SuperTOPO-Amp TA克隆试剂盒厂家现货

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百奥莱博专业生产销*(代"售")SuperTOPO-Amp TA克隆试剂盒厂家现货，我公司供应的分子生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。

名称：SuperTOPO-Amp TA克隆试剂盒厂家现货
品牌：百奥莱博
产地：国产|进口
规格：25次
编号：BTN160686-25A
英文名：SuperTOPO TA Cloning Kit
本试剂盒是基于Topoisomerase能够在几秒钟之内高速连接DNA片段的原理开发的无背景克隆试剂盒，它使用了本公司通过定点突变改良的TOPO酶，连接效率比野生型更高。

产品特点：
1.高效快速，连接反应几乎在几秒钟内完成，连接率几乎达到100%。
2.适用于具有A 尾巴的DNA片段使用。
3. 无杂带或引物二聚体的PCR扩增产物可以不经过纯化直接用于连接反应。
4.转化时只需要37℃,10分钟复苏即可涂盘，免去冰浴、热休克和复苏步骤。
5. 零背景，无需IPTG-X-Gal蓝白斑筛选，故不需要IPTG-X-Gal培养基。
6. 本试剂盒按10μL标准反应体系，有25次和50次两种规格包装供选择。
7. 提供含Amp和Kan两种抗性的载体供选择(BTN160686-25A是含Amp抗性TOPO载体，BTN160686-25K是含Kan抗性TOPO载体)。

试剂盒组成：

 

成分	规格
SuperTOPO-Amp载体	25μl(BTN160686-25A)
SuperTOPO-Kan载体	25μl(BTN160686-25K)
连接缓冲液	25μl
超纯水	1ml
说明书	1份

注意：BTN160686-25A提供SuperTOPO-Amp载体，BTN160686-25K提供SuperTOPO-Kan载体。

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：

1. PCR扩增或酶切回收DNA插入片段。如果是PCR制备插入片段，所用引物不能磷酸化，使用Taq系列的DNA聚合酶。
2.电泳检测并相对定量PCR片段或酶切回收片段(跟DNA marker比较)。
 并根据插入片段长度和下表确定每次连接反应需要的最佳用量：

插入片段长度	最佳用量
100-1000bp	20-50ng
1000-2000bp	50-100ng
2000-5000bp	100-200ng

3.在一个干净的塑料离心管中，室温下(不要放在冰上)设置如下连接反应体系：

成分	用量
纯化后的PCR产物	不超过8μl(详见注意事项)
SuperTOPO-Amp载体或 SuperTOPO-Kan载体	1μl
连接缓冲液	1μl
超纯水	补到10μL

 注意：如果使用未经纯化的PCR产物，则需要加入量不能超过1μL，否则PCR 体系会干扰连接体系。
4. 轻柔吹打混匀后，短暂离心，常温(20-30℃)放置0-5分钟。如果在冬天室温低于20℃，建议使用25℃水浴或金属浴。注意：连接时间超过5分钟的话连接效率会降低。
5. 如果当天不转化，可以将离心管放-20℃保存。如果转化，则取5μL连接液加到50-100μL刚刚融化的感受态细胞中，轻柔混匀。注意：本产品要求感受态细胞的转化效率不得低于5﹡10E7cfu/ug。
6. 如果片段长度小于2Kb，则不需要冰浴和热激，直接在离心管中加入500μL不含抗菌素的SOC或LB培养基，然后取200μL涂盘。也可以先3000g离心2分钟后，弃掉大部分上清，只留约100μl左右，然后重悬细菌后全部涂盘在含Amp(对SuperTOPO-Amp)或Kan(对SuperTOPO-Kan)的培养皿上，37℃过夜培养。
7. 如果片段长度长于2Kb，则按常规转化方式，先冰浴2-30分钟，然后42℃热激30秒，冰上防放置2分钟，再在离心管中加入500μL不含抗菌素的SOC或LB培养基，37℃ 250rpm培养60分钟，然后取200μL涂盘。也可以先3000g离心2分钟后，弃掉大部分上清，只留约100μL左右，然后重悬细菌后全部涂盘在含Amp(对SuperTOPO-Amp)或Kan(对SuperTOPO-Kan)的培养皿上，37℃过夜培养。
8. 用菌落PCR、直接测序或其他方法鉴定重组子。

欲咨询购买SuperTOPO-Amp TA克隆试剂盒厂家现货，请致电北京百奥莱博科技有限公司，为您提供最全面周到的产品服务，除此之外，我公司正在促销以下产品：

·一站式miRNA尿素-PAGE电泳套装
编号：BTN70606
英文名称：One-Stop miRNA Urea-PAGE Pack
规格：30次
尿素-聚丙*(代"烯")酰胺凝胶电泳(Urea PAGE)是目前分离200nt以下的小片段RNA，尤其是20nt左右的microRNA(miRNA)分子的主要方法，但是单独配制各种溶液十分繁琐，为此我们公司开发了本产品。

产品特点：
1.一站式，含有电泳所需要的所有试剂，即开即用，十分方便，免去了实验人员称取有毒物品。
2. 灵活，可以根据需要配制各种浓度的Urea-PAGE，以便对长度各异的RNA进行电泳。
3.电泳后可直接用于UV观察、银染、胶回收、Northern杂交和放射自显影等。
4. 使用新型缓冲液，可以防止甘油的干扰。

产品组成：

成分	规格
尿素	210g
丙*(代"烯")酰胺	60g
甲叉双丙*(代"烯")酰胺	3g
TBE电泳液，10×	250ml
TEMED	1.5ml
过硫*(代"酸")铵(干粉)	1g
miRNAload	10ml
miRNA Marker	30次
固相RNase清除剂	100ml
说明书	1份

储存条件：常温运输、4℃保存(miRNAload、miRNA Marker需要-20℃保存)。保存期为一年。

使用方法：

一、准备工作
1. 用固相RNase清除剂清洁工作的台面和器皿(详见该产品的使用手册)。
2. 配制1 X电泳缓冲液：将适量的10X电泳缓冲液用RNase-free水稀释10倍，得到1X电泳缓冲液待用。
3. 配制10%过硫*(代"酸")铵溶液：精确称取约100mg过硫*(代"酸")铵到一干净的1.5mL离心管中，按每1mg过硫*(代"酸")铵加10μl RNase-free水的比例加入RNase-free水，摇晃致溶，立即使用。注意：放置时间不要超过一周。

二、配制凝胶
1. 估计所需要的凝胶溶液的体积，一般配制一块13cm×15cm×0.8mm的胶需要15mL凝胶溶液，配制一块36cm×45cm×0.8 mm的胶需要120mL凝胶溶液。
2. 根据所需要的凝胶溶液的体积，在一的干净的三角瓶中按下表加入各成分(此处以配制100mL浓度为15%的凝胶为例):

成分	终浓度	用量
尿素	7M	42g
40% Acrylamide/Bis溶液	15%	37.5mL
10×电泳缓冲液	1×	10ml
补RNase-free水到100mL

注：Acrylamide/Bis的终浓度需要根据待分离RNA长度选择(见下表)。
 

需分离的RNA长度范围	Acrylamide/Bis工作浓度
6-100nt	20%
25-150nt	15%
40-200nt	12%
60-400nt	8%
80-500nt	5%
1000-2000nt	3.5%

3. 搅拌并加热到40-50℃左右，直到尿素完全溶解。
4. 冷却到室温后，将三角瓶接上真空系统抽真空处理10-15分钟以充分去除溶液中的氧气(氧气会降低聚合反应效率)。但如果实验条件有限，此步也可以省略。
5. 边摇晃溶液变加入50μl TEMED和500μl 10%过硫*(代"酸")铵。注意：即使选择其他工作浓度的Acrylamide/Bis，TEMED和10%过硫*(代"酸")铵的用量也不需要随之改变。但如果配置的凝胶溶液的体积变化，TEMED和10%过硫*(代"酸")铵的用量也要按比例改变。
6. 再充分摇晃约30秒后迅速灌胶，然后插入样品梳。
7.室温放置30-60分钟使胶凝固。
8. 将凝胶板放置在电泳装置上后，在上下层分别加入适当量的1×电泳缓冲液。如果不马上使用，需要有湿纸将上样孔端盖住以防凝胶过度干燥。
9. 拔出梳子后用加样枪吸取电泳缓冲液，充分将每个加样空中未聚合的Acrylamide/Bis、尿素和气泡吹打出来。

三、电泳
1.在上样前，预电泳 20-30分钟以使多余的过硫*(代"酸")铵跑出加样空，同时还可以使凝胶的温度升高(到 50℃左右)，有利于RNA电泳时维持在变性状态。预电泳电流见下面第 5 条。
2. 将miRNA样品与等体积的miRNAload 混合，70℃保温 2-3分钟后迅速放置在冰上冷却，快速离心半分钟，放冰上待用。
3. 关电泳仪后开始上样。注意：每次上样后如果不更换枪头，则需要充分吹打洗净枪头以防样品的交叉污染。
4. 同时上样 miRNA Marker。
5. 重开电泳仪，对 13cm×15 cm的胶，以20-30mA的电流电泳，直到红色染料移动到凝胶边缘为止；对 36cm×45cm的胶，则以50-60mA的电流电泳，直到红色染料移动到凝胶边缘为止。

四、后续处理
1.染色观察：将凝胶一面的玻璃板揭开，直接用仍然附着在另一玻璃板上的凝胶进行各种染色，包括银染(固定、漂洗、显影和定影等步骤)、EB(每100mL 1×TBE中加 20μL 10mg/mL的EB溶液)、我们公司低毒核酸染料 DNAgreen(每100mL 1×TBE中加10μL DNAgreen 原液)。UV下观察并拍照。
2. miRNA回收：按上法用EB等染料染色后，UV下确定所需要的miRNA条带的位置，切胶后进行胶回收处理。
3. Northern杂交：按上法用EB等染料染色后，UV下确定所需要的miRNA条带的位置，切胶后电转移到带正电的尼龙膜上，然后进行杂交处理。
4. 放射自显影：如果miRNA样品电泳前经过同位素标记，则将凝胶一面的玻璃板揭开，用滤纸将附着在另一玻璃板上的凝胶吸附过来，然后包上保鲜膜，真空抽干，然后使胶跟X光片向对置进行放射自显影。


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改进型蛋白电泳考马斯亮蓝脱色液   100ml
ARB12812 小鼠乙型肝炎表面抗体(HBsAb)ELISA检测服务 Mouse hepatitis b virus surface antibody,hbsab ELISA KIT
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阿魏酸乙酯 Ethyl carbamate 4046-02-0
L-酪*酸叔丁酯 Calcium DL-malate 16874-12-7
SJ0682 50bp
D-葡萄糖-1-磷酸二* Bleomycin sulfate 150399-99-8、56401-20-8
Long Taq DNA聚合酶 500U|5×500U
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磷酸*喹 Formamidinium acetate 50-63-5

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