- ¥24700
- 近岸蛋白(Novoprotein)
- N230B
- 2025年11月16日
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- 详细信息
- 技术资料
- 规格：
96
产品概述：
NovoNGS DNA Library FlashPrep Kit for Illumina是针对Illumina高通量测序平台开发的专用试剂盒，可将DNA制备成Illumina高通量测序平台专用的测序文库。该试剂盒采用新型的体外转座技术，只需5分钟即可一步实现DNA的片段化与接头连接，实验操作快速简单，无需经过传统文库制备时的片段化、末端修复、接头连接等繁琐步骤。本试剂盒适用于50ng起始DNA量的基因组文库制备。
特点：
快速、简单、DNA用量少。
质量控制：
试剂盒中提供的所有试剂都经过严格的质量控制和功能验证，最大程度上保证文库质量的稳定性和重复性。
适用范围：
适用于将DNA制备成Illumina高通量测序平台专用文库。
产品组成：
保存条件：
除5×Stop Buffer室温保存，其余组分-20℃保存。
建库原理及流程：
转座酶与两种等摩尔量的接头Adapter1及Adapter2混合形成转座复合体。在55℃条件下孵育5min,转座复合体便能一步实现基因组DNA的片段化与加接头两个过程。纯化后的片段化产物经N5xx/N7xx引物（NovoNGS Index Kit for Illumina，提供8种N5引物及12种N7引物的选择，目录号：N237）扩增后，再经过磁珠分选，便可得到测序文库。建库原理及流程示意图如下：
文库结构：
5’-AATGATACGGCGACCACCGAGATCTACAC-Index2(i5)-TCGTCGGCAGCGTCAGAT
GTGTATAAGAGACAG-xxxxxxxxx-CTGTCTCTTATACACATCTCCGAGCCCACGAGAC-Index1(i7)-ATCTCGTATGCCGTCTTCTGCTTG-3’
文库结构：
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Adapter1和Adapter2：转座复合物中包被的两种接头，分别带有N5/N7引物识别序列及转座酶识别序列，文库打断的同时会添加到DNA片段两端
i5和i7：分别代表Index2(i5)和Index1(i7)，均为8 bp
N5和N7：分别携带Index2(i5)和Index1(i7)的引物
-xxxxxxxxx-: 插入序列
操作流程：
适用于将DNA制备成Illumina高通量测序平台专用文库。
使用移液器轻轻吹打20次，充分混匀。十分重要！
Step2：PCR扩增
NovoNGS DNA Library FlashPrep Kit for Illumina是针对Illumina高通量测序平台开发的专用试剂盒，可将DNA制备成Illumina高通量测序平台专用的测序文库。该试剂盒采用新型的体外转座技术，只需5分钟即可一步实现DNA的片段化与接头连接，实验操作快速简单，无需经过传统文库制备时的片段化、末端修复、接头连接等繁琐步骤。本试剂盒适用于50ng起始DNA量的基因组文库制备。
特点：
快速、简单、DNA用量少。
质量控制：
试剂盒中提供的所有试剂都经过严格的质量控制和功能验证，最大程度上保证文库质量的稳定性和重复性。
适用范围：
适用于将DNA制备成Illumina高通量测序平台专用文库。
产品组成：
| Component | A包装(24 rxns) | B包装（96rxns) |
| NovoTn5 Mix | 72μl | 288μl |
| 5×Reaction Buffer | 160μl | 640μl |
| 5×Stop Buffer | 200μl | 800μl |
| 2×Amplify Mix | 600μl | 2400μl |
保存条件：
除5×Stop Buffer室温保存，其余组分-20℃保存。
建库原理及流程：
转座酶与两种等摩尔量的接头Adapter1及Adapter2混合形成转座复合体。在55℃条件下孵育5min,转座复合体便能一步实现基因组DNA的片段化与加接头两个过程。纯化后的片段化产物经N5xx/N7xx引物（NovoNGS Index Kit for Illumina，提供8种N5引物及12种N7引物的选择，目录号：N237）扩增后，再经过磁珠分选，便可得到测序文库。建库原理及流程示意图如下：
文库结构：
5’-AATGATACGGCGACCACCGAGATCTACAC-Index2(i5)-TCGTCGGCAGCGTCAGAT
GTGTATAAGAGACAG-xxxxxxxxx-CTGTCTCTTATACACATCTCCGAGCCCACGAGAC-Index1(i7)-ATCTCGTATGCCGTCTTCTGCTTG-3’
文库结构：
5’-AATGATACGGCGACCACCGAGATCTACAC-Index2(i5)-TCGTCGGCAGCGTCAGAT
GTGTATAAGAGACAG-xxxxxxxxx-CTGTCTCTTATACACATCTCCGAGCCCACGAGAC-Index1(i7)-ATCTCGTATGCCGTCTTCTGCTTG-3’
Adapter1和Adapter2：转座复合物中包被的两种接头，分别带有N5/N7引物识别序列及转座酶识别序列，文库打断的同时会添加到DNA片段两端
i5和i7：分别代表Index2(i5)和Index1(i7)，均为8 bp
N5和N7：分别携带Index2(i5)和Index1(i7)的引物
-xxxxxxxxx-: 插入序列
操作流程：
适用于将DNA制备成Illumina高通量测序平台专用文库。
- 实验耗材准备
- 起始DNA的准备与要求
- 实验流程：
- 于室温融解5×Reaction buffer，上下颠倒混匀后备用；从4℃取出磁珠，室温静置30min备用。
- 在灭菌PCR管中依次添加各反应组分：
| 5×Reaction buffer | 4μl |
| DNA | 50ng |
| NovoTn5 Mix | 3μl |
| ddH2O | To 20μl |
- 将样品置于PCR仪中，反应程序设置如下：
| 105℃ | 热盖 |
| 55℃ | 5min |
| 10℃ | 10min |
- 从PCR仪中取出样品，加入5μl Stop Buffer, 移液器轻柔吹打混匀后再次放回PCR仪，55℃孵育5min后取出。
- 片段化产物纯化
- 涡旋振荡磁珠，使其充分混匀后，吸取25μl磁珠加入25μl片段化后的产物中，用移液器轻轻吹打10次，充分混匀，室温孵育5 min。
- 若管壁上有液体，将反应管短暂离心后置于磁力架，使磁珠与液体完全分离，约5 min，小心移除上清。
- 向反应管中加入200μl新鲜配制的80%乙醇漂洗磁珠，室温孵育30sec后，用枪头小心移除上清，此过程保持PCR管始终置于磁力架中。
- 重复步骤（3）一次。
- 保持PCR管置于磁力架上，打开管盖，室温空气干燥5 min左右，切记不可干燥过度。
- 从磁力架上取下PCR管，加入22μl无菌超纯水洗脱，移液器轻轻吹打混匀，后室温孵育3min；
- 若管壁有液体，将反应管短暂离心后置于磁力架，室温静置约2 min，使磁珠与液体完全分离，吸取20μl上清至新的PCR管中。
Step2：PCR扩增
- 将灭菌PCR管置于冰浴中配置50μl反应体系
| 2×Amplify Mix | 25μl |
| Step1产物 | 20μl |
| N5xx | 2.5μl |
| N7xx | 2.5μl |
- 移液器轻轻吹打，充分混匀。
- PCR扩增程序如下：
- 72℃* 3min
98℃ 30sec
98℃ 15sec
60℃ 30sec 5-7cycles
72℃ 90sec
72℃ 5min
10℃ Hold
72℃*孵育3min为链置换反应，此步骤不可省略。
PCR循环数多则文库产量高，但对应Duplication会增多，请根据测序需要进行选择。不同循环数对应的文库产出请参照附表一。
Step3：扩增产物长度分选
如对文库长度分布无特殊要求，可直接使用1.0×磁珠纯化文库扩增产物，不需进行片段分选。本步骤采用磁珠两步分选法对扩增产物进行长度分，请优选Novoprotein DNA Screen Beads (货号：N240)，如使用其他品牌磁珠，使用方法请以该品牌说明书推荐的体系为准。文库平均总长度 ~350bp ~450bp ~550bp ~680bp 文库平均插入长度 ~220 bp ~320 bp ~420 bp ~550bp 第一轮磁珠用量V1 0.7× 0.6× 0.55× 0.45× 第二轮磁珠用量V2 0.2× 0.15× 0.15× 0.15×
举例：“0.7×”代表磁珠与PCR产物的体积比，若PCR产物体积为50μl，则第一轮磁珠用量0.7×50μl =35μl，第二轮磁珠用量为：0.2×50μl=10μl。
注意：由于PCR过程中水分蒸发导致PCR产物体积小于50μl，请务必用ddH2O补齐至50μl，否则会导致分选长度和预期不一致。
片段筛选： - 涡旋振荡混匀磁珠后，吸取V1体积磁珠加入50μl PCR产物中，使用移液枪轻轻吹打充分混匀，室温孵育5 min；
- 将反应管短暂离心后置于磁力架，使磁珠与液体分离（约5 min，溶液澄清后），
- 小心转移上清至干净的EP管中，丢弃磁珠；
- 涡旋振荡混匀磁珠后，吸取V2体积磁珠至上清中，使用移液枪轻轻吹打充分混匀，室温孵育5 min；
- 将反应管短暂离心后置于磁力架，使磁珠与液体分离（约5 min，溶液澄清后），小心移除上清；
- 加入200μl新鲜配制的80%乙醇漂洗磁珠，室温孵育30sec后，小心移除上清，此过程仍保持反应管置于磁力架中；
- 重复步骤（5）一次；
- 保持反应管置于磁力架中，打开管盖，室温晾干约5min，切记磁珠不要干燥过度；
- 将反应管从磁力架上取下，加入22μl无菌超纯水洗脱，吹打混匀或涡旋混匀后室温孵育3min；
- 将反应管短暂离心后置于磁力架，使磁珠与液体完全分离（约2 min，溶液澄清后），小心吸取20μl上清至新的无菌PCR管内中，-20℃保存。
- 附表一：
注：此处文库产出总量为未进行长度筛选时的结果。PCR扩增循环次数 4 5 6 7 文库产出总量（ng） 250 420 800 1300
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