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Blue-White Vector T
长期
北京百奥莱博科技有限公司
低温运输,-20℃
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
百奥莱博专业生产销*(代"售")可保种型蓝白T载体说明书,我公司供应的分子生物学试剂品类齐全,且具有优势价格,欢迎新老客户垂询订购。
名称:可保种型蓝白T载体说明书
产地:国产|进口
规格:50 ng
编号:BTN60803
英文名:Blue-White Vector T
品牌:百奥莱博
本产品是环状的可以制备Clion蓝白T载体的质粒DNA。T载体是克隆PCR扩增产物的必不可少的工具,但是由于市场上的各种T载体质量参差不齐,用户很难购买到满意的产品;同时购买的T载体为线性DNA,不能保种,必须反复购买,累计成本很高。为解决这一问题,我司特推出可保种型T载体,用户只需要购买Xcm I内切酶就可以自己制备高质量的T载体,随用随配,十分方便。
产品特点:
1.一次购买,终身拥有。本产品提供制备T载体用的环形质粒DNA,可以象其他质粒一样保种并长期保存。
2. 随用随配,十分方便。用户只需要提供Xcm I 限制性内切酶和基本分子生物学实验条件,就可以自己制备T载体。整个过程只需要两天。
3. T载体含T 率为100%。本方法不是使用传统的加尾法,而是使用Xcm I酶切法。质粒的多克隆位点上预先插入了一段长为1.3 Kb的Xcm I DNA片段,经Xcm I酶切后回收得到的质粒DNA(T载体)两端自然全部带有T 突出,比例远远高于用Taq DNA聚合酶加尾法和TdT 加尾法得到的T载体。
4. 方便各种下游操作。用本产品得到的蓝白T载体插入位点两侧有多种常见的酶切位点,便于后续克隆; Xcm I 位点在Alpha 互补区,可以使用蓝白斑筛选重组子;两边还有T7和SP6 RNA聚合酶启动子,便于制备RNA探针。
储存条件:低温运输,-20℃保存,有效期两年。
使用方法:
一.细菌的转化
1. 将100μl感受态细胞于冰上解冻。注意:最好使用end A1菌种(如DH1、DH5、DH5、JM109、XL1-Blue等。常用宿主细菌的基因型可以参考《分子克隆手册》等参考书)。因为这类细菌所含DNase少,制备T载体后,残留的DNase对的T末端的破坏机会更小。
2. 取5-10μl本产品加入到感受态细胞中,轻轻旋转几次以混匀内容物。在冰上放置30分钟。
3. 将管放入预加温到42℃的水浴中,热休克90秒。快速将管转移到冰浴中,使细胞冷却1~2分钟。
4. 每管中加900μl LB培养基,37℃振荡培养1小时。
5. 取100μl培养液涂布到含Amp的LB琼脂平板表面。
6. 将平板置于室温直至液体被吸收。
7. 倒置平皿,于37℃培养,12~16小时后可出现菌落。
二.细菌的鉴定
1. 挑取单个菌落进行过夜细菌培养。
2. 按常规的方法进行质粒小量制备。
3. 用Xcm I内切酶按下面条件酶切提取的质粒DNA,如果大规模酶切,需要按比例增加各成分用量:
成分 | 使用量 |
Xcm I Buffer,10× | 5μl |
质粒DNA | <或= 2μg |
Xcm I | 1μl |
超纯水 | 加到50μl |
成分 | 样品管 | 阴性对照管 |
T4 Ligase Buffer,10× | 1μl | 1μl |
蓝白T载体 | 20-50ng | 20-50ng |
PCR 纯化产物 | 50-500ng | 不加 |
T4 Ligase | 3-5U | 3-5U |
补水到 | 10μl | 10μl |
成分 | 规格 |
溶液A | 25ml |
溶液B | 25ml |
溶液C | 50ml |
离心吸附柱 | 100套 |
通用洗柱液 | 50ml |
RNA洗脱液 | 10ml |
说明书 | 1份 |
北京百莱博科技有限公司是克隆与表达产品的专业生产供应销*(代"售")商,恭候您的咨询选购可保种型蓝白T载体说明书。
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