddH2O或者TE洗脱的，注意pH在7.0―8.5之间的回收率最高。回收率和片断大小、多少有关，较大的片断（7kb以上）回收率会有所降低，洗脱液预热到50度再加入纯化柱膜中央，有助于提高产率。 除了比较适合个人使用的传统离心式，Qiagen还提供抽滤式的胶回收试剂盒
直标法因为Cy5标记效率低而导致Cy3、Cy5两种颜色信号强度不同的现象。试剂盒提供除荧光染料外的全部试剂，足够作10次标记。 6）Vysis公司的Microarray Nick Translation Kit 是配合Vysis公司的Genomic Microarray--AmpliOnc I Microarray的荧光标记试剂盒，采用缺口平移的方法将荧光标记的dUTP掺入纯化的样品基因组DNA中作为探针，和AmpliOnc I Microarray进行杂交。 除了厂家为自家的DNA
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