DH5α化学感受态细胞价格厂家

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名称：DH5α化学感受态细胞价格厂家
编号：SY0012
规格：100μl×10管
英文名：DH5α Chemically Competent Cell
品牌：百奥莱博
产地：北京
本品是采用大肠杆菌DH5α菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞，可用于DNA的化学转化。本品使用pUC19质粒检测，转化效率可达108 cfu/μg，广泛适用于高效的DNA克隆和质粒扩增，能保证高拷贝质粒的稳定遗传。本品适用于蓝白斑筛选，另对recA1和endA1进行特定的改造使其更能保证克隆DNA的稳定性。

DH5α感受态细胞基因型：F-φ80lacZΔM15 Δ(lacZYA-arg ) U169 endA1 recA1 hsdR17 (rk-, mk+) phoA supE44 λ-thi-1 gyrA96 relA1。

储存条件：-80℃
组份：
DH5α感受态细胞 100μl×10
pUC19(0.1 ng/μl) 5μl

注意事项
1）感受态细胞应保存在-80℃，不可反复冻融和放置时间过长，以免降低感受态细胞的转化效率。
2）整个转化操作，严格根据相应温度及无菌条件要求进行。
3）为确保最高转化效率，整个操作过程应尽量轻柔，并保持低温。
4）为防止转化不成功，可以保留部分连接反应液，以重新转化，最低化实验可能遇到的风险。

使用方法
1）取100 μl感受态细胞置于冰浴中融化。
【注】：一次转化感受态细胞的建议用量为50-100 μl，可以根据实际情况分装使用，应注意所用的DNA体积不要超过感受态细胞悬液体积的十分之一。
2）向100 μl感受态细胞悬液中加入目的DNA，轻轻旋转离心管以混匀内容物，在冰浴中静置30min。
3）将离心管置于42℃水浴中放置45s~60s，然后快速将管转移到冰浴中，使细胞冷却2min，该过程不要摇动离心管。
4） 向离心管中加入900μl无菌的SOC或LB培养基（不含抗生素），混匀后置于37℃摇床振荡培养45 min~60min（150 rpm）， 目的是促使菌体复苏，抗性基因表达。
5）将离心管内容物混匀，吸取100μl已转化的感受态细胞加到含相应抗生素的SOB或LB固体琼脂培养基上，用无菌玻棒轻轻的将细胞均匀涂开。室温正置10 min，待液体被吸收后，倒置平板，37℃培养12-16 h。
【注】：涂布菌液多少可根据转化DNA量来调整。如果预计的克隆较少，可通过离心后吸除部分培养液，重新悬浮菌体后将其涂布在一个平板上。剩余菌液可置于4℃保存，一周之内可重新涂板。

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SY0109 IL6-promoter-Luc荧光素酶报告基因质粒 IL6-promoter luciferase reporter plasmid
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SV1455 dam-/dcm- E. coli 感受态细胞
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KFS328 kFluor647-EdU法细胞增殖检测试剂盒(流式)
SY0573 线粒体绿色荧光探针(Green FM) Mitochondrial Green FM
SY0005 核糖核酸酶A(10mg/ml) RNase A (10mg/ml)
BTN130628 λ核酸外切酶 Lambda Exonulease
HR0599 溶酶体染色试剂盒 Lysosomal Staining Kit
SY0208 BMP-GFP报告基因质粒 BMP GFP Reporter Plasmid
YT292 过氧化*酶检测试剂盒 Catalase Assay Kit
DH5α化学感受态细胞价格厂家关键词：SY0012,DH5α化学感受态细胞,DH5α Chemically Competent Cell


·腔肠素h
编号：SY0235
英文名称：Coelenterazine h
规格：1×500μg
本品为粉末形式供应的腔肠素h（Coelenterazine h），是海肾荧光素酶（Rluc）和Gaussia荧光素酶（Gluc）等多种荧光素酶的作用底物，其发光强度比天然腔肠素高10倍以上，适用于报告基因分析。也是水母发光蛋白的辅助因子，可用于检测活细胞中*离子浓度。

腔肠素（Coelenterazine）是自然界中资源最丰富的天然荧光素，是绝大多数海洋发光生物（超过75%）的光能贮存分子。腔肠素可作为许多荧光素酶的底物，比如海肾荧光素酶（Rluc），Gaussia分泌型荧光素酶（Gluc），以及包括水母发光蛋白（aequorin）和薮枝螅发光蛋白（Obelia）在内的光蛋白（Photoproteins）。其发光原理是：以腔肠素为底物的荧光素酶在有分子氧的条件下，氧化腔肠素，产生高能量的中间产物，并在此过程中发射蓝色光，峰值发射波长约为450~480nm。与甲虫（或萤火虫）荧光素/荧光素酶系统不同，腔肠素/荧光素酶系统不需要三磷酸腺苷（ATP），因此更便于体内生物荧光的研究。因此，腔肠素常用作基于荧光分析的报告基因检测以及活体动物检测的发光底物。

腔肠素还能在酶非依赖性的氧化体系中自发荧光，细胞和组织内的超氧阴离子和过氧化亚硝基阴离子能够增强该自发光信号，因此其也可用来检测细胞/组织内活性氧（ROS）水平。

腔肠素具有能量转移的特性— —生物发光共振能量转移（Bioluminescence Resonance Energy Transfer，BRET），利用此特性，当与荧光蛋白如GFP的突变体（增强的黄色荧光蛋白，EYFP）联合使用，在底物腔肠素存在的情况下，荧光素酶（如Rluc）催化底物发生蓝光，能量随之转移到EYFP上，发出绿光（~530nm）。这两个蛋白的相互作用可以通过Rluc融合蛋白和EYFP融合蛋白两者间的相互关系来评估，适用于研究蛋白-蛋白之间的相互关系。另外，由于BRET的信号可通过比较绿光和蓝光的量来进行测定，消减了因细胞数、细胞类型和其他实验变量而引起的数据变量，适用于高通量筛选如药物开发。

更为重要的一个功能，水母发光蛋白复合物（Aequorin）由22kDa的水母蛋白（Apoaequorin protein）、分子氧和底物腔肠素组成。只有当*离子（Ca2+）与该复合物结合后，腔肠素才能被氧化生成高能量产物Coelenteramide，同时释放出CO2和蓝色荧光（~466 nm）。正是此Ca2+依赖性的反应过程（见图1），使得腔肠素非常适用于监测活细胞内*离子水平。与常规的荧光*离子指示剂相比，其主要具有以下几个优点，
1）能检测较大范围的*浓度 – 从0.1 μM至 >100μM；
2）样品无自体荧光，背景荧光低于使用荧光*离子指示剂；虽然信号比使用荧光*离子指示剂弱，但是通过成像仪器可以得到更高的信噪比，因此具有更高的灵敏度。
3）水母发光蛋白复合体能够稳定维持在细胞内，使其能够进行数小时至数天的*离子监测。



图1. 腔肠素作为水母发光蛋白辅助因子的Ca2+依赖反应流程

目前商业化的腔肠素应用最普遍的是天然腔肠素（Coelenterazine native），另外还有很多腔肠素衍生物如Coelenterazine h、Coelenterazine 400a、Coelenterazine cp、Coelenterazine f、Coelenterazine hcp、Coelenterazine n等被一一合成。理论上这些腔肠素可用于相同的实验，但是由于其发光波长，细胞膜渗透性，光量子效率上的差异，使得其在相同应用上表现出不同的实验效果。因此非常有必要根据具体实验目的选择最合适的腔肠素底物。

英文别名：2,8-Dibenzyl-6-(p-hydroxyphenyl)-imidazo[1,2a]pyrazin-3-(7H)-one; 2-Deoxycoelenterazine; CLZN-h; h-CTZ
CAS：50909-86-9
分子式：C26H21N3O2
分子量：407.48 g/mol
熔点：142℃±2℃(dec)
UV：l max: 433 nm ± 2 nm
外观：浅黄色至橘色粉末
溶解性：溶于甲醇或者乙醇，不可溶于DMSO
纯度：＞99%（TLC）
结构：


运输和保存方法：冰袋运输。粉末-20℃避光干燥保存，最好保存在惰性气体下以避免接触空气。

注意事项

1）腔肠素h粉末或者储存液最好使用惰性气体-氮气或氩气，在密封良好的塑料管中避光保存于-20℃，长期保存于-70℃。管内即使有少量空气进入，也可能造成腔肠素h氧化失活，使量化分析的结果难以在不同试验间进行比较。
2）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。


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·DAPI染液(5mg/ml)
编号：SY0561
规格：1mg
本产品为溶液形式，浓度为5mg/ml。推荐工作浓度为0.5-10μg/ml。DAPI，也称DAPI dihydrochloride，是一种可以穿透细胞膜的蓝色荧光染料，和双链DNA结合后可以产生比DAPI自身强20多倍的荧光。和EB(ethidium bromide)相比，对双链DNA的染色灵敏度要高很多倍。因为DAPI是含有特定AT序列DNA的一种嵌入剂，它能像Hoechst染料一样粘附在DNA双螺旋的小沟区。尽管DAPI不能通过活细胞膜，但却能穿透扰乱的细胞膜而对核染色。DAPI具有很高的光漂白承受水平，能用来检测酵母线粒体DNA，叶绿体DNA，病毒DNA，microplasm DNA以及染色体DNA。DAPI-DNA复合物的激发和发射波长分别为360nm和460nm。

DAPI染色常用于细胞凋亡检测，染色后用荧光显微镜观察或流式细胞仪检测。DAPI也常用于普通的细胞核染色以及某些特定情况下的双链DNA染色。

中文名称：4’,6-联脒-2-*基吲哚二盐*(代"酸")盐
英文名称：4’,6-Diamidino-2-phenylindole, dihydrochloride
CAS：28718-90-3
分子式：C16H17Cl2N5
分子量：350.25

注意事项
1)DAPI对人体有一定刺激性，请注意适当防护。
2) 荧光染料都存在淬灭的问题，建议染色后尽量当天完成检测。
3)为减缓荧光淬灭可以使用抗荧光淬灭封片液。
4)为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

储存条件：-20℃避光干燥，有效期一年。

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