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- 详细信息
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60
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12 个月
- 供应商:
上海西格
- 保存条件:
-20℃
- 规格:
1ml×100
| 货号 | 产品名称 | 规格 |
| XG-P2820 | 1×sPfu MasterMix(purple)3×即用型高保真预混液 | 1ml×100 |
1×sPfu预混液中包括sPfu DNA聚合酶,dNTPs,染料及PCR反应所需的缓冲液,是一种即用型 PCR扩增试剂。
产品特点:
1.高保真酶,扩增速度快,产量高。
2.扩增产物为平末端。
产品储存:-20℃保存,有效期一年。
PCR反应基本步骤:
一般的聚合酶链式反应由20到35个循环组成,每个循环包括以下3个步骤:
变性(Denaturation):
利用高温(93-98℃)使双链DNA分离。高温将连接两条DNA链的氢键打断。在第一个循环之前,通常加热长一些时间以确保模板和引物完全分离,仅以单链形式存在。该步骤时间1-2分钟,接下来PCR仪就控制温度进入循环阶段。
退火或称接合,复性(Annealling):
在DNA双链分离后,降低温度使得引物可以结合于单链DNA上。此阶段的温度通常低于引物熔点5℃。错误的退火温度可能导致引物不与模板结合或者错误地结合。该步骤时间1-2分钟。
延伸(Extension):
DNA聚合酶由降温时结合上的引物开始沿着DNA链合成互补链。此阶段的温度依赖于DNA聚合酶。该步骤时间依赖于聚合酶以及需要合成的DNA片段长度。传统的Taq估计合成1000bp/min、较新的Tbr(来自于嗜热菌Thermus brockianus)约40秒、商业公司生产的融合型聚合酶仅需约10-15秒。
PCR 反应需要使用哪些试剂?
一、模板DNA:PCR反应需要模板DNA,如从细胞、组织、血液中提取DNA等;
二、引物:PCR反应的两个引物,分别与模板DNA的两端配对扩增所需的特定区域,引物也可以合成为TA克隆等过程中使用到的引物;
三、dNTPs:PCR反应中需要四种dNTPs,包括脱氧腺苷酸(dATP)、脱氧胸苷酸(dCTP)、脱氧鸟苷酸(dGTP)、脱氧胞嘧啶酸(dTTP),用于细胞分裂、DNA合成等生物学过程,用于PCR扩增的模板DNA链的延伸和扩增;四、Taq DNA聚合酶:PCR反应需要的聚合酶,一般使用Taq聚合酶,还有一些其他种类的聚合酶如PFU、Phusion等,用于扩增DNA链;
五、PCR buffer溶液:对PCR反应具有缓冲作用,调节反应pH,硫代硫酸氢盐SDS、小分子有机化合物如甲醛,可增强PCR反应特异性,从而提高反应效率;
六、酶切体系:PCR扩增往往涉及到重组、构建和测序等等实验步骤,常常需要进行酶切操作。
七、MARK:一种分子量标准,用来判别DNA片段大小的工具。
八、DNA纯化试剂盒:用于纯化PCR反应产物;
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文献和实验某基因的序列如下,我设计了一对引物,5 TCGGTTTTCACTGGTTCTCATCC 3 3 T CGCACTCCTTTCTCTCGCAATG 5 想扩增的目的片断是3629-4799 (1170 bp,)不知道能否,请大侠们帮忙看一下, 3601 ttttttaatt tcaggatatg gagcttcttc ggttttcact ggttctcatc cagtcctggc 3661 tgaccccagt gcaataccta agcaaggtgt ttacaaacaa
PCR 新手指南——手把手教您如何正确选择合适的 PCR 酶
酶。 图 1.非特异性扩增(左图)与使用热启动 DNA 聚合酶进行的特异性扩增(右图)。 如何为您的 DNA 聚合酶选择正确的形式 还有更多需要考虑的因素。选择可以简化您工作流程的聚合酶形式。PCR 聚合酶形式的选择包括即用型预混液、用于直接凝胶上样的含染料缓冲液以及用于直接 PCR 分析的所有必要成分的完整试剂盒。 使用预混液,您只需添加模板和引物,然后,开始 PCR 实验。如果您想进一步减少操作步骤,使用含染料缓冲液的聚合酶允许 PCR 产物直接凝胶上样(注意:确保染料与下游应用兼容)。直接
骡(Equus asinus×Equus caballus orientalis)
脊椎动物,哺乳纲,奇蹄目,马科。一般指公驴和母马杂交后所生的种间杂种。体型较大,像马,叫声似驴,耳长,鬃毛和尾毛则介于马和驴之间,俗称“马骡”。蹄小、四肢筋腱强韧。不仅耐粗饲料、耐劳,抗病力及适应性强,而且挽力大并能持久。故适于拉车和驮物,骡极少有能繁殖后代的;如是公马和母驴杂交后所生的种间杂种,称为駃騠,体形似驴,故俗称“驴骡”。
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