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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
940
- 英文名:
Zero Background TOPO TA Cloning Kit(with MCS)
- 保质期:
12个月
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件:
-20℃
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
北京百奥莱博专业生产供应ALH329型TA克隆试剂盒(含多克隆位点)(拓扑连接酶技术)哪里买,我公司销*(代"售")全品类的分子生物学试剂,价格优惠,欢迎广大科研工作者垂询订购。
名称:ALH329型TA克隆试剂盒(含多克隆位点)(拓扑连接酶技术)哪里买
产地:国产|进口
品牌:百奥莱博
英文名:Zero Background TOPO TA Cloning Kit(with MCS)
编号:ALH329
本试剂盒采用了拓扑异构酶可以在瞬间(几秒钟-几分钟)、高效(接近100%)连接DNA片段的原理,这与和传统的T4连接酶原理不同。
试剂盒组份(20次):
TOPO-Ta Vector(30ng/μl)—————20μl
1000bp Control(30ng/μl)————5μl
10×Enhancer———————————20μl
产品特点:
1. 可以在瞬间(几秒钟-几分钟)完成连接。
2. 无需冰浴和热休克,室温5分钟内完成转化;无需1小时复苏,只需37℃10分钟复苏便可以涂板。从连接到涂板只需15-20分钟。
3. 无自连、零背景,无需繁琐蓝白斑筛选,见到长出的克隆便是有插入的(接近100%)。
4. 可以连接长达10kb片段(即使连接5kb片段,挑10个菌落,至少8个是有插入的),是目前世界上最简单、最快速、零背景免筛选的TOPO TA克隆载体。
储存条件:-20℃,有效期12个月。
本品别名:TA克隆试剂盒(含多克隆位点)(拓扑连接酶技术)|TA载体连接试剂盒
ALH329型TA克隆试剂盒(含多克隆位点)(拓扑连接酶技术)哪里买极具性价比,此外,我公司正火爆促销以下产品:
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·柱式高纯质粒小量提取试剂盒(不含内毒素)
编号:ALH081
英文名称:High purity plasmid free rapid extraction kit (centrifugal column type)
规格:50次
本试剂盒采用改进SDS-碱裂解法裂解细胞,通过独特的内毒素清除剂选择性结合离心除去内毒素,然后离心吸附柱内的硅基质膜在高盐、低pH值状态下选择性地结合溶液中的质粒DNA,再通过去蛋白液和漂洗液将杂质和其它细菌成分去除,最后低盐、高pH值的洗脱缓冲液将纯净质粒DNA从硅基质膜上洗脱。
试剂盒组份(50次):
平衡液—————————————5ml
RNaseA(10mg/ml)————————150μl
溶液P1—————————————15ml
溶液P2—————————————15ml
溶液N3—————————————15ml
内毒素清除剂——————————5ml
漂洗液WB————————————15ml
洗脱缓冲液EB——————————15ml
吸附柱和收集管(2ml)———————50套
试剂盒特点:
1.离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口世界著名公司特制吸附膜,柱与柱之间吸附量差异极小,可重复性好。克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。
2.独特的去蛋白液配方,可以高效去除核酸酶。即使是核酸酶含量丰富的菌株如JM系列、HB101也可以轻松去除。有效防止了质粒被核酸酶降解。
3.独特内毒素清除配方,清除内毒素效果一般小于<0.1 EU/ug。
4.快速、方便, 不需要使用有毒的*酚、*仿等试剂,也不需要乙醇沉淀。获得的质粒产量高、纯度好,
5.直接可以用于转染、酶切、转化、PCR、体外转录、测序等各种分子生物学实验。
注意事项
1. 所有的离心步骤均在室温完成,使用转速可以达到13,000rpm的传统台式离心机,如Eppendorf 5415C 或者类似离心机。
2. 提取质粒的量与细菌培养浓度、质粒拷贝数等因素有关。一般高拷贝质粒,建议接种单菌落于1.5-4.5 ml加合适抗生素的LB培养基, 过夜培养14-16个小时,可提取出多达20μg的纯净质粒。如果所提质粒为低拷贝质粒或大于10kb的大质粒,应适当加大菌体使用量,使用5-10 ml过夜培养物,同时按比例增加P1、P2、N3的用量,其它步骤相同。
3. 得到的质粒DNA可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。OD260值为1相当于大约50μg/ml DNA。电泳可能为单一条带,也可能为2条或者多条DNA条带,这主要是不同程度的超螺旋构象质粒泳动位置不一造成,与提取物培养时间长短、提取时操作剧烈程度等有关。本公司产品正常操作情况下基本超螺旋可以超过90%。
4. 质粒DNA确切分子大小, 必须酶切线性化后,对比DNA分子量Marker才可以知道。处于环状或者超螺旋状态的的质粒,泳动位置不确定,无法通过电泳知道其确切大小。
5. 洗脱液EB不含有螯合剂EDTA,不影响下游酶切、连接等反应。也可以使用水洗脱,但应该确保pH大于7.5,pH过低影响洗脱效率。用水洗脱质粒应该保存在-20℃。质粒DNA如果需要长期保存,可以用TE缓冲液洗脱(10mM Tris-HCl,1mMEDTA,pH 8.0),但是EDTA可能影响下游酶切反应,使用时可以适当稀释。
储存条件:室温,有效期12个月。
ALH329型TA克隆试剂盒(含多克隆位点)(拓扑连接酶技术)哪里买关键词:含多克隆位点,TA克隆试剂盒(含多克隆位点)(拓扑连接酶技术),TA载体连接试剂盒
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文献和实验按克隆的连接体系将这个小片段与你的载体(相应酶双切)连接转化…… 小片段连入的效率相当高,如果大家要检验:在菌长出来后,做PCR检验(人工合成的这个小片段的正链或反链与载体上的引物)。举个例子: 比如要在某载体的EcoR I和BamH I之间加一个新的MCS(EcoR V-Kpn I-Xho I-Hind III)(这几个位点必须在目的 载体上没有,如果有这个切点,你又实在想用的话,可以将目的载体用这个酶单切,绿豆芽核酸 酶/s1核酸酶平端化,再自连——位点封闭): 1、合成 5‘-
: •能自主复制; •具有两个以上的遗传标记物,便于重组体的筛选和鉴定; •有克隆位点(外源DNA插入点),常具有多个单一酶切位点,称为多克隆位点; •分子量小,以容纳较大的外源DNA。 (三)外源基因与载体的连接 1、粘性末端连接: •同一限制酶切割位点连接 •配伍末端连接 2、平端连接 适用于:限制性内切酶切割产生的平端 粘端补齐或切平形成的平端 3、同聚物加尾连接 由末端转移酶作用下,在DNA片段末端加上同聚物序列、制造出粘性末端,再进行粘端连接
体。 pGEM®-TEasy载体的多克隆位点区含有一些这样的限制性酶切位点,采用这些酶进行单酶切消化即可释放插入片段。如pGEM®-TEasy载体多克隆区的EcoRⅠ、BstZⅠ和NotⅠ酶切位点。这种载体也可选用适当的双酶切消化释放插入片段。 pGEM®-TEasy载体含有丝状噬菌体f1复制起始子,可用于制备单链DNA(ssDNA参见第Ⅶ部分)。单链DNA分子对应于图1底部一条链,代表pGEM®-TEasy载体。 pGEM®-TEasy载体系统包含2×快速连接缓冲液,用于连接PCR产物。采用这种
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