北京细胞活力检测试剂盒(96孔荧光计)说明书

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名称：北京细胞活力检测试剂盒(96孔荧光计)说明书
英文名：Cell Viability Detection Kit
规格：500T|1000T
编号：KFS331
我司细胞活力检测试剂盒提供了一种可靠、灵敏、安全和低成本的快速有效检测细胞活力与毒性的方法。本产品利用灵敏的易被氧化还原的物质通过在细胞生长的培养基中所产生的化学还原反应，将非荧光信号的染料转换成为红色荧光物质，从而检测细胞的存活率。该荧光信号可以用530nm 的激发波激发，在590nm 处可以获发射波。检测所产生的荧光信号是与样品中的活细胞数成正比的。根据不同类型的细胞，本试剂盒最低可以检测到至少40 个细胞/孔，同时保证很好的重现性和灵敏度。

操作说明
以下操作可用作通用指导建议。考虑不同细胞类型与培养条件的差异性，有必要根据实际情况优化您的操作步骤。
1.96 孔细胞培养板每孔100μL 培养基饲养细胞，控制细胞数目在40~10000 个/贴壁细胞，2000~500000 个/悬浮细胞。设置空培养基做对照。
2.加入10μL 检测液至培养基中，37 度避光孵育5-6 小时。
3.荧光微孔板读数530nm 激发，590nm 发射波读数。

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·PD 98,059(MAPKK抑制剂)
编号：KFS297
规格：2mg
PD98059是一种非ATP 竞争性的MEK 抑制剂，IC50为2 μM，特异性抑制MEK-1介导的MAPK 激活；不直接抑制ERK1或ERK2。

·细胞活力快速检测试剂盒(Luminescent)
编号：KFS332
规格：500T
本试剂盒是通过对ATP 进行定量测定来检测培养物中活细胞数目的一种均质检测方法。ATP 是活细胞新陈代谢的一个指标。细胞活力快速检测试剂盒为多孔板而设计，是进行自动化高通量筛选(HTS)、细胞增殖和毒性分析的理想选择。均质检测步骤就是将单一试剂直接加入含有血清的培养细胞中，无需洗涤细胞、去除培养基或进行多步加样操作。在384 孔板上，加入试剂并混合后，10 分钟内，该系统可检测到的每个孔内的细胞数最低为15 个。

均质检测的" 加样-混合-检测" 的操作方案使得细胞裂解和产生的发光信号与存在ATP 量成正比，而ATP 量直接与培养物中的细胞数量成正比。细胞活力快速检测试剂盒产生一种"辉光型" 的发光信号，半衰期一般大于5 小时，因细胞类型和培养基而异。由于信号半衰期长，不需要使用试剂自动进样器，就可灵活地进行连续的或批量的多孔板处理。独特的均质检测方案避免了那些需要多个步骤的ATP 检测方法可能会引入的误差。


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·磺酰罗丹明B/SRB细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒
编号：KFS315
英文名称：Sulforhodamine B Cell Proliferation and Cytotoxicity Assay Kit
规格：500T
磺酰罗丹明是一种能与生物大分子的碱性*基酸结合的水溶性蛋白染料，其结合于细胞中的量的多少可以反映总蛋白量进而反映细胞数的多少。在515nm 波长处的OD 值与活细胞数呈良好的线性关系。

操作方法
1. 以96 孔细胞培养板为例说明
2. 从细胞培养箱内取出待测96 孔细胞培养板，弃去上清；
3. 小心加入固定液，每孔100ul，4℃孵育1 小时；弃去固定液；
4. 加入洗涤液A，每孔100ul，室温下静置30 秒，弃去洗涤液A；重复步骤4；
5. 加入染色液，每孔50ul，室温下避光孵育15 分钟；弃去染色液；
6. 加入洗涤液B，每孔100ul，弃去洗涤液B，此步骤需快速完成；
7. 重复步骤8 5-10 次，直至把多余染料洗尽为止；
8. 加入溶解液，每孔100ul，室温下避光孵育5 分钟；
9. 在波长515nm 处，读取光吸收值；


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·*离子荧光探针
编号：KFS176
英文名称：PBFI, AM
规格：1mg
Na+敏感型染料,SBFI 和K+敏感型染料,PBFI，是**离子浓度测定时所用到的选择性荧光指示剂。这类*并呋*(代"喃")间*二甲*(代"酸")酯的衍生物以及其具有膜透性的乙酰氧基甲基酯形式（AM 酯）可以在生理条件（含多种其他一价阳离子）下，给予**离子浓度以上时间及空间上准确的变化测量精度。

此外，这类染料的激光光谱可以选择用与Fura-2 类似的滤光器与检测仪。.这些**探针指示剂由荧光团与氮冠醚成环状连接，赋予各自的配位体选择性。在pH7，且Na 或K 离子缺失的情况下，SBFI 和PBFI 的消光系数大约在42,000 cm-1M-1（346 nm）。一旦与离子结合，其激发峰显著收窄，最大激发峰向短波段偏移，光能量吸收比值变为340nm/380nm。SBFI 结合Na离子之后荧光强度约增强2.5 倍，但发射光谱最大值基本不变。pH6.5～7.5，这类荧光素的光谱特性基本维持不变，相比较而言，离子浓度和粘度对其影响更大。

虽然这类离子指示剂有相当的选择性，但对于Na 离子亲和的SBFI 来说K 离子同样有一定的影响，PBFI 也是如此。在K 离子生理浓度下，SBFI 对于Na 的Kd 值为11.3mM，而没有K 离子存在时，则为3.8mM。SBFI 对Na 的选择性比K 要高出18 倍。

同样地，PBFI 对K 离子的解离常数也强烈地依赖于Na 的存在。Na 的是否存在，使得PBFI 对于K 离子的Kd 从100mM 到10mM不等。虽然PBFI 对于K 离子的选择性仅仅高出Na 的1.5 倍，但在细胞的生理条件下，通常K 离子的浓度要高于Na 的10 倍以上。所以，在胞内加载探针时，这些探针的Kd 值应与适当的载体做校准。

用无水DMSO 制备PBFI AM 酯类的储液，浓度为10mM。PBFI AM 的相对分子量为1171.由于这类AM 酯形式的探针水溶性比较差，建议溶解时，使用必要的Pluronic F-127.通常可以在进行加载探针到细胞之前，将探针的DMSO 溶液与等体积25%（w/V）的PluronicF-127 混合。探针加载浓度范围：5μM～10μM，孵育时间40 分钟~4 小时。具体的加载条件最好能参考相关文献或者实验摸索，因为该探针在不同的细胞内的Kd 值不同。校准细胞内PBFI 使用K+离子载体缬*酶素。

一般来说，这些指示探针可以用340nm 激发光激发，但在380nm 荧光对于目的离子的浓度尤其敏感。发射峰的检测可以设置在500nm，计算Na+ K+的浓度。

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