Circligase

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  • 近岸蛋白(Novoprotein)已认证
  • 2025年12月06日
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               CircleLigase是一个热稳定性酶,可以催化具有5'-磷酸基团和3'-羟基基团的单链DNAssDNA)分子的环化,该反应不依赖于ATP。该酶可以在没有互补序列存在的情况下,高效催化200nt以内单链DNA分子的环化。
     


        产品特点:
            1) 标准反应条件下,不产生线性或环状的嵌合体结构;
            2) 环化连接酶可用于微量小片段单链
    DNA的连接,连接产物可通过滚环复制进行大量富集。
     
    产品用途:

            1)产生环状的单链DNA分子,用于滚环复制或者滚环转录的实验研究;
           2)
    产生环状的单链DNA分子,用于RNA聚合酶和RNA聚合酶抑制剂的测定。

    检测方法:

          1)连接产物经20% 丙烯酰胺/8 M 尿素的PAGE胶检测,线性DNA分子的迁移速度较环状DNA分子快。
         2)加入10U核酸外切酶I ( Exo I )37℃反应45min,线性DNA被消化完全,而环状DNA分子不受外切酶的影响。

    保存温度:
    -20 ℃保存,或- 80℃长期保存。

    产品包装(A包装):

     
    产品组成                              体积  
    Circleligase (100U/μl)         10μl  
    5×Circleligase Reaction Buer            100μl  
    50mM Mncl2 20μl  
    Circleligase ssDNA Control Oligo (5 pmol/μl)                              5μl  
    ddH2O                                    500μl  
     
    质量控制
    所有组分经检测均无大肠杆菌DNA残留,无核酸内、外切酶、磷酸酶以及RNA酶活性污染。
     
    活性定义:
    60℃条件下,1小时内催化1pmol线性5´-磷酸化的标准63-mer寡核苷转换成抵抗核酸外切酶I的环状结构所需要的酶量定义为1个活性单位。
     
    常用反应体系20μl
    产品组成                              体积  
    Circleligase (100U/μl)         1μl  
    5×Circleligase Reaction Buffer             4μl  
    50mM Mncl2 1μl  
    ssDNA                                 1-10pmol  
    dd H2O                                   To 20μl  
    注:1Oligo ssDNA应含有5’磷酸基团和3’羟基基团;
    2、若实验有特殊需要,可缩短反应时间至30min,若为复杂模板,反应时间应适量延长。
     
    反应条件:
    1×反应缓冲液条件下60℃温育1h
    8010分钟热失活。
     
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    *Exonuclease I,能够从ssDNA 3'-OH 末端分解生成 5'-单核苷酸,对ss DNA具有较高的特异性,不分解双链 DNA RNA


     


     


     
     

     

      

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