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- xuanya
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- XY-TE-0729
- 2025年11月22日
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- 详细信息
- 技术资料
- 保存条件：
常温运输和保存
- 保质期：
两年
- 英文名：
Instant HiFi PCR Kit
- 库存：
950
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
即用型高保真PCR试剂盒产品及特点本产品是即用型的2×高保真PCR预配反应液，含有除引物、模板以外的所有PCR试剂，包括PfuDNA聚合酶、dNTPs、MgCl2、反应缓冲液、PCR增强剂、上样染料等，特别适合于高保真PCR反应。
1.PfuDNA聚合酶是使用最广泛的高保真酶，其保真度为普通Taq酶的10倍。
2.使用时只需在加入模板和引物并稀释到1倍浓度即可进行PCR反应，非常方便，简化了PCR的准备工作。
3.PCR反应所必需试剂全集于一管之中，数分钟即可完成反应体系配置。由于加样过程少，有利于减少污染，降低实验误差。
4.本产品含电泳染料，PCR反应液可直接上样电泳，进一步简化了操作。
5.由于各成分的浓度和比例都经过精心优化，反应的灵敏度高，特异性强。
6.适用于基因的高保真扩增和基因定点突变等实验，得到的PCR产物可用于平末端克隆。
即用型高保真PCR试剂盒运输及保存：低温运输，-20℃保存，保存期限为12个月。
自备试剂：模板和引物。
即用型高保真PCR试剂盒使用方法
将本产品与用户自备的模板，引物混合液按下列推荐使用量（30uL反应体系）加入PCR管中即可进行PCR，反应结束后直接取5-15uL电泳检查扩增结果。如果反应体系不是30uL，各成分需要按比例增加或减少。
即用型高保真PCR试剂盒放入PCR仪中进行PCR。由于含有电泳示踪剂（注意：不是溴化乙锭等DNA染料），故PCR结束后可以取5-10uL直接上样电泳,红色染料电泳速度相当于50bpDNA片段。参考扩增条件：
即用型高保真PCR试剂盒注意：
1.本产品的PfuDNA聚合酶比TaqDNA聚合酶的延伸反应速率低，因此我们推荐的扩增延伸反应时间为每kb需2分种。
2.Pfu酶3’-5’外切酶活性可降解引物，所以强烈建议在冰上配置完成PCR反应液后，立即放入PCR仪中进行扩增，扩增完毕后立即进行电泳检测。
3.本产品扩增产物为平末端，不可以直接进行TA克隆，可以使用克必隆B载体(CAT#:51104)进行克隆。如需要进行TA克隆，建议对PCR产物纯化后，用加A试剂盒(CAT#:60105)加A后再进行TA克隆。
4.由于Pfu无5’到3’外切酶的活性，所以本试剂盒不能用于实时荧光PCR。
即用型高保真PCR试剂盒疑难解答
Q：为何PfuDNAPolymerase扩增效率不如TaqDNAPolymerase？
A：一是由于PfuDNAPolymerase具有3’-5’的外切活性，所以在合成过程中，该酶会随时校对新添加的核苷酸是否配对，影响了合成效率；二是它能通过3’-5’的外切活性使引物部分降解，降低引物结合模板的能力，进而影响扩增效率。三是上面提到的尿嘧叮抑制作用。
即用型高保真PCR试剂盒Q：使用本产品时还有哪些注意事项？
A：1.引物长度和浓度一般应比常规的PCR长和高（考虑到被PfuDNAPolymerase的3’-5’的外切活性降解的因素）；2.最好在反应前加PfuDNAPolymerase。
即用型高保真PCR试剂盒相关产品：
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2.使用时只需在加入模板和引物并稀释到1倍浓度即可进行PCR反应，非常方便，简化了PCR的准备工作。
3.PCR反应所必需试剂全集于一管之中，数分钟即可完成反应体系配置。由于加样过程少，有利于减少污染，降低实验误差。
4.本产品含电泳染料，PCR反应液可直接上样电泳，进一步简化了操作。
5.由于各成分的浓度和比例都经过精心优化，反应的灵敏度高，特异性强。
6.适用于基因的高保真扩增和基因定点突变等实验，得到的PCR产物可用于平末端克隆。
即用型高保真PCR试剂盒运输及保存：低温运输，-20℃保存，保存期限为12个月。
自备试剂：模板和引物。
即用型高保真PCR试剂盒使用方法
将本产品与用户自备的模板，引物混合液按下列推荐使用量（30uL反应体系）加入PCR管中即可进行PCR，反应结束后直接取5-15uL电泳检查扩增结果。如果反应体系不是30uL，各成分需要按比例增加或减少。
即用型高保真PCR试剂盒放入PCR仪中进行PCR。由于含有电泳示踪剂（注意：不是溴化乙锭等DNA染料），故PCR结束后可以取5-10uL直接上样电泳,红色染料电泳速度相当于50bpDNA片段。参考扩增条件：
即用型高保真PCR试剂盒注意：
1.本产品的PfuDNA聚合酶比TaqDNA聚合酶的延伸反应速率低，因此我们推荐的扩增延伸反应时间为每kb需2分种。
2.Pfu酶3’-5’外切酶活性可降解引物，所以强烈建议在冰上配置完成PCR反应液后，立即放入PCR仪中进行扩增，扩增完毕后立即进行电泳检测。
3.本产品扩增产物为平末端，不可以直接进行TA克隆，可以使用克必隆B载体(CAT#:51104)进行克隆。如需要进行TA克隆，建议对PCR产物纯化后，用加A试剂盒(CAT#:60105)加A后再进行TA克隆。
4.由于Pfu无5’到3’外切酶的活性，所以本试剂盒不能用于实时荧光PCR。
即用型高保真PCR试剂盒疑难解答
Q：为何PfuDNAPolymerase扩增效率不如TaqDNAPolymerase？
A：一是由于PfuDNAPolymerase具有3’-5’的外切活性，所以在合成过程中，该酶会随时校对新添加的核苷酸是否配对，影响了合成效率；二是它能通过3’-5’的外切活性使引物部分降解，降低引物结合模板的能力，进而影响扩增效率。三是上面提到的尿嘧叮抑制作用。
即用型高保真PCR试剂盒Q：使用本产品时还有哪些注意事项？
A：1.引物长度和浓度一般应比常规的PCR长和高（考虑到被PfuDNAPolymerase的3’-5’的外切活性降解的因素）；2.最好在反应前加PfuDNAPolymerase。
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