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- 详细信息
- 技术资料
- 库存:
843
- 英文名:
Instant HiFi PCR MasterMix
- 保质期:
12个月
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件:
2~8℃
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
百奥莱博专业生产销*(代"售")北京现货即用型高保真PCR试剂盒特价促销,我公司供应的分子生物学试剂品类齐全,且具有优势价格,欢迎新老客户垂询订购。
名称:北京现货即用型高保真PCR试剂盒特价促销
品牌:百奥莱博
英文名:Instant HiFi PCR MasterMix
规格:1.5mL
编号:BTN90708
本产品是即用型的2×高保真PCR预配反应液,含有除引物、模板以外的所有PCR试剂,包括Pfu DNA聚合酶、dNTPs、MgCl2、反应缓冲液、PCR 增强剂、上样染料等,特别适合于高保真PCR反应。
产品特点:
1. Pfu DNA聚合酶是使用最广泛的高保真酶,其保真度为普通Taq酶的10倍。
2. 使用时只需在加入模板和引物并稀释到1倍浓度即可进行PCR反应,非常方便,简化了PCR的准备工作。
3. PCR反应所必需试剂全集于一管之中,数分钟即可完成反应体系配置。由于加样过程少,有利于减少污染,降低实验误差。
4. 本产品A型含电泳染料,PCR反应液可直接上样电泳,进一步简化了操作。
5. 由于各成分的浓度和比例都经过精心优化,反应的灵敏度高,特异性强。
6.适用于基因的高保真扩增和基因定点突变等实验,得到的PCR产物可用于平末端克隆。
储存条件:低温运输,-20℃保存,保存期限为12个月。
使用方法:
将本产品与用户自备的模板,引物混合液按下列推荐使用量(30μL反应体系)加入PCR 管中即可进行PCR,反应结束后直接取5-15μL电泳检查扩增结果。如果反应体系不是30μL,各成分需要按比例增加或减少。
| 试剂 | 加入量 | |
| 2×高保真PCR MagicMix | 25μL | |
| DNA模板(自备) | 哺乳动物基因组DNA | 0.5-1μg |
| 酵母基因组DNA | 5-500ng | |
| 细菌基因组DNA | 0.5-50ng | |
| 质粒DNA | 5-500ng | |
| PCR回收片段 | 1-100pg | |
| PCR引物(自备) | 10-20pmol each | |
| 补水到 | 30μL | |
参考扩增条件:
| 预变性 | 94℃ | 4min |
| PCR(30个循环) | 94℃ | 30s |
| 50℃ | 30s | |
| 68℃ | 0.5kb/min | |
| 延伸 | 68℃ | 10min |
注意事项:
1. 本产品的Pfu DNA聚合酶比Taq DNA聚合酶的延伸反应速率低,因此我们推荐的扩增延伸反应时间为每kb 需2 分种。
2. Pfu酶3´-5´外切酶活性可降解引物,所以强烈建议在冰上配置完成PCR反应液后,立即放入PCR 仪中进行扩增,扩增完毕后立即进行电泳检测。
3. 本产品扩增产物为平末端,不可以直接进行TA 克隆,可以使用ClionB载体(BTN51104)进行克隆。如需要进行TA克隆,建议对PCR产物纯化后,用加A 试剂盒(BTN60105)加A后再进行TA克隆。
4. 由于Pfu 无 5´到 3´外切酶的活性,所以本试剂盒不能用于实时荧光PCR。
疑难解答:
Q:为何Pfu DNA Polymerase扩增效率不如Taq DNA Polymerase?
A:一是由于Pfu DNA Polymerase 具有3´-5´的外切活性,所以在合成过程中,该酶会随时校对新添加的核苷酸是否配对,影响了合成效率;二是它能通过3´-5´的外切活性使引物部分降解,降低引物结合模板的能力,进而影响扩增效率。三是上面提到的尿嘧叮抑制作用。
Q:使用本产品时还有哪些注意事项?
A:1.引物长度和浓度一般应比常规的PCR 长和高(考虑到被Pfu DNA Polymerase的3´-5´的外切活性降解的因素);
2.最好在反应前加Pfu DNA Polymerase。
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·电泳级β-巯基乙醇
编号:BTN100841
英文名称:b-Mercaptoethanol,EG
规格:1.5mL
本产品是电泳级的b-巯基乙醇原液,专门用于SDS-PAGE蛋白质变性电泳。在过量b-巯基乙醇存在时(一般为5%),它能够打开蛋白质的二硫键,使蛋白质的在SDS-PAGE胶中的泳动速度只取决于分子大小。如果没有足够的b-巯基乙醇,具有二硫键的蛋白质在SDS-PAGE电泳中的分辨率将会出现鬼带。本产品可以用于制备SDS-PAGE和Tricine-SDS-PAGE上样液,也可以用于补充上样液中挥发的巯基乙醇。
SDS和b-巯基乙醇在SDS-PAGE蛋白变性电泳中的作用:
储存条件:常温运输及保存,有效期一年。
β巯基乙醇还原反应示意图:
北京现货即用型高保真PCR试剂盒特价促销关键词:Instant HiFi PCR MasterMix,即用型高保真PCR试剂盒,BTN90708
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