即用型荧光定量PCR试剂盒销售

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

百奥莱博专业生产销*(代"售")即用型荧光定量PCR试剂盒销*(代"售")，我公司供应的分子生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。

名称：即用型荧光定量PCR试剂盒销*(代"售")
品牌：百奥莱博
产地：国产|进口
规格：1mL
英文名：Instant Fluorescent qPCR Kit
本产品是基于荧光染料检测的即用型PCR试剂盒，可以对靶片段进行实时定量PCR分析。产品含有经过优化的缓冲液组分、Taq DNA聚合酶、dNTPs、MgCl2及新型荧光染料DNAgreen等所有实时定量PCR所需要的成分，用户只需加入模板和引物即可进行实时定量PCR反应和HRM分析，具有广泛的用途。

产品特点：
1. 方便，用户只需准备模板和引物既可以进行实时定量PCR实验和HRM(High Resolution DNA Melt Curve Analysis)分析。而基于SYBR Green I和LC Green染料的qPCR mix则不能同时用于上述两种实验。
2. 使用第三代饱和型荧光染料，信号强，不会抑制PCR反应。
3.快捷，即用型的预配液使加样操作步骤大大简化，避免了交叉污染，降低实验误差。
4. 各成分的浓度和比例都经过精心优化，反应的灵敏度高，特异性强。能检测到浓度为50拷贝/mL的靶分子。

试剂盒组成：

 

成分	规格
Taq DNA聚合酶(5U/μL)	100μl
易错PCR Mix，10×	300μl
易错PCR专用dNTP，10×	300μl
MnCl2，5mM	300μl
说明书	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，保存期限为6个月。

使用方法：

1.以20μl的qPCR反应体系为例：在一干净的PCR管中，加入下列成分：

反应体系成分	20μl体系	终浓度
qPCR MagicMix，2×	10μl	1×
自备引物一	xμl	0.1-0.5μM
自备引物二	xμl	0.1-0.5μM
自备模板	xμl
自备ROX	2μl	(可以不加)
补超纯水到	20μl

放入荧光PCR仪中进行扩增，并在退火或延长步骤中记录荧光信号。
注意：
a)通常引物浓度以0.2μm可得到较好结果，可以终浓度0.1-1.0μm作为设定范围的参考；通常DNA模板的量以10-100 ng基因组DNA或1-10 ng cDNA为参照，因不同物种的模板中含有的目的基因拷贝数不同，可对模板进行梯度稀释，以确定最佳的模板使用量。
b)ROX 校正染料：如果使用ABI公司的7500，7700和7900三种型号的荧光PCR仪器，则需用自备的ROX进行Ct值校正。对ABI 7700和7900，ROX的最佳浓度为1×(即在每20μl反应体系中加2μl 10×ROX)。对ABI 7500，ROX的最佳浓度为0.05-0.1×(每20μl反应体系加0.1-0.2μl 10×ROX；也可将10×ROX稀释到1×，然后每个反应体系加入1-2μl 1×ROX)。ROX会在溶解曲线中产生噪音，因此，如果出现了杂峰，将软件中“Passive Reference Dye”中的“ROX”选项取消打勾，然后重新分析数据。
对于iCycler IQ，MJ Opticon，MJ Chromo4，MX3000，MX4000，RotorGene3000，RotorGene 6000和LightCycler 480等型号的荧光PCR仪器，ROX不是必须的，但加入的话也不会影响整个PCR分析。

2. 循环步骤：根据扩增子的性质和仪器性能，从以下三个过程中任选一个进行扩增。
两步快速循环法：适用于引物Tm值设计为60℃的反应

循环步骤	温度	时间	循环数
酶活化	95℃	10min	1
变性	95℃	15s	35-40
退火&延伸	60℃	1min

注意：本产品所采用的热启动酶须在预变性95℃、10 min条件下实现酶的活化。退火温度请以60-64℃作为设定范围的参考，发生非特异性反应时，可提高退火温度。
三步快速循环法：适用于延伸步骤温度高于退火步骤的PCR(长引物PCR)

循环步骤	温度	时间	循环数
酶活化	95℃	10min	1
变性	95℃	10s	35-40
退火	56-64℃	30s
延伸	72℃	32s

注意：
·退火温度：建议采用两步法PCR，退火温度60℃进行反应。若提高反应特异性，可提高退火温度，以60-64℃作为设定范围的参考。若因使用Tm值较低的引物等原 因，得不到良好的实验结果时，可尝试进行三步法PCR扩增，三步法的退火温度请以56℃-64℃的范围作为设定参考。
·延伸温度：延伸温度设为72℃通常可以提高扩增效率。但是，对于AT含量大于70%的扩增子来说，延伸温度设为60℃为宜。
通用循环法：这种循环方法适用于几乎所有的荧光PCR仪，也适用于用快速循环法不能扩增的模版。

循环步骤	温度	时间	循环数
酶活化	96℃	10min	1
变性	96℃	15s	35-40
退火&延伸	60℃	1min

3. 数据采集
具体操作按所用仪器推荐的流程进行。本产品中所含的荧光染料在没结合DNA时，最大吸收光谱在471nm，结合DNA时的最大吸收光谱在500nm，最大发射光谱在530nm。

注意事项：
1. 如果使用iCycler，可以不加入FAM。
2. 如果使用Roche LightCycler的玻璃毛细管进行PCR，需加入终浓度为0.5mg/mL的自备BSA。

想要了解更多关于即用型荧光定量PCR试剂盒销*(代"售")的价格、品牌、厂家、说明书、促销信息，请和我们联系。此外我公司还销*(代"售")下面的产品：

·单细胞裂解液(DNA提取)
编号：BTN130803
英文名称：Single Cell Lysis Solution
规格：1mL
本产品为单细胞DNA提取专用裂解液，本裂解液经多次优化，含有多种去污剂、变性剂和盐，可有效抑制核酸酶在裂解过程中对核酸的破坏，维持核酸结构的稳定。纯化所得DNA可用于全基因组扩增(WGA)等实验。本产品足够使用200次以上。

储存条件：低温运输，4℃保存，有效期两年。

·TdT加尾法DNA生物素标记试剂盒
编号：BTN90605B
英文名称：TdT-Tailing DNA Labeling Kit
规格：5次
本试剂盒是基于TdT末端转移酶能够在DNA的3´端添加dNTP尾巴的原理而设计，该反应的示意图如下：


产品特点：
1.快速，15分钟即可完成标记反应。
2. 不但可用于单链DNA和DNA Oligo标记，还可用于3´突出的双链DNA标记，但后者标记效率稍低。
3.可用同位素底物和非同位素底物(生物素和地高*(代"辛")标记的核苷酸等)。
4. 提供不带标记核苷酸、带生物素标记核苷酸和带地高*(代"辛")标记核苷酸三种选择。
5. 同时提供非标记的dATP，用户可以用其调节加尾长短和标记核苷酸掺入比例。
6. 标记的探针可用于电泳迁移率实验(EMSA)、原位杂交(ISH)、Northern Blot(不推荐用于低丰度RNA检测)、小RNA Northern、Southern Blot(不推荐用于单拷贝基因检测)、菌落杂交、斑点印迹杂交分析等。

试剂盒组成：

成分	规格
TdT缓冲液，5×	20μl
TdT(末端转移酶，10U/μL)	10μl
dATP，2mM	5μl
标记核苷酸	(A、B、C不同，见注)
超纯水	1ml
说明书	1份

注：A型用于自选标记，用户需自备标记核苷酸，本产品不提供标记核苷酸；B型提供5μl Biotin-11-dUTP；C型提供含5μl DIG-11-dUTP。

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：
1.在0.2mL微量离心管中按下表设置一个20μl体系的标记反应(如果需要标记更多探针，请增加标记体积而不要增加探针DNA的浓度)：

成份	用量
探针DNA	100-200 pmol
TdT Buffer，5×	4μl
标记核苷酸，1mM (A型需自备标记核苷酸)	1μl
dATP，2mM	(见下注)
TdT末端转移酶(10U/μL)	2μl
超纯水	补到20μl

注：dATP可以不加，但这样得到的加尾全部是标记核苷酸，由于空间阻碍，灵敏度不一定最佳。如果杂交效果不好，掺入一定比例的dATP到标记核苷酸中，以控制标记的密度，提高比活。具体比例如何可以自己优化。
2. 37℃反应15分钟，延长到30分钟也可以。如果没有非标记核苷酸存在，一般可以加尾3-5个Biotin或DIG标记的核苷酸(标记物空间阻碍抑制延长)；如果有在加尾反应中加入一定比例的非标记核苷酸dATP(其他dNTP也可，只是本试剂盒只提供dATP而已)，每条探针上可加上约100个核苷酸，平均含5个标记核苷酸
3. 70℃ 10分钟灭活TdT酶。
4. 如果需要，可以PAGE电泳+银染(相关试剂需要另购)检测标记效率，带标记的探针泳动速度将低于没标记的探针。
5. 如果是非同位素标记，探针不需纯化可以直接用于杂交。如果需要纯化非同位素标记的探针，请不要酚/*仿抽提，因为非同位素标记物一般会使探针DNA进入有机相而丢失。
6. 使用时需将探针以1-8 ng/μL的终浓度加入到杂交液中(如果探针是双链DNA，加入前还需热变性)。如果不立即使用，非同位素标记的探针DNA可-20℃长期放置一年，同位素标记的探针DNA不能放置。


即用型荧光定量PCR试剂盒销*(代"售")关键词：BTN90408,Instant Fluorescent qPCR Kit,即用型荧光定量PCR试剂盒


·*霉素溶液
编号：BTN60207
英文名称：Chloramphenicol Solution
规格：10mL
本产品是浓度为25mg/mL的*霉素溶液，可以加入到细菌液体或固体培养基中培养含*霉素抗性基因的细菌。

作用原理：*霉素通过与细菌核糖核蛋白体的50S亚基23S rRNA的A2451和A2452位点结合，抑制peptidyle transferase活性而阻断蛋白质的合成，最后抑制细菌生长。

抗性机制：抗性基因cat特异性表达*霉素乙酰转移酶(chloramphenicol acetyltrasnferase)，它通过乙酰化*霉素而使之不能与核糖体结合。

储存条件：低温运输，-20℃避光保存，有效期6个月。

·表面RNase清除剂
编号：BTN3090
英文名称：Surface RNase Scavenger
规格：250mL
本品是我司独家开发的特殊的RNase灭活剂。它含有多种成分，能高效灭活固体表面的RNase污染，保障RNA工作环境的清洁。

产品特点：
1.高效。本产品原液能在5分钟内将固体表面的多达100μg的RNase 彻底灭活，效力和速度远远高于常用的DEPC。
2. 此外还能灭活RNase T1、 RNase H、BAL31、 S1、Mung bean nuclease等RNase和DNase。
3. 无毒。跟强致癌的DEPC 不同，本产品对人体没有任何毒害。
4. 使用简单。处理后不需要高压灭菌。

储存条件：常温运输和保存，有效期两年。

使用方法：

水的处理：
直接将固相RNase 清除剂原液按1:1000的比例加入到需要处理的水中，混合均匀后室温放置24小时即可直接使用，得到的水可以配制电泳溶液和裂解液。但如果需要溶解RNA，建议使用液相RNase 清除剂(BTN3091)。
工作平台的清洁：
直接将固相RNase 清除剂原液或10倍的新鲜稀释液喷于台面，5分钟后用普通吸水纸擦净，最后用沾有固相RNase清除剂1000倍新鲜稀释液的吸水纸擦净，晾干。
注意：由于一般的工作平台RNase污染都很严重，建议使用固相RNase 清除剂原液或十倍的新鲜稀释液(新鲜稀释液的存放时间不要超过一天)，不要使用稀释度大于十倍的稀释液。
实验仪器的清洁：
用浸有固相RNase清除剂原液或10倍的新鲜稀释液的纸擦拭仪器表面，再用吸水纸擦净，最后用沾有固相RNase 清除剂1000倍新鲜稀释液的吸水纸擦净，晾干。用固相RNase 清除剂原液处理金属器械的时间不能超过5分钟。
注意：由于一般的实验仪器RNase污染都很严重，百奥莱博建议使用固相RNase 清除剂原液或十倍的新鲜稀释液(新鲜稀释液的存放时间不要超过一天)，不要使用稀释度大于十倍的稀释液。
玻璃和塑料器皿的清洁：
将器皿浸泡在固相RNase 清除剂的10或100倍的新鲜稀释液中，静置处理5分钟后取出，再用固相RNase 清除剂1000倍或10000倍新鲜稀释液浸泡二次以上，倒立晾干后备用。
注意：由于一般的清洗后的玻璃和塑料器皿的RNase污染都比较严重(但一般比工作平台和实验仪器干净)，百奥莱博建议第一次浸泡使用固相RNase清除剂的10倍或100倍新鲜稀释液(新鲜稀释液的存放时间不要超过一天)，不要使用稀释度大于1000倍的稀释液。
移液枪的清洁：
根据生产厂家的使用手卸下移液枪的前端，留下接口塞和圈套后将其浸放在固相RNase 清除剂的10或100倍的新鲜稀释液中一分钟，再用固相RNase 清除剂1000倍或10000倍新鲜稀释液彻底冲洗后，晾干，装回移液枪。
塑料离心管和滴头的清洁:
将反应塑料离心管和滴头充分浸泡在固相RNase 清除剂的1000倍的新鲜稀释液中5分钟以上(最好不要有气泡)，然后再用固相RNase 清除剂1000倍或10000倍的新鲜稀释液充分浸泡两次，试管或离心管可立即使用或干燥后备用。


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·Taq DNA聚合酶
编号：BTN51206
英文名称：Taq DNA Polymerase
规格：500U
本产品是Thermus aquaticus(水生栖热菌)的DNA聚合酶基因在E. coli中表达而得,具有以双链DNA为模板的5´→3´聚合酶活性和5´→3´外切酶活性。Taq DNA聚合酶长为832个*基酸，分子量为94 Kd。该酶可以广泛用于PCR，RT-PCR，加尾反应等。

产品特点：
1．耐热DNA聚合活性，该酶在90℃以上几乎无DNA合成，在75～80℃时延伸率约150个核苷酸，70℃时为60个核苷酸/秒，55℃时为24个核苷酸/秒。在65～68℃并有Mn2+存在时还具有逆转录活性。
2．热稳定，在PCR混合物中95℃保温40分钟仍可保持50%的活性。
3．Mg2+离子依赖性，MgCl₂浓度在2.0mM时该酶催化活性最高。
4．本酶无3´→5´外切活性，不具3´→5´校对功能，碱基错配机率为2.1×10⁻⁴。

产品组成：

成分	规格
Taq DNA聚合酶(5U/μL)	20μl
10×PCR Buffer(含Mg2+)	1ml
MgCl2，25mM	1ml
说明书	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：(以λDNA为模板进行PCR扩增反应为例)

1．按下列组份配制PCR反应液。

Taq DNA聚合酶(5U/μl)	0.25μl
10×PCR Buffer(含Mg2+)	5μl
MgCl₂(25mM)	根据需要补加
自备dNTP(各2.5mM)	4μl
模板DNA	见下
引物1(20μM)	1μl
引物2(20μM)	1μl
灭菌蒸馏水	Up to 50μl

注：10×PCR Buffer含15mM MgCl2(在PCR体系中的终浓度为1.5mM)，是否需要补加MgCl2根据实验决定。但一般不需要补加。
推荐50μL PCR反应体系中模板DNA推荐使用量

哺乳动物基因组DNA	0.5-1μg
酵母基因组DNA	5-500ng
细菌基因组DNA	0.5-50ng
质粒DNA	5-500pg
PCR回收片段	1-100pg

2．PCR反应条件
以λDNA为模板，扩增1kbp的DNA片段的PCR反应条件如下：

注：PCR反应条件视模板、引物等的结构条件不同而各异。在实际操作中需根据模板、目的片段的大小、碱基序列和引物的长短等具体情况，设定最佳的反应条件(温度、时间等)。

注意事项：
PCR的反应液请在冰中配制，然后置于PCR反应仪上进行PCR反应。这种冷启动法可增强PCR扩增的特异性，减少PCR过程中的非特异性反应，能得到良好的PCR结果。

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