北京大肠杆菌DH10Bac化学感受态细胞价格厂家

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名称：北京大肠杆菌DH10Bac化学感受态细胞价格厂家
品牌：百奥莱博
产地：国产|进口
编号：BTN140576
规格：0.1mL*10
 本产品是采用特殊工艺处理得到的大肠杆菌DH10 Bac感受态细胞，适用于昆虫杆状病毒Bac-to-Bac 系统中同源重组的菌株，用于产生重组Bacmid。使用pUC19质粒检测，本产品转化效率可达107CFU/μg。
 DH10Bac细胞包含亲本Bacmid bMON14272和辅助质粒 pMON7124。亲本Bacmid 包含一个mini-F 复制子、卡那霉素抗性基因、att Tn7 位点和lac Zα-互补因子。
 辅助质粒包含tns ABCD 区域，该区域提供了mini-Tn7从供体质粒插入亲本Bacmid 靶位点所需要的转座蛋白。供体如pFastBac 系列质粒(pFastBac1，pFastBacDual等)含有Tn7R和Tn7L 同源重组臂，Tn7R和Tn7L 之间包含庆大霉素抗性基因、昆虫病毒多角体基因启动子、多克隆位点和SV40 病毒的PolyA 加尾信号。当含有靶基因pFastBac的重组质粒转化到DH10Bac细胞后，发生重组后就可产生重组Bacmid，提取纯化重组Bacmid转染昆虫细胞Sf9或Sf21 就可以包装产生昆虫病毒。此外，DH10Bac细胞中的The φ80dlacZDM15基因的产物可以实现β-半乳糖苷酶的α-互补现象，用于重组bacmid的蓝白斑筛选。
 菌株基因型为：F- mcrA Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC)φ80lacZΔM15 ΔlacX74 recA1endA1 araD139 Δ(ara,leu)7697 galU galK λ-rpsL nupG/pMON14272/pMON7124。

储存条件：干冰运输、-80℃保存，避免反复冻融，有效期半年。

自备试剂：重组质粒、SOC或LB培养基等。

使用方法：
1. 制备含有如下抗生素的LB 固体平板：50 μ g/mL Kanamycin，7 μ g/mL gentamicin，10μg/mL tetracycline，100μg/mL X-gal，40μg/mL IPTG。
2. 取感受态细胞置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为50-100μl，可以根据实际情况分装使用。
以下实验以100μL感受态细胞为例。
3. 待感受态细胞融化后，向感受态细胞悬液中加入1-10 ng 重组质粒，用移液器轻轻吹打混匀，冰浴30分钟。
4. 42℃热击90秒，迅速将离心管转移到冰浴中，冰上静置2-3分钟。
5. 每个离心管中加入900μl 无菌的SOC(不含抗生素)，混匀后置于37℃ 摇床，200rpm 振荡培养4小时。
6. 用 SOC培养基进行10倍梯度稀释，如分成3个稀释梯度10-1,10-2,10-3。
7. 取 100μl的各个梯度的培养物用于涂布。等平板中的液体完全吸收后，倒置平板，37℃培养24-48小时。
8. 保留剩余的菌液保存于4℃，视平板上菌落生长情况决定去留。

注意事项：
1. 涂布用量可根据具体实验调整。
2. 新制备的固体培养基不易涂干，可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。
3. 涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的转化菌落数过少，可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。

北京大肠杆菌DH10Bac化学感受态细胞价格厂家正在火爆热销，除此之外，为您推荐下别热销产品：

·菌落PCR试剂盒2.0
编号：BTN50901
英文名称：Colony PCR Kit 2.0
规格：50次
菌落PCR是筛选重组子的有效方法，可以使质粒鉴定过程从两天缩短到几小时。但由于它直接以E.coli菌落为PCR而菌落中常常含有未进入细菌的、来源于连接反应的载体DNA和插入片段，所以十分容易产生假阳性。本产品针对此缺点进行了改良。

产品特点：
1. 无假阳性率，特殊的溶菌方式能有效降低菌落中未转化DNA 对PCR的干扰，使假阳性率低于5%，远低于绝大部分同类产品。
2. 简单快速，用户只需要提供PCR引物和E.coli菌落，不需要细菌培养和质粒提取,整个筛选过程从一天缩短到2-3小时，节约时间和成本。本产品与常用E.coli菌株和载体兼容。既可小规模筛选，也适用于大规模筛查。
3.高灵敏度，既可用于高拷贝质粒，也适合于低拷贝质粒。
4. PCR反应体系中含有惰性电泳染料，反映完成后可直接上样电泳，不需另加上样液。
5.处理过的菌落样品低温长期保存后仍能用于PCR 筛查。
6. 性价比高，价格跟质粒提取试剂盒相当，但节约一天时间。

成分	规格
溶菌液A	0.5ml
溶菌液B	0.1ml
PCR 2.0	0.75ml
说明书	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：
1. 标记1.5mL塑料离心管，除样品管外，还必须加上阳性和阴性对照管。
在每个管中加入下列成份配制100μL 溶菌液：

H2O(自备)	88μl
溶菌液A	10μl
溶菌液B	2μl
合计	100μl

2. 用无菌牙签或无菌移液枪头从培养皿上挑取一个菌落或部分菌落，放入溶菌液中，充分震荡直到菌落彻底分散混匀。为方便回查，最好在培养皿上给已取样的菌落做好标记。
3. 重复第2 步直到待筛查菌落全部转移到相应的离心管中。
4.在阳性对照管中，加入已知含有待筛选质粒的菌落；如果没有此菌落，直接进入第6 步，用连接反应液直接作PCR的阳性对照。
5.在阴性对照管中，加入已知的不含有待筛选质粒的任何E.coli菌落(如常见的宿主细菌)，其他处理同第2 步。
6. 将所有离心管置于37℃保温30分钟，然后转入100℃水浴处理10分钟。振荡混匀溶液数秒后10,000 g离心1分钟，转移上清到一新的离心管中待用。此溶液为样品DNA溶液。
7. 标记与第1 步数量相同的PCR 管，每个管中分别加入下列成份并充分混匀：

样品DNA溶液	1-5μl
PCR MagicMix	15μl
引物1(10 pmol/μL)	1μl(自备)
引物2(10 pmol/μL)	1μl(自备)
Taq物DNA聚合酶(5U/μL)	0.2-0.4μL(1-2U)
补水到	30μl

 注意:引物选择有三种情况，
 一是选用商品化的能与多克隆位点两边顺序结合的通用引物(如T7、T3、SP6等)；
 二是使用用户自己合成的能与插入片段结合的引物(如果插入片段是PCR产物，引物是现成的)；
 三是组合第一种情况和第二种情况的引物。选择前两种引物在筛查到重组子后还必须用其他方法(如质粒制备后酶切或使用载体引物/插入片段引物PCR)进一步确定插入方向。选择第三种引物则可以同时完成重组子筛选和DNA 插入方向确定两项工作。用户可以根据自己的具体情况选择。
8. 将PCR 管放入PCR 仪器中进行扩增，PCR 温度参数根据引物和模板情况由客户自己预先确定。
9. PCR结束后取10μl电泳直接进行琼脂糖电泳分析。(注：本试剂盒提供的PCR buffer中已经含有电泳染料和甘油，故可以直接上样)


北京大肠杆菌DH10Bac化学感受态细胞价格厂家关键词：大肠杆菌DH10Bac化学感受态细胞,BTN140576,E.coli DH10Bac Chemical Competent Cell

F030834 BIOTIN标记山羊抗人IgG抗体 Polyclonal Goat Anti-Human IgG*BIOTIN
ARB11100 人金属蛋白酶组织抑制因子3(TIMP-3)免费代测 Human tissue inhibitors of metalloproteinase 3,timp-3 ELISA KIT
中性福尔马林固定液(10%,含DEPC)   500ml
9007-34-5 Collgen TypeⅡ  胶原蛋白Ⅱ型(牛)
ARB10670 人血管紧张素Ⅱ受体2抗体(AT2R-Ab)代做ELISA实验 Human angiotensin Ⅱ receptor 2 antibody,at2r-ab ELISA KIT
总超氧化物歧化酶(SOD)检测试剂盒(NBT核黄素比色法)   50T|100T
BL0829 HRP标记兔抗生物素抗体
ARB13814 豚鼠神经肽A(NKA)Elisa方法检测 Guinea pig neurokinins a,nka ELISA KIT
BTN100834 胰蛋白酶抑制剂溶液 Aprotinin Solution
二**(代"胺")磺酸* L-Phenylglycine methyl ester?HCl 6152-67-6
PP0401 超敏可逆蛋白染色试剂盒
BTN100835 胃蛋白酶抑制剂溶液 Pepstatin Solution
溶葡球菌酶 Sodium iodoacetate 9011-93-2
对羟基*三唑一水 DAOS 2592-95-2
ARB13906 猪血管生成素受体/含免疫球蛋白样环和上皮生长因子样域酪*酸激酶2(TIe-2)尿液中含量检测 Porcine tyrosine kinase with immunoglobulin-like and egf-like domains 2,tie-2 ELISA KIT
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PY01-025  乳糖  AR|BR  500克  
SJ0734 牛外周血细胞分离液
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10191-18-1 BES  N,N-双(2-)-2-*基乙磺酸
三乙*(代"烯")四胺六乙酸 Rhodamine B 869-52-3
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PY02-352  假单胞菌琼脂基础培养/CN琼脂基础  250克  
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ARB12032 大鼠β淀粉样蛋白1-40(Aβ1-40)酶标法分析 Rat amyloid beta Peptide 1-40,aβ1-40 ELISA KIT
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BL1323 dTTP(100mM)
ARB11037 人环加氧酶2(COX-2)elisa检测 Human cyclooxygenase-2,cox-2 ELISA KIT
DNA提取扩增套装 
BL0907 FITC标记兔抗山羊IgG抗体
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三*基甲*(代"烷") Glycine ethyl ester HC1 519-73-3
ARB10608 人血红素氧合酶1(HO-1)代做ELISA实验 Human heme oxygenase 1,ho-1 ELISA KIT
C0101 胎牛血清(无菌过滤) 100ml/200ml/500ml/500ml*20瓶
ARB10945 人谷*酸脱羧酶(GAD)血清中含量检测 Human glutamic acid decarboxylase,gad ELISA KIT
甘油PBS封片剂   10ml|50ml

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