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辉骏生物
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RNA免疫沉淀RIP实验—高分文章案例多—辉骏生物
RNA免疫沉淀RIP实验原理-辉骏生物
细胞裂解后,孵育结合了抗体的珠子,诱饵蛋白通过其抗体结合到Beads上,同时和诱饵蛋白互作的RNA,也一起沉淀到Beads上。洗涤掉未结合的RNA后,再用洗脱液将RNA-蛋白复合物从Beads洗脱下来,便得到RNA免疫沉淀产物。RIP产物既可用qPCR检测已知RNA,也可以二代测序检测未知RNA。
当没有合适的诱饵蛋白抗体时,可以通过表达融合了flag标签的诱饵蛋白,利用flag标签做免疫沉淀。即细胞过表达Flag-Bait,经裂解后与anti-Flag珠子孵育,诱饵融合蛋白与Beads结合,与诱饵融合蛋白互作的RNA“共沉淀”到Beads上,再经洗涤、洗脱后做qPCR或NGS测序。
RNA免疫沉淀RIP实验流程-辉骏生物

带标签的RNA免疫共沉淀流程图:

RIP技术应用-辉骏生物
筛选或验证与诱饵蛋白互作的RNA
RNA免疫沉淀RIP服务*辉骏优势
1. 近十年服务经验,客户成果发表在Nature Methods,Cell Research等高水平期刊上;
2. 可对围绕RNA结合蛋白开展的整体课题提供全方位方案建议;
3. 自有分子及细胞生物实验平台,能有效制定并执行优质的实验路线;
4. 售后技术支持将一直保持到客户发表文章,确保客户安心进行下游实验及投稿。
RIP实验服务信息-辉骏生物
| 项目名称 |
客户提供 |
结果交付 |
实验周期 |
|
|
实验样本 |
1、诱饵蛋白WB检测图 |
3-4周 |
| RIP seq | 实验样本 诱饵蛋白的IP级抗体 实验信息表(样本信息,诱饵蛋白信息) |
1、诱饵蛋白WB检测图 |
6-7周 |
RNA免疫共沉淀RIP-辉骏生物客户文献
| 1. Bao X.C. et al: Capturing the interactome of newly transcribed RNA.Nature Methods,15(3): 213–220. 2018,IF=28.467. |
| 【研究内容】:客户利用RNA pull down、CoIP等技术,发现lincRNA-p21与HNRNPK结合,并和甲基化酶SETDB1、DNMT1形成复合物,作者通过RIP-qPCR进一步证实了细胞中存在该复合物。该复合物甲基化了多能性基因的启动子序列及相应组蛋白,并改变了它们的表达量,从而进一步影响体细胞重编程过程。 |

相关服务推荐
★ RNA pull down
★ GST pull down
★ DNA pull down
★ ChIP
★ 双荧光素酶检测启动子活性

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文献和实验精度。 实验结论:取极大值,最后结果为X轴重复定位精度为9μm,Y轴重复定位精度为6μm,Z轴重复定位精度为7μm。从实验数据可以看出,各轴重复定位精度均小于设计指标(10μm),满足设计要求。 4、结论 生物芯片技术是目前最具发展潜力的领域之一,开发研制价格低廉操作简便,拥有自主知识产权的点样机器人系统对促进我国生物芯片的研究与推广十分有意义。DY-2003生物芯片点样仪的出现为众多中小型生物研究单位开展生物芯片的研究提供了一个相当不错的选择。它的出现将有助于加快我国在生物芯片领域的发展。
的,使用时戴口罩。不小心占到手上注意立即冲洗,RNase AwayTM试剂可以替代DEPC,操作简单,价格低,且无毒性。只需将RNase AwayTM直接倒在玻璃器皿和塑料器皿的表面,浸泡后用水冲洗去除,即可以快速去除器皿表面的RNase,并且不会残留而干扰后继实验。 4.丙烯酰胺 属中等毒性物质。可通过皮肤吸收及呼吸道进入人体,因此,在搬运和使用中必须穿戴好防护用具,如防毒服,防毒口罩及防毒手套等。丙烯酰胺的危害主要是引起神经毒性,同时还有生殖、发育毒性。神经毒性作用表现为周围神经退行性变化和脑
密封后丢弃。 3.DEPC: DEPC即二乙基焦碳酸酯(diethylprocarbonate),可灭活各种蛋白质,是RNA酶的强抑制剂。DEPC是一种潜在的致癌物质,在操作中应尽量在通风的条件下进行,并避免接触皮肤。DEPC毒性并不是很强,但吸入的毒性是最强的,使用时戴口罩。不小心占到手上注意立即冲洗,RNaseAwayTM试剂可以替代DEPC,操作简单,价格低,且无毒性。只需将RNaseAwayTM直接倒在玻璃器皿和塑料器皿的表面,浸泡后用水冲洗去除,即可以快速去除器皿表面的RNase
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