随机引物法DNA探针生物素标记试剂盒北京现货促销

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百奥莱博专业生产销*(代"售")随机引物法DNA探针生物素标记试剂盒北京现货促销，我公司供应的分子生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。

名称：随机引物法DNA探针生物素标记试剂盒
英文名：Random Primer DNA Labeling Kit(Biotin)
规格：5次
品牌：百奥莱博
编号：BTN90603B
产地：国产|进口
本试剂盒是基于Feinberg和Vogelstein发明的随机引物标记法而开发出来的即用型DNA探针标记试剂盒，标记过程由双链DNA热变性、随机引物与单链DNA结合、在Klenow DNA聚合酶催化下，引物的延伸合成DNA探针并掺入标记的核苷酸三步组成，可用下面的示意图表示：

本产品对Feinberg和Vogelstein经典方法进行了改良。

产品特点：
1. 提供的标记反应液整合了除酶和模板外的所有成分，简化了反应加样步骤，提高了标记反应的可重复性。
2. 使用无外切活性的Klenow exo- DNA聚合酶，已标记DNA探针不会被酶降解。
3.快速，最快1小时即可完成标记反应。
4. 得到的DNA探针比活性高(如果是同位素，可以达到109cpm/μg DNA)，检测灵敏度高。
5. 所需模版DNA量少(只需要10ng以上即可)，DNA可以是各种形状(线状和环状)的、也可以是单链或双链的，长度在100bp以上均可。
6. 得到的探针长度在200-400nt之间，可以用于Southern杂交、Northern杂交、原位杂交、菌落和斑点印迹杂交等。
7. 提供三种标记选择，其中BTN90603A可用于各种同位素标记和其他任何非同位素标记，但需自备标记底物；BTN90603B和BTN90603C可分别用于生物素和地高*(代"辛")标记，不需自备标记底物。

试剂盒组成：

 

成分	规格
2×A型标记反应液(自备标记物型)	50μl(仅A型有)
2×B型标记反应液(生物素型)	50μl(仅B型有)
2×C型标记反应液(DIG型)	50μl(仅C型有)
dATP,2mM	10μL(仅A型有)
dTTP,2mM	10μL(仅A型有)
dGTP,2mM	10μL(仅A型有)
dCTP,2mM	10μL(仅A型有)
Klenow exo-聚合酶(2U/μL)	5μl
超纯水	1ml
说明书	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：
1.在一干净的硅化的塑料离心管中加入下列成分：

成分	用量
模板DNA	50-150ng
2×标记反应液(ABC三种之一)	10μl
超纯水	补水到15μl

注意：非同位素标记物由于疏水性强，容易与常用的塑料离心管表面非特异性结合，所以一定要使用硅化的塑料离心管。模板DNA并非越多越好，因为模板会在杂交反应中跟标记的探针杂交，竞争性地抑制探针跟靶分子的杂交。
2. 沸水浴5-10分钟，或在PCR仪上100℃加热5-10分钟使DNA模版充分变性，立即放冰上待用。注意：如果PCR仪器不能设置到100℃，99℃加热5分钟也可。
3.高速离心数秒使所有液体集中在管底，根据试剂盒类型加入下列成份：

试剂盒类型	成分及用量
BTN90603A型	dATP、dGTP、dCTP各1μl(共3μL，浓度均为2mM) 自备的2mM dTTP/标记dUTP混合物(见注)1μL 1μl Klenow exo聚合酶
BTN90603B型	1μl Klenow exo聚合酶 4μl超纯水
BTN90603C型	1μl Klenow exo聚合酶 4μl超纯水

注：上表中的dTTP/标记dUTP混合物中dTTP和标记的dUTP的总浓度为2mM(在20μL体系中混合液的终浓度为0.1mM，dTTP与生物素或DIG标记的dUTP的比例最好为65:35)。由于空间阻碍，并非标记生物素或DIG标记的dUTP越多灵敏度越高，一般dTTP与标记dUTP的比例在65：35为最佳。但如果使用自备的其他标记核苷酸，如fluorescein、hydroxycoumarin、resorufin和aminoallyl标记的dUTP，则用户需要自己摸索其与dTTP之间的最佳比例，如果使用32P标记的dUTP，则比活最好为3000Ci/mmol，浓度为好为10uCi/μL，并且不需要加入dTTP。
4. 轻柔吹打混匀。如有液滴沾在管壁上，高速离心数秒使所有液体集中在管底。
5. 37℃保温1-20小时。标记效率跟模版量和保温时间相关，具体见下表：

模版DNA用量	1小时后探针合成量	20小时后探针合成量
10ng	80ng	900ng
30ng	150ng	1.35μg
100ng	350ng	1.65μg
300ng	750ng	2.2μg
1μg	1.3μg	2.6μg
3μg	1.6μng	2.6μg

6. 加1μl自备的0.5M EDTA(pH8.0)终止反应，立即放冰上待用或放-20℃保存一年。用前需要加热100℃ 5分钟使DNA探针变性成单链，然后直接加入到杂交反应液中即可。如果电泳检测，标记产物将是弥散状态。
 注意：本方法标记核苷酸掺入率极高，因此可以不经纯化直接使用。如果需要纯化，注意不要用酚抽提法纯化非同位素(生物素、DIG和其他等)标记的DNA探针，因为这些标记分子疏水性强，能使标记的DNA进入疏水的有机相而丢失，但可以用乙醇沉淀和Sephadex G50回收(可另购非同位素探针柱式纯化试剂盒)。对比活高的同位素探针，由于其极其不稳定，因此应该立即使用，不要长久放置。
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随机引物法DNA探针生物素标记试剂盒北京现货促销极具性价比，此外，我公司正火爆促销以下产品：

 

编号	名称
BTN130912	dATP溶液(2.5mM)
BTN130970	柱式革兰氏阳性菌RNA提取试剂盒
BTN130558	大肠杆菌Rosetta(DE3)plysS感受态细胞
BTN71205	柱式土壤DNA提取试剂盒
BTN130902	酵母产孢培养基
BTN120619	dGTP溶液(100mM)
BTN80915B	超级杂交液(含50%甲酰胺)
BTN100841	电泳级β-巯基乙醇
BTN140405	细菌内毒素标准品(10EU/支)
BTN70503B	DNA marker(100-600bp)
BTN131142	鲁米诺
BTN130530	His标签蛋白专用蛋白酶抑制剂
BTN120708	凝血酶
BTN120653C	填入法DNA末端标记试剂盒(地高*(代"辛")标记dUTP)
BTN130846	白色念球菌RNA提取试剂盒
BTN60105	平末端DNA加A试剂盒
BTN131139	Deaza dGTP溶液(5mM)
BTN101111	柱式软体动物DNA提取试剂盒
BTN90603A	随机引物法DNA探针标记试剂盒
BTN120630	荧光素-12-dUTP溶液
BTN100409	6nt随机引物(0.5 ug/uL)
BTN131079	重组蛋白A
BTN80802B	非冻型拭子DNA保存液(含专用拭子)
BTN130813	DNA磷酸化试剂盒
BTN130951	革兰氏阳性菌DNA提取试剂盒(Southern级)
BTN100209	大片段Bst DNA聚合酶
BTN130675	核糖核酸酶HII
BTN100907	10M*化*溶液(RNase-Free)
BTN130847	柱式白色念球菌RNA提取试剂盒
BTN81202	真菌总蛋白质微量提取试剂盒
BTN91104A	Denhardt溶液(同位素探针)
BTN140649	1mL亲和层析柱
BTN70303	绿如蓝核酸染料(UV)
BTN131093	荧光素标记的生物素
BTN80814	Bradford法蛋白定量试剂盒
BTN130621	Taq DNA连接酶