Phusion 超保真 DNA 聚合酶

Phusion^™ High-Fidelity DNA Polymerase
Phusion^® 超保真 DNA 聚合酶

用于快速和高性能 PCR。Thermo Scientific^® Phusion 超保真 DNA 聚合酶由 NEB 公司生产并进行质量控制，兼备高保真度和稳定扩增的性能。

• 保真度是 Taq 的 50 倍
• 稳定的反应体系：优化工作极少，成功率极高
• 提供多种缓冲液，便于针对不同的 DNA 模板建立所需的反应体系

超保真 DNA 聚合酶对于扩增后需要 DNA 序列正确的应用非常重要。其拥有的独特结构包括一种类似火球菌属（Pyrococcus）来源的新型酶，以及一个持续合成能力强的结构域，二者融合在一起，可提高保真度和扩增速度。Phusion DNA 聚合酶是克隆的理想选择，可用于长片段或难扩增的扩增子。Phusion 是目前具有最高扩增准确性的热稳定型聚合酶之一，错配率不到 Taq DNA 聚合酶的 1/50，是火球菌（Pyrococcus furiosus）DNA 聚合酶（1）的 1/6。Phusion DNA 聚合酶具有 5´→3´ 聚合酶活性和 3´→5´ 核酸外切酶活性，可生成平末端产物。

Phusion DNA 聚合酶随附标准 5X Phusion HF 缓冲液，以及 5X Phusion GC 缓冲液，可用于复杂模板或高 GC 含量模板。这些缓冲液都含有 MgCl₂（最终 [1X] 反应浓度为 1.5 mM）。也可使用提供的 DMSO 或 MgCl₂ 溶液优化反应。

使用基于 lacI 的方法（改造自 Frey 和 Suppman 在 1995 年提出的方法）进行保真度测定。

以 50 ng Jurkat 基因组 DNA 为模板，用不同的聚合酶扩增长度为 3.8 kb 的片段。根据产品说明书中的推荐条件建立反应体系。延伸时间已在图中标出（以分钟为单位）。Ladder L 是 1 kb DNA Ladder（NEB #N3232）。

• 产品组分信息

  本产品提供以下试剂或组分：

  

  • 特性和用法

    需要但不提供的材料

    • Deoxynucleotide (dNTP) Solution Mix (NEB #N0447)
    • Nuclease-free Water (NEB #B1500)
    • Template DNA
    • Associated forward and reverse primers
       

    单位定义

    1 单位是指在 74℃ 条件下，30 分钟能使 10 nmol 的 dNTP 掺入酸不溶物所需的酶量。
    

    贮存溶液

    20 mM Tris-HCl
    100 mM KCl
    1 mM DTT
    0.1 mM EDTA
    200 µg/ml BSA
    50% Glycerol
    1X stabilizers
    pH 7.4 @ 25°C

    热失活

    否

    5' - 3' 核酸外切酶

    No

    3' - 5' 核酸外切酶

    Yes

    单位活性检测条件

    25 mM TAPS-HCl（25℃ 时 pH 9.3）、50 mM KCl、2 mM MgCl²、1 mM -巯基乙醇、200 µM dNTP（含 [³H]-dTTP）和 15 nM 已结合引物的 M13 DNA。

  • 优势和特性

    Features

    • 稳定的反应体系：优化工作极少，成功率极高
    • 超高保真度：比 Taq 高 50 倍以上。
    • 快速：显著缩短延伸时间（是 Pfu 酶的 10 倍）
    • 高产量：使用最少量的酶提高产物产量
    • 通用性：可用于常规 PCR 以及长片段或难扩增的模板

    应用特性

    • PCR
    • 克隆
    • 长片段或难扩增片段的扩增
    • 高通量 PCR