北京端粒酶重复片段扩增试剂盒(TRAP试剂盒)现货供应

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

百奥莱博专业生产销*(代"售")北京端粒酶重复片段扩增试剂盒(TRAP试剂盒)现货供应，我公司供应的分子生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。

名称：北京端粒酶重复片段扩增试剂盒(TRAP试剂盒)现货供应
规格：50次
英文名：Telomeric Repeat Amplification Protocol Kit
编号：BTN111009
品牌：百奥莱博
产地：国产|进口
本品是我司在经典TRAP技术基础上改良而得，专门用于快速测定人类细胞端粒酶的相对活性(需要跟对照样品比较)。端粒酶存在于85-90%的肿瘤组织中，因此通过检测端粒酶活性就能早期诊断大多数肿瘤。目前最常用的检测端粒酶活性的方法就是TRAP，它利用端粒酶能在外加的TS模板DNA的末端添加不同数量的TTAGGG序列这一特点，通过PCR检测延伸产物而高效检测端粒酶活性。原理如下：


产品特点：
1．一站式，提供从细胞裂解到PCR的所有试剂，但不含PAGE和银染试剂。
2．一管式操作，端粒酶延伸和PCR在同一体系中完成，方便快捷。
3．提供改良的、长为150bp的内参和含8个端粒序列的合成端粒，可有效排除PCR假阴性。内参长度远大于TRAP产物，不会干扰结果分析。
4．改良的TS模板和PCR引物，极大降低了引物二聚体的形成。
5．既可用于培养细胞，也可用于实体组织。
6．灵敏度高，最低可以检测到10个肿瘤细胞中的端粒酶活性。

试剂盒组成：

 

成分	规格
TRAP细胞裂解液	10mL
PCR Mix 3.0	1.5mL
合成端粒(PC)	50μL
TS-引物混合物(含内参)	300μL
超纯水	1mL
说明书	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：

一、端粒酶的提取
注意：端粒酶是蛋白质和RNA组成的复合体，RNA极容易被降解，因此，提取端粒酶应该跟提取RNA一样，尽量在低温条件下快速操作，并且必须使用RNase-free的耗材，桌面最好用固相RNase清除剂清洁(BTN3090)清洁。
1．对冷冻的实体组织：将50-100mg冷冻组织在液氮中用预冷的研磨器研磨成粉末，再转移到预冷的玻璃匀浆器中，加入200μl预冷的TRAP细胞裂解液，温和手动匀浆数次后冰浴30分钟，每间隔数分钟涡旋振荡一次，共5-6次，然后直接进入第3步操作。为保证裂解效果，可在显微镜下观察。如果组织样品不足50-100mg，可以按比例降低TRAP细胞裂解液的用量。
2．对新鲜的培养细胞和组织：用自备的预冷PBS洗涤105-106个经过胰酶处理的细胞或50-100mg新鲜组织，3000g 4℃离心5分钟，弃上清；加入200μL预冷的TRAP细胞裂解液悬浮细胞或组织。对细胞：涡旋振荡10秒后置冰浴30分钟，每间隔数分钟涡旋振荡一次，共5-6次。对组织：在冰上用玻璃匀浆器轻柔匀浆后冰浴30分钟，每间隔数分钟涡旋振荡一次，共5-6次。如果细胞不足1×106或50-100mg，可按比例降低TRAP裂解液的用量。
3．12000-14000g 4℃离心20分钟。
4．收集160μL上清，先取部分用于测定蛋白质浓度，可通过测定215nm和225nm的光吸收得到，计算公式是蛋白质浓度(μg/μL)=0.144×(A215-A225)×稀释倍数，也可使用BCA法测定蛋白浓度。本试剂盒制备的细胞裂解物的蛋白浓度一般在10-750 ng/μL。知道各样品的蛋白浓度后，可用TRAP细胞裂解液将各样品的蛋白浓度调成一样便于比较，然后按10μL/管分装得到至少15管裂解物，放-80℃冷冻保存(可存放一年)。每个样品可取一管进行热灭活(95℃处理10分钟)后再放-80℃冷冻保存，此管将作为该样品的阴性对照。

二、TRAP反应
5．确定每个TRAP反应的细胞裂解物用量：为便于分析比较，每个TRAP反应所用的蛋白量(或细胞数)必须一样。由于细胞裂解物中一般都有高浓度的不明Taq DNA聚合酶抑制物(TRAP失败最常见的原因)，因此最佳结果往往是用稀释10-1000倍后的细胞裂解物得到。建议用一个样品稀释不同浓度做TRAP预实验。
6．在PCR管中按下表设置TRAP反应(50μL反应体系，以A和B两个样品为例)：

成份	A样品管	A阴性 对照管	B样品管	B阴性 对照管	实验 阴性对照	实验 阳性对照
A样品	2μl	-	-	-	-	-
A阴性对照	-	2μl	-	-	-	-
B样品	-	-	2μl	-	-	-
B阴性对照	-	-	-	2μl	-	-
TRAP细胞裂解液	-	-	-	-	2μl	-
合成端粒	-	-	-	-	-	2μl
TS引物混合物	6μl	6μl	6μl	6μl	6μl	6μl
PCR Mix	25μl	25μl	25μl	25μl	25μl	25μl
超纯水	17μl	17μl	17μl	17μl	17μl	17μl

 注：为避免污染，最好等其他样品加完并盖上盖后再加合成端粒。
7．吹打混匀后进行PCR扩增，扩增条件(仅供参考，用户可优化)如下：

步骤	温度	时间
端粒酶延伸	30℃	30min
端粒酶灭活	95℃	5min
PCR(循环35次)	94℃	30s
	55℃	60s
	72℃	30s

三、PAGE-银染检测及结果解读(本试剂盒不含PAGE-银染检测试剂盒)
8．取5μL PCR反应液进行10%非变性PAGE电泳-银染显色实验(需另购本公司PAGE电泳套装和银染试剂盒)。如果背景高(主要是由反应体系中的蛋白成分引起)，可以先进行PCR产物纯化再进行PAGE电泳和银染。
9．跟预期结果(见下表)比较。如果结果跟下表不一致，则需要按具体情况分析原因。

现象	样品管结果	样品阴性 对照结果	实验阴性 对照结果	实验阳性 对照结果
典型TRAP条带 (条带数不限)	有则有端粒酶活性 无则无端粒酶活性	不出现	不出现	不出现
阳性对照的TRAP 条带(仅8条带)	不出现	不出现	不出现	出现
150bp内参	可出现可不出现	出现	出现	出现

 注：本试剂盒所用引物产生的典型TRAP条带最小条带为59bp。

疑难解答：
1．如果样品管有内参带，但没有TRAP条带，可能是端粒酶活性低或者失活。制备细胞裂解物时可在TRAP细胞裂解液中加入1/100体积的RNase抑制剂以抑制RNase活性，并在端粒延伸反应后增加DNA纯化一步，纯化后的DNA再用于PCR。此两步法TRAP需要用户自备DNA纯化试剂和dNTP。
2．如果样品对照管(端粒酶已经灭活)出现TRAP条带，可能是TRAP产物污染，需要使用洁净的PCR管和PCR试管架。样品制备、PCR设置和电泳需在不同房间进行。也可能是端粒酶没有彻底灭活，建议用RNase酶解法或酶解+热灭活法。
3．实验阴性对照管的实验结果中出现TRAP条带，可能是引物二聚体，可采取两步法TRAP，并且将DNA模板加入到70℃预热的PCR Mix3.0中再进行PCR。
4．实验结果不好时，可以直接采取2步法，先做端粒酶延伸和灭活，然后再纯化DNA，用纯化的DNA做PCR。此法需要用户自备dNTP。

北京端粒酶重复片段扩增试剂盒(TRAP试剂盒)现货供应正在火爆热销，除此之外，为您推荐下别热销产品：

·电泳级丙*(代"烯")酰胺干粉型
编号：BTN100864
英文名称：acrylamide，electrophoresis grade，powder
规格：200mL
本产品是电泳级丙*(代"烯")酰胺溶液(BTN80931)的升级产品。

产品特点：
1.以干粉形式提供分装好的丙*(代"烯")酰胺和甲叉双丙*(代"烯")酰胺，避免了丙*(代"烯")酰胺溶液不能长期存放的问题。
2. 粉末已经提前分装到瓶中，用户只需加入去离子水溶解即得30%的丙*(代"烯")酰胺溶液，用户不需要称量有毒的成分。
3. 丙*(代"烯")酰胺和甲叉双丙*(代"烯")酰胺分开提供，用户可以根据不同实验使用不同的比例。

产品组成：

成分	规格
丙*(代"烯")酰胺干粉	60g
甲叉双丙*(代"烯")酰胺干粉	3g
去离子水	250ml
说明书	1份

储存条件：常温运输，避光保存，有效期一年(配成溶液后只能4℃存放2个月)。

使用方法：
1. 配制 30%丙*(代"烯")酰胺溶液:在本产品提供的装有60 g 丙*(代"烯")酰胺干粉的塑料瓶中加入146mL 去离子水，充分摇晃直到溶解即得200mL 30%丙*(代"烯")酰胺溶液(用手大约摇10-20分钟)。
2. 配制 30%丙*(代"烯")酰胺-甲叉双丙*(代"烯")酰胺(19:1)溶液(30% AB溶液，下同)：
 不同实验需要加入不同比例的甲叉双丙*(代"烯")酰胺。对SDS-PAGE电泳，丙*(代"烯")酰胺与甲叉双丙*(代"烯")酰胺比例一般在19:1左右，因为此时PAGE胶的孔径最小，分辨率最高。制备方法是将3 g甲叉双丙*(代"烯")酰胺干粉加入到200mL上步配好的30%丙*(代"烯")酰胺溶液中(注意：甲叉双丙*(代"烯")酰胺干粉有神经毒性，避免吸入粉末)。配好的30%ＡＢ溶液最好4℃避光保存并在1月内用完。


北京端粒酶重复片段扩增试剂盒(TRAP试剂盒)现货供应关键词：端粒酶重复片段扩增试剂盒(TRAP试剂盒),BTN111009,Telomeric Repeat Amplification Protocol Kit

ARB12428 大鼠胃蛋白酶(PP)酶标法分析 Rat pepsin,pp ELISA KIT
F010202 小鼠抗人IgG FC抗体 Monoclonal Mouse Anti-Human IgG(FC)
*磺隆 MT 64902-72-3
PY02-266-1  支原体半流体培养基基础  1L  
BL1275 4×蛋白上样缓冲液(含β-巯基乙醇)
SJ0189 Dextran T-10  葡聚糖 T-10
D-*基葡萄糖盐*(代"酸")盐 N-Acetyl-L-isoleucine 66-84-2
MES buffer(0.05mol/L,pH6.5)   100ml
ARB11464 人胰岛素(Insulin)elisa检测说明书 Human insulin  ELISA KIT
8-羟基喹*(代"啉")铜盐 Alizarin yellow R sodiu*(代"m") salt 13014-03-4
透析袋27mm，截留分子量14kd   1卷，5M
BL0965 封闭绵羊血清正常(原液)
ARB12327 大鼠免疫球蛋白A(IgA)酶标法分析 Rat immunoglobulin a,IgA ELISA KIT
ARB10274 人干细胞因子/肥大细胞生长因子(SCF/MGF)含量检测 Human stem cell factor/mast cell growth factor,scf/mgf ELISA KIT
北京端粒酶重复片段扩增试剂盒(TRAP试剂盒)现货供应关键词：端粒酶重复片段扩增试剂盒(TRAP试剂盒),BTN111009,Telomeric Repeat Amplification Protocol Kit


·PMSF溶液(10mg/mL)
编号：BTN100833
英文名称：PMSF Solution
规格：5mL
本产品为溶于异丙醇中的浓度为10mg/mL的PMSF溶液，其工作浓度为17-174μg/mL(0.1-1.0mmol/L)。PMSF在水液体溶液中不稳定，半衰期为110分钟(pH7.0)或35分钟(pH8.0)，所以在每一步骤中都必须新鲜加入本产品。本产品作用是抑制丝*酸蛋白酶(如胰凝乳蛋白酶、胰蛋白酶、凝血酶)和巯基蛋白酶(如木瓜蛋白酶)。

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：临用前室温融解本产品，混匀，按照合适比例加入到组织细胞裂解液中，一般建议工作浓度为0.1-1.0mmol/L。

注意事项：
1．PMSF 剧毒，严重损害呼吸道粘膜、眼睛及皮肤，吸入、吞进或通过皮肤吸收后有致命危险。请穿实验服并戴一次性手套操作。一旦眼睛或皮肤接触了PMSF，应立即用大量水冲洗之。
2．PMSF在水溶液中不稳定，应在使用前从贮存液中现用现加入裂解液中。

北京百莱博科技有限公司专业生产供应销*(代"售")生物试剂、化学试剂、抗原抗体、血清血浆、Elisa试剂盒，更多试剂产品需求，欢迎来电咨询选购北京端粒酶重复片段扩增试剂盒(TRAP试剂盒)现货供应。