北京BTN130616型Bsu DNA聚合酶，大片段现货

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百奥莱博专业生产销*(代"售")北京BTN130616型Bsu DNA聚合酶，大片段现货，我公司供应的分子生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。

名称：北京BTN130616型Bsu DNA聚合酶，大片段现货
品牌：百奥莱博
英文名：Bsu DNA Polymerase，Large Fragment
产地：国产|进口
编号：BTN130616
Bsu DNA聚合酶大片段保留了Bacillus subtilis DNA聚合酶I的5´→3´聚合酶活性，但是缺失了5´→3´外切酶结构域。大片段缺乏3´→5´外切酶活性。

产品用途：
1．DNA等温扩增；
2．引物延伸；
3．80℃ 20分钟即可失活；
4．建议反应温度不要超过70℃，不能用于热循环测序或PCR。

产品组成：

 

成分	规格
Bsu DNA聚合酶，大片段，5000U/mL	0.04ml
反应Buffer，10×	1.25ml
说明书	1份

活性单位定义：1单位指37℃条件下，30分钟内使10nmol的dNTP掺入酸不溶性沉淀物所需要的酶量。

储存Buffer：25mM Tris-HCl(pH7.4)，50mM NaCl，1mM DTT，0.1mM EDTA，50% Glycerol。

反应条件：1×Buffer[10mM Tris-HCl，50mM NaCl，10mM MgCl2，1mM DTT(pH7.9 @ 25℃)]。加入33μm dNTPs(不随酶提供)，37℃孵育。

灭活：75℃ 20分钟。

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

备注：
1．由于缺乏3´→5´核酸外切酶活性，Bsu DNA聚合酶大片段不能切除3´未配对的突出末端，因而不适用于生成平滑末端；
2．25℃时，Bsu DNA聚合酶，大片段保留50%的活性，是同温度下Klenow片段(3´→5´exo–)的两倍。

北京BTN130616型Bsu DNA聚合酶，大片段现货极具性价比，此外，我公司正火爆促销以下产品：

·丙*(代"烯")酰胺-甲叉双丙*(代"烯")干粉(19:1)
编号：BTN130967
英文名称：Premixed Acr-Bis Powder
规格：100g
本产品为即用型丙*(代"烯")酰胺-甲叉双丙*(代"烯")酰胺预混干粉(19:1)，用户可直接加入去离子水溶解即可得到丙*(代"烯")酰胺溶液，用于配制各种PAGE胶，如SDS-PAGE，Tricine-SDS-PAGE等。使用方便，避免了用户直接接触有毒的丙*(代"烯")酰胺和甲叉双丙*(代"烯")酰胺。

储存条件：常温运输及避光干燥保存，有效期一年。

·植物线粒体纯化试剂盒B(精提)
编号：BTN111208B
英文名称：Plant Mitochondria Purification Kit(B)
规格：5次
植物线粒体是重要的植物细胞器，负责ATP的产生。此外植物很多重要的特性(如雄性不育)也跟线粒体相关，是母系遗传研究的重要材料。对植物线粒体进行生化和遗传研究都需要进行线粒体纯化。本产品就是专门用于植物细胞线粒体纯化的试剂盒。

产品特点：
1．即用型试剂盒，用户不需要单独配制各种溶液。
2．提供AB 两种进过优化的操作方法，A法利用常规台式冷冻离心机的差速分离原理进行线粒体粗提，所得线粒体含少量其他细胞器污染，可用于后续的SDS-PAGE，Western，ELSIA和蛋白组分析，也可以用于PCR级别的线粒体DNA和RNA提取。
3．B法利用冷冻超速离心(离心力达40000g)制备的密度梯度来将线粒体粗提液中的线粒体和其他细胞成分进一步分开，得到线粒体精提液，适用于后续的偶联分析、体外线粒体蛋白合成、线粒体成份定位等精细实验。也可用于后续的SDS-PAGE、Western、ELSIA、蛋白组分析和测序级别的线粒体DNA和RNA提取。
4．本产品足够5次提取，每次可处理10g绿色植物组织(可得1-2.5mg左右线粒体)或20g非绿色植物组织(可得2-5mg左右的线粒体)。

试剂盒组成：

成分	5T(A型)	5T(B型)
匀浆液	250ml	250ml
洗涤液	250ml	250×2
密度梯度离心介质	无	175ml
BSA干粉	5g	10g
带柄尼龙筛	1只	1只
软毛笔	1只	1只
说明书	1份	1份

储存条件：常温运输和保存，保存期限一年。

使用方法：
注意：线粒体膜对温度高度敏感，所以整个操作必须在冰上或者在冷室进行，所用植物组织，器皿和溶液均需要在4℃预冷。任何情况下线粒体的温度都不要超过4℃。

一、选择组织
1．植物组织不同，线粒体产率不同，请以下表为参考：

植物组织种类	线粒体产率	说明
根和块茎	0.3mg/10g	如土豆，红薯等
黄化苗(下胚轴、子叶、胚芽鞘)	2-5mg/10g	多酚含量低于叶片
有光合作用的叶片和子叶	1-2.5mg/10g	需放置在暗处3天

2．一般纯化最好选用用黄化苗。如果用绿色组织(如叶片)，需将植物提前放在暗室至少3 天以降低淀粉含量，否则淀粉颗粒将干扰线粒体的纯化。
3．一次实验需要40mL匀浆液、约90mL洗涤液和35mL梯度离心介质。这些溶液用前均需要加入BSA干粉使其终浓度为0.1%(100mL溶液加0.1g BSA干粉，轻柔颠倒混匀或搅拌溶解后放冰上预冷待用)。每次实验用多少配多少，不要预先将所有BSA干粉加入，否则容易长菌。

二、线粒体粗提(A法)
1．将10 g的绿色植物组织(如去叶脉后的嫩叶子，愈伤组织)或20 g干净的非绿色植物组织(如发芽组织、根、块茎等)浸泡在冰水中10分钟，用纸吸干液体后浸泡在预冷的40mL匀浆液(需先加0.1% BSA)中，在浸泡状态
下剪成1cm2大小的碎片。注意：如果样品可分成多组平行处理，得到线粒体粗提物后再汇集，否则线粒体产率将急剧降低。
2．将匀浆液和其中的植物组织碎片转移到Waring 匀浆器中，中速匀浆3次，每次15秒，每次之间间隔10秒以便让碎片沉淀下来到刀片处。也可使用研磨法。具体操作是将匀浆液和其中的植物组织碎片转移到预冷的研钵中，研磨3-4分钟。注意：植物组织匀浆后释放的物质会使匀浆液酸化，降低pH，而线粒体对pH变化非常敏感，因此建议匀浆后用pH试纸检测匀浆液的pH，如果低于7.0，必须用自备的5 M KOH 将pH调到7.0以上才进入下一步。
3．用带柄尼龙筛过滤匀浆液，穿透液可通过预冷的漏斗收集到预冷的50mL的塑料离心管中。
4．在低速固定角度冷冻离心机上4℃ 1000 g离心5分钟，沉淀为未破碎的细胞、破碎细胞的碎片、细胞核和淀粉颗粒，上清含线粒体。小心转移上清到新的预冷的50mL塑料离心管中。
5．将装上清的离心管在水平冷冻离心机上4℃ 12000 g离心20分钟，弃上清液，所得棕绿色沉淀即为纯化的线粒体粗提物。有时沉淀底部还有白色的淀粉沉淀，属于正常现象。
6．加入10mL预冷的洗涤液(需先加0.1% BSA，下同)中，用软毛笔轻柔重悬线粒体沉淀(如果最地下有白色淀粉沉淀，需要避免重悬之)。不能剧烈震荡，否则线粒体容易破裂。
7．将线粒体重悬液转移到新的50mL离心管中，再加入30mL预冷的洗涤液(终体积为40mL)中，4℃ 1000 g离心5分钟。线粒体将在上清中。
8．将上清转移到新的预冷的50mL离心管中，4℃ 12000 g离心20分钟，沉淀为线粒体。小心弃上清。到此步时，线粒体回收率一般在15-30%。
9．在沉淀中加入2mL预冷的洗涤液。用软毛笔轻柔重悬，得到线粒体粗提液。如果有平行提取，可将最多4 管线粒体沉淀重悬在2mL 洗涤液中。线粒体粗提液中线粒体的回收率一般在45-75%。
10．所得线粒体粗提液含其他细胞器(如类囊体膜，质体，过氧化物酶体，乙*(代"醛")酸循环体,或细菌)污染，但可直接用于PCR级线粒体DNA和RNA的提取、呼吸链功能测定，、蛋白浓度测定和线粒体精提。如果需要长期保存，则可以在线粒体重悬液中加入1/20 体积的自备DMSO，混匀后分成0.5mL/管，然后放-80℃保存。如此保存的线粒体酶活性和膜完整性在几年内都不会发生变化。

三、细胞核DNA的去除(纯化测序级的线粒体DNA 才需要进行此操作。本产品不提供相关试剂，实验步骤仅供参考)
11．预留50μL 线粒体粗提液做对照，在约2mL 剩余的线粒体粗提液中加入40μL 25mM的MgCl2，再加入200ug DNase干粉或溶液(总量为200ug即可)，混匀后冰上放置60分钟降解DNA。取少量样品(如50μL)在PCR仪器中加热到95℃变性10分钟，再取其中的10μL和10μL预留的样品一起进行细胞核基因专一性PCR，如果DNase处理的样品没有扩增，而预留样品有扩增，则表明DNA 去除比较干净(达到PCR 检测的极限)，则进入下一步。如果未去除干净，则继续在冰上放置，直到PCR 检测不到细胞核DNA。
12．加入0.32mL预冷的0.5M的EDTA溶液和40mL预冷的洗涤液。
13．4℃ 1000 g离心5分钟，将上清转移到新的预冷的50mL离心管中，4℃　12000 g离心20分钟，沉淀为去除细胞核DNA的线粒体。重悬在2mL 洗涤液中。

四、线粒体精提(B法，需要40000g的超速冷冻离心机)
14．在50mL预冷的塑料离心管中先后加入35mL预冷的密度梯度离心介质(需先加0.1%BSA)。
15．将2mL 线粒体粗提物重悬液铺在密度梯度离心介质上。
16．在超速水平离心机上4℃ 40000g离心45分钟，最上层为黄色或橙色的质体带(如果材料是绿色植物，此带将是绿色)，其下的白色不透明的带即为线粒体，管底沉淀为过氧化物酶体。其示意图如下：

17．用广口吸管(可将1mL 蓝抢头中间剪断后使用)收集线粒体带，注意避开其上的质体带过氧化物酶体沉淀，估计所取含线粒体溶液的体积。
18．在15-20分钟的时间内缓慢加入至少4倍体积的预冷的洗涤液。
19．转入50mL塑料管离心管中，在冷冻离心机上4℃ 15000g离心20分钟，沉淀为线粒体。
20．将线粒体沉淀用软毛笔小心重悬在至少4倍体积的预冷的洗涤液中，在冷冻离心机上4℃ 15000g离心20分钟，弃上清，沉淀即为洗涤后的线粒体精提物。到此步时，线粒体回收率一般在5-15%。
21．将精提的线粒体重悬在1mL预冷的洗涤液中。重悬的线粒体可以立即使用，在冰上最多可放置5-6小时。如果需要长期保存，则可以在线粒体重悬液中加入1/20 体积的DMSO，混匀后分成0.5mL/管，然后放-80℃保存。如此保存的线粒体酶活性和膜完整性在几年内都不会发生变化。

五、线粒体后续处理(本产品不提供相关试剂，实验步骤仅供参考)
22．DNA提取：离心得线粒体沉淀，再按常规的SDS-蛋白酶K酶解，酚*仿抽提，乙醇-盐沉淀的方法制备线粒体DNA。
23．RNA提取：离心得线粒体沉淀，再按常规的Trizol方法制备线粒体RNA。
24．总蛋白提取：按细菌总蛋白提取方法。
25．线粒体内膜，外膜、基质纯化：需要从本公司定做相关产品。
26．其他功能检测：需咨询本公司技术人员是否可以定做相关试剂。


北京BTN130616型Bsu DNA聚合酶，大片段现货关键词：Bsu DNA聚合酶，大片段,Bsu DNA Polymerase，Large Fragment,BTN130616


·碘化丙啶(PI)干粉
编号：BTN130863
英文名称：Propidiumodide，Powder
规格：10mg
PI是一种可对DNA染色的细胞核染色试剂，它在嵌入双链DNA后释放红色荧光。常用于细胞凋亡(apoptosis)或细胞坏死(necrosis)的检测，常用于流式细胞仪分析。尽管PI不能通过活细胞膜，但却能穿过破损的细胞膜而对核染色。PI-DNA复合物的激发和发射波长分别为535nm和615nm。

CAS号：25535-16-4
分子式：C27H34I2N4
分子量：668.39

储存条件：低温运输，-20℃干燥避光保存，有效期一年。

·*仿-异戊醇混合溶液
编号：BTN100804
英文名称：Chloroform-Isoamyl Alcohol
规格：250mL
本品是*仿和异戊醇的24:1混合液，主要用于处理用饱和酚抽提过的核酸或蛋白质溶液，去除其中残留的酚。

储存条件：常温运输和保存、避光。有效期一年。

疑难解答：
Q：酚抽提后一定要用*仿抽提吗？
A：是。酚跟水互溶，所以用饱和酚抽提过的水相中还有残留的酚，如果直接从中沉淀核酸，酚就会污染样品，抑制很多后续的反应。如果再用*仿抽提，则可以去除残留的酚，因为*仿非极性很强，比重大，可以把水相的酚萃取出来并且离心时使有机相(酚*仿混合物)相处于下层，方便吸取位于上面的水相(乙*(代"醚")曾经用于此目的，但比重轻，不好取水相，所以现在基本没人使用)。
Q：异戊醇的作用为何？
A：用于消除振荡中形成的泡沫。


北京BTN130616型Bsu DNA聚合酶，大片段现货关键词：Bsu DNA聚合酶，大片段,Bsu DNA Polymerase，Large Fragment,BTN130616

刃天青指示剂   100ml
ARB11206 人组胺(His)尿液中含量检测 Human Histamine,His ELISA KIT
F030410 胶体金标记山羊抗小鼠IgM抗体 Goat Anti-Mouse IgM*GOLD
ARB12494 大鼠神经生长因子(NGF)定量分析 Rat nerve growth factor,ngf ELISA KIT
水合三*化钌 BICINE 14898-67-0
50-76-*(代"0") 放线菌*(代"素")D Actinomycin D
ARB12474 大鼠前心*肽(Pro-ANP)酶联免疫定量检测 Rat pro atrial natriuretic Peptide,pro-anp ELISA KIT
斐林试剂(Fehling"s solution)   2×100ml
73-22-3 L-Tryptophan  L-色*酸
ARB12806 小鼠γ干扰素诱导蛋白16/p16(IFI16/p16)Elisa定量检测 Mouse interferon-inducible protein 16,ifi16/p16 ELISA KIT
Ficoll 400裂解液(20%)  20%|30%|40%|50% 100ml
ARB10870 人抗核糖体P蛋白抗体(ARPA/RIb-P)尿液中含量检测 Human anti-ribosomal p protein antibody,arpa/rib-p ELISA KIT
电泳级橙黄G溶液(1%)   50ml
E0603 脱纤维裂解山羊血(无菌)
2-脱氧-L-核糖 Catalase(bovine liver) 18546-37-7
BTN100827 菌种保存液 Stain Storage Soluiton
ARB11372 人前列腺素F(PGF)elisa检测操作说明书 Human prostaglandin f,pg-f ELISA KIT
CYB162024 兔抗豚鼠IgG(抗血清) 0.5ml

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