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辉骏生物
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ChIP实验技术服务选辉骏生物—高分文章案例多 / 服务到投稿 / 价格低
染色质免疫沉淀ChIP技术原理-辉骏生物
先用甲醛交联细胞内“蛋白-DNA”复合物,并用超声波破碎DNA至适合的长度。细胞裂解后,孵育结合了抗体的珠子,诱饵蛋白通过其抗体便结合到了Beads上,同时和诱饵蛋白互作的DNA,也一起沉淀到Beads上。洗涤掉未结合的DNA后,再用洗脱液将DNA-蛋白复合物从Beads洗脱下来,便得到染色质免疫共沉淀产物。DNA-蛋白复合物去交联后,既可qPCR检测已知DNA片段,也可用二代测序与蛋白互作的DNA片段。
当没有合适的诱饵蛋白抗体时,可以通过表达融合了flag标签的诱饵蛋白,利用flag标签做免疫沉淀。即细胞过表达Flag-Bait,经裂解后与anti-Flag珠子孵育,诱饵融合蛋白与Beads结合,与诱饵融合蛋白互作的DNA“共沉淀”到Beads上,再经洗涤、洗脱后做qPCR或NGS测序。
染色质免疫沉淀ChIP实验流程-辉骏生物

带标签的染色质免疫共沉淀流程图:

染色质免疫沉淀ChIP技术应用-辉骏生物
筛选或验证与诱饵蛋白互作的DNA
ChIP实验服务*辉骏优势
1. 近十年服务经验,服务案例众多,客户发文Nature Cell Biology等高质量期刊;
2. 可对围绕DNA结合蛋白开展的整体课题提供全方位方案建议;
3. 自有分子及细胞生物实验平台,能有效制定并执行优质的实验路线;
4. 售后技术支持将一直保持到客户发表文章,确保客户安心进行下游实验及投稿。
ChIP技术服务信息-辉骏生物
| 项目名称 |
客户提供 |
结果交付 |
实验周期 |
|
|
实验样本 |
1、诱饵蛋白WB检测图 |
3-4周 |
| ChIP seq | 实验样本 诱饵蛋白的IP级抗体 实验信息表(样本信息,诱饵蛋白信息) |
1、诱饵蛋白WB检测图 |
6-7周 |
染色质免疫沉淀ChIP实验—辉骏生物客户文献
| 1.Zhuang Q. et al: NCoR/SMRT co-repressors cooperate with c-MYC to create an epigenetic barrier to somatic cell reprogramming. Nature Cell Biology.2018,IF=17.728. |
| 2.Wang R.H. et al: A requirement for breast-cancer-associated gene 1(BRCA1) in the spindle checkpoint. PANS. 2004,IF=9.58. |

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文献和实验背景:真核生物的基因组DNA以染色质的形式存在,研究蛋白质与DNA在染色质环境下的相互作用是阐明真核生物基因表达机制的基本途径。与传统的EMSA技术相比,染色质免疫沉淀技术(CHIP)能真实完整地反映结合在DNA序列上的调控蛋白,是目前研究体内DNA与蛋白质相互作用的最佳方法。原理:是在活细胞状态下以甲醛固定蛋白质-DNA复合物,超声将其随机切断为一定长度范围内的染色质小片段,然后加入目的蛋白抗体,通过抗体沉淀靶蛋白-DNA复合物,通过洗脱的方法得到富集的靶蛋白-DNA复合物,特异性地富集目的
个体定义为 1,如共有 3 个个体生存天数为 2 个月,则应在 X 轴(Months)中写出 3 个 2,Y 轴中每个个体均定义为 1。此外,对照组和实验组 Y 轴应写在不同列中,数据输入后我们即可查看到软件的统计结果,点击 Results 中「Curve comparison」可看到,软件采取的统计方法为「Log-rank (Mantel-Cox) Test」,两组间比较的 P 值为 0.0125,有显著的统计学意义等信息,点击 Graphs 中的 Data 1 即可查看到生存曲线。06 图的合并发表文章
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