R&D Systems 96孔高通量蛋白芯片（Proteme Profiler 96 ）试剂盒技术专辑

互联网2010-02-24

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    省时省力，避免重复多次免疫沉淀或Western Blot实验---在单一样本中可同时检测、筛选16种待测物目标蛋白分子。

    快速——3.5小时被完成实验。

    高通量，微量样本---使用标准的96微孔板形式。

    可应用与目的蛋白的大规模筛选研究——每个试剂盒可检测96个样品，每个试剂盒可最多检测768个指标。

每孔检测8个指标 ————每块板可检测384个指标
每孔检测16个指标 ————每块板可检测768个指标

    高灵敏度与特异性----每个待测蛋白捕获抗体都进行了严格的筛选

    方便的实验数据（光强度）分析-----提供免费的分析软件

一．R&D Systems Proteme Profiler 96检测原理：

R&D Systems Proteme Profiler 96 蛋白芯片96包含一块96微孔板检测板，每个微孔都预先点有一系列捕获抗体构成的抗体芯片列。向微孔内加入实验样本后，样本中的目标蛋白与固定于微孔板上的捕获抗体结合。随后为检测被捕获的蛋白，使用生物素标记的混合检测抗体与HRP偶联的亲和素，或者是HRP偶联的泛抗磷酸酪氨酸抗体进行检测（夹心法）。化学发光底物被用来产生可检测的信号，最好使用化学发光检测成像系统检测微孔中芯片上每个斑点的光强度，每个斑点的光强度大小反应一种相关蛋白表达水平的高低。

图一 R&D Systems Proteme Profiler 96 原理图

图二 R&D Systems Proteme Profiler 96产品展示

二．R&D Systems Proteme Profiler 96蛋白芯片96试剂盒的详细介绍

1、试剂盒成分

    包被捕获抗体的96孔板
    标有HRP的检测抗体
    实验用缓冲液
    浓缩实验用2缓冲液（5×）
    裂解液17
    底物1
    底物2
    洗液浓缩液（25×）
    板封口条

2、试剂的储存

    未开封的试剂盒可以储存2 - 8° C；请在有效期内使用。
    开封后的试剂盒后试剂分别保存，详见英文说明书。

3、其他实验需要的准备

    移液器或枪头
    去离子水或蒸馏水
    水平微孔板摇床
    微量离心机
    数字成像系统

4、主要实验流程

A．准备试剂和裂解液
B．每孔加入50ul-100ul裂解液，在室温水平摇床上孵育2小时
C．进行四次洗板，每次加入400ul 洗液，最后一次洗板结束后，吸干洗液
D．加入50ul抗磷酸化酪氨酸激酶-HRP，室温孵育1小时
E．洗板六次，每次加入400ul 洗液，最后一次洗板结束后，吸干洗液
F．每孔加入50ul底物溶液
G．孵育30秒后成像
H．成像不要超过15分钟

5、实验结果举例

图三 R&D Systems Proteme Profiler 96 实验结果图

A                  　　　　　　　　                      B

图四 R&D Systems Proteme Profiler 96实验结果分析图

使用R&D Systems Proteme Profiler 96 蛋白芯片96检测胰岛素的受体酪氨酸激酶磷酸化水平。

A、使用R&D Systems Proteme Profiler 96 Antibody Array (目录号：ARZ001)同时检测经胰岛素处理5分钟和未经处理的肝癌细胞系HepG2细胞中16种受体酪氨酸激酶的磷酸化水平。每个微孔中的点阵成像如图所示。RS为参照点。
B、蛋白的磷酸化水平通过软件对微孔中抗体芯片的每个斑点的光强度值进行分析后以直方图的形式表现出来。

三、R&D Systems Proteme Profiler 96蛋白芯片96试剂盒产品列表

PRODUCT	DESCRIPTIOM	CATELOG#
Human Phospho-RTK Array 1
Includes the following analytes: EGF R, ErbB2, ErbB3, ErbB4, HGF R, IGF-I R, INSR, M-CSF R, MSP R, PDGF R alpha, PDGF R beta, SCF R, Tie-2, VEGF R1, VEGF R2, VEGF R3	ARZ001
Human Phospho-RTK Array 2
Breast Cancer 8-plex including the following analytes: EGF R, EphB4, ErbB2, ErbB3, ErbB4, HGF R, IGF-I R, MSP R	ARZ002
Human Phospho-RTK Array 3
Angiogenesis 8-plex including the following analytes: EphB4, PDGF R alpha, PDGF R beta, Tie-1, Tie-2, VEGF R1, VEGF R2, VEGF R3	ARZ003