无内毒素质粒DNA大量提取试剂盒 DNA纯化

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

百奥莱博专业生产销*(代"售")无内毒素质粒DNA大量提取试剂盒 DNA纯化，我公司供应的分子生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。

名称：无内毒素质粒DNA大量提取试剂盒 DNA纯化
编号：BTN81107
品牌：百奥莱博
英文名：Endotoxin-free plasmid DNA large-scale extraction kit
产地：国产|进口
规格：5次
本试剂盒是整合大提质粒DNA提取试剂盒和菌体内毒素清除剂两产品而成。菌体内毒素清除剂是我司独家推出的产品，在质粒提取前就把细胞壁上的内毒素清除掉，彻底避免了目前通用的先提取DNA+内毒素混合物，再从中纯化质粒DNA的弊端。用本产品提取的质粒DNA，内毒素的污染浓度低，适合于转染等对内毒素的污染敏感的实验。

试剂盒特点：
1. 操作简单，只在经典的柱式质粒DNA提取前，增加菌体内毒素清除一步。
2. 去内毒素效果好，处理一次可以去除99%以上的内毒素。
3.质粒丢失少，产率只比柱式质粒DNA提取试剂盒低5-10%，效果好于先提质粒DNA，再用液相内毒素清除剂处理的方法。
4. DNA可以直接用于转染等实验。

试剂盒组成：

 

成分	规格
菌体内毒素清除剂	200ml
溶液A	25ml
溶液B	25ml
溶液C	35ml
RNase A溶液(10mg/mL)	300μl
吸附柱活化液	12.5ml
大提离心吸附柱	5套
通用洗柱液	100ml
DNA洗脱液3.0	10ml
说明书	1份

储存条件：RNase A溶液需4℃或-20℃保存，其余成分可室温保存，如有沉淀可加热溶解后再使用。

使用方法：
1. 用50mL塑料离心管收集不超过40mL的E.coli 饱和菌液，5000rpm离心5-10分钟，弃上清，得到细菌沉淀。
2. 加入10mL菌体内毒素清除剂，温和混匀后5000rpm离心5-10分钟，弃上清(含内毒素)。
3. 重复上述操作3次，得到的菌体将丢失了绝大部分细胞表面的内毒素。
4. 往细菌沉淀中加入5mL溶液A(第一次使用时需要将RNase A溶液全部加入并混合均匀，未用完的部分放4℃保存)，充分振荡悬浮。注意：充分重悬细胞沉淀(无块状物)对于获得高的质粒产量十分重要。
5. 加5mL溶液B，温和翻转10 余次至透明。若混合液不透明，应减少细菌的用量或室温放臵5-10分钟直到裂解液变透明。注意: 避免剧烈振荡，否则细菌基因组DNA 将断裂为小片段，与质粒难以分离，污染质粒DNA。
6. 加入冰浴的7mL溶液C，颠倒混匀，冰上放臵10分钟。混合物中将有白色絮状物形成。注意不要过分振荡。
7.在等待期间，活化离心吸附柱。在离心吸附柱中加入2.5mL活化液，套上收集管后室温放臵2分钟，然后5000rpm离心2分钟，倒弃穿透液，再将吸附柱套上收集管后待用。活化后的离心吸附柱必须立即使用。如果不活化，质粒得率将低20-40%左右。
8. 6000rpm离心10分钟。如果离心管承受能力强，离心速度还可以适当提高以充分沉淀絮状物。
9. 将上步得到的上清液移入到大提离心吸附柱中，放入50mL收集管中。室温放臵5分钟左右以便让质粒DNA跟膜结合。
10. 6000rpm离心5分钟，质粒DNA 将与大提离心吸附柱中的膜结合。弃穿透液。
11. 将10mL通用洗柱液加入到离心吸附柱中，室温静臵2分钟后6000rpm离心5分钟，弃穿透液。
12. 重复上步一次。
13.室温6000rpm 空甩5分钟，弃穿透液。注意：此步很重要，不能跳过，否则残留乙醇会影响后续实验。
14. 将大提离心吸附柱放入一个干净的50mL塑料离心管中，加0.5mL DNA洗脱液3.0(洗脱液如加热到50-65℃效果更佳)，室温静臵2分钟后6000rpm离心5分钟，收集液即是质粒DNA溶液。
15. 重复上步3-4次可洗脱更多的质粒DNA。DNA 洗脱液3.0 不够可以用TE或超纯水替代。
16. 合并所得质粒DNA，立即使用或-20℃储存。

注意事项：
1．细菌培养时间一般为12-16小时，但接种量大时应减少时间。过度培养会降低质粒的质量甚至导致质粒DNA突变。
2．注意溶液A：溶液B：溶液C的比例为5：5：7。若细菌量增大，需按比例放大这些溶液的使用量。
3．随菌体增多应延长溶液B的作用时间，直至溶液成粘稠透明状。但时间过长会导致质粒DNA变性。
4．加溶液C后形成的白色沉淀中有变性的蛋白质、细菌基因组DNA和细胞碎片，离心后应避免带入到后续处理中。
5．通用洗柱液洗涤离心柱后必须甩干一次，否则残留通用洗柱液中的乙醇会干扰后续实验。
6．质粒的具体产量跟细菌量、质粒拷贝数、质粒大小和操作规范程度密切相关。一般1.5mL 过夜培养菌体可收获约10μg高拷贝质粒。
7．纯化的质粒在电泳中表现为2-3 条带有时甚至为4-6 条带均属正常，未分开的环套质粒，易被误判为基因组DNA。

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·去离子水
编号：BTN81209
英文名称：Deionized water
规格：250mL

·dCTP溶液(100mM)
编号：BTN130917
英文名称：dCTP Solution(100mM)
规格：0.5mL
本产品纯度在98%以上(HPLC检测)，不含DNA内切酶、DNA外切酶、RNA酶和磷酸酶的污染，可以直接用于PCR、RT-PCR、cDNA合成、DNA测序、DNA探针标记等反应。

dCTP分子式为C9H13N3O13P3Na3,分子量是533.1，消光系数为9.1×103M-1×cm-1(pH7.0)。λmax为271nm。

储存条件：低温运输和-20℃保存、有效期一年。

·一站式miRNA柱式大提试剂盒
编号：BTN80906
英文名称：One-stop miRNA column large-scale extraction kit
规格：5次
本试剂盒是在柱式miRNA提取试剂盒(BTN80104)基础上自主开发的大提升级产品，是目前国内外市场上最快速最简单的小RNA分离纯化产品。

试剂盒特点：
1.样品处理量大，一次最多可以处理2g的样品。
2.一步法直接分离纯化小RNA，比Ambion的两步法和PAGE电泳回收法更简单。整个过程只需要二十多分钟。
3. 得到的小RNA 长度大部分在200nt以下，包括 5S RNA、tRNA、miRNA、Pre-miRNA、pri-miRNA、siRNA、shRNA和snRNA等。
4.小RNA 纯净，OD260/280一般都在1.9以上。无基因组DNA的污染。可用于RT-PCR、miRNA 标记、microarray等后续实验。
5.产率一般为20-40μg/100mg动物组织。
6.适用范围广，可以用于动物组织、血液及部分植物组织等实验材料。

试剂盒组成：

成分	规格
溶液A	50ml
溶液B	50ml
溶液C	100ml
离心吸附柱(大提)	10套
通用洗柱液	100ml
RNA洗脱液	5ml
说明书	1份

储存条件：常温运输，4℃保存，有效期一年。

使用方法：
由于离心吸附柱的吸附量限制，本产品每次提取只能处理2 g左右的各种组织，可以在50mL塑料离心管中操作。
1. 新鲜配制裂解液20mL。将溶液A和溶液B按 1:1的比例混合(即溶液A和溶液B各10mL)，然后根据组织细胞类型的不同分为下面几种情况使用。注意：溶液A和溶液B混合后必须立即使用，不要放置，否则会产生沉淀。如果产生沉淀，需加热到65℃使其溶解后才能使用。
a)对贴壁细胞：吸尽培养液，按每10 平方厘米细胞中加入1mL 新鲜配制的裂解液，用枪轻柔吹打数次，确保细胞全部裂解。
b)对悬浮细胞：离心收集细胞，吸尽液体，按每 1-5×106悬浮细胞中加入1mL 新鲜配制的裂解液，用枪轻柔吹打数次，确保细胞全部裂解。如果是fibroblasts或carcinoma cell，1mL 新鲜配制的裂解液的细胞使用量不要超过1×106个细胞。
c)对新鲜的动物组织：先将剪切成小块新鲜组织或液氮保存的组织放入50mL塑料离心管中，每克组织加10mL 新鲜配制的裂解液，用匀浆器匀浆30秒左右。对肝、脾、胰、肾等细胞分裂十分旺盛的组织(细胞中含大量正在复制的DNA)，建议组织的使用量不要超过50mg/ mL 裂解液，否则十分容易产生DNA污染。
d)对新鲜的植物组织：先将剪切成小块新鲜组织或液氮保存的组织放入50mL塑料离心管中，每50-100mg 组织加1mL 新鲜配制的裂解液，用匀浆器匀浆30秒左右。
e)对 RNAhold 保存动物或植物组织：先用纸吸去RNAhold液体后再剪切成小块，放入50mL塑料离心管中，每50-100mg 组织加1mL 新鲜配制的裂解液，用匀浆器匀浆30秒左右。
2. 将裂解物转移至一个干净的50mL塑料离心管中，然后加入0.2-0.3倍体积的自备*仿(1mL 裂解物需0.2-0.3mL *仿)，振荡器上充分振荡混均30秒。
3. 12000～15000g室温离心3～5分钟。
4. 将上清液(约12-16mL)转移到一个离心吸附柱(大提)中以去除大RNA。注意：离心后下层有机相和中间层含有DNA和蛋白质，避免触及，否则将产生蛋白质和DNA污染。为保险起见，可以留下部分上清液不取。同时吸取上清时最好缓慢进行，否则容易吸出交界面的不可见的丝状DNA。本试剂盒提供的离心吸附柱(大提)之间没任何区别，可以随机选一个做大RNA 吸附，另一个做小RNA 吸附。
5. 12000～15000g室温离心离心吸附柱(大提)1分钟，收集管中的穿透液。大RNA 将与离心吸附柱的膜结合，小RNA 将存在于穿透液中。如果需要回收大RNA，请按附录的方法操作，但需要单独购买本公司的通用洗柱液和RNA 洗脱液。
6.在穿透液中加等体积的溶液C，混匀。此时溶液的总体积约30mL。
7. 分一次或分两次将混合液转移到新的离心吸附柱(大提)中，每次转移后需要12000～15000g室温离心1分钟，弃收集管中的穿透液。
 注意：不要使用已经使用过的、用来吸附大RNA的离心吸附柱(大提)。
8. 加 10mL 通用洗柱液到离心吸附柱(大提)中，12000～15000g室温离心1分钟，弃穿透液。
9. 加 10mL 通用洗柱液到离心吸附柱(大提)中，12000～15000g室温离心半分钟，弃穿透液。
10. 12000～15000g室温离心1分钟以甩出残留液体。此步十分重要，否则残留的通用洗柱液会影响 miRNA的使用。
11. 将离心吸附柱(大提)转移到一自备的、50mL RNase-free 收集管中，加入0.5-1mL RNA 洗脱液。
12. 12000～15000g室温离心1分钟，离心管中收集的溶液即为miRNA样品，可以立即使用或存放于-80℃待用。

附录：
1. 用 10mL自备的通用洗柱液洗涤结合有大RNA的离心吸附柱(大提)。
2. 重复上步一次。
3.干甩一次。
4. 加入0.5-1mL RNA 洗脱液，室温放置2-3分钟。
5. 12000～15000g室温离心1分钟，离心管中收集的溶液即为大RNA样品，可以立即使用或存放于-80℃待用。


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·长效期SDS-PAGE还原剂
编号：BTN100910
英文名称：SDS-PAGE Reducing Agent
规格：10mL
在蛋白质PAGE电泳中，还原剂的作用是打断二硫键，可以使蛋白质变性。但是在常规的SDS-PAGE中只有上样液中含有还原剂，PAGE胶中并没有还原剂，蛋白质会在电泳过程中重新形成二硫键，因此电泳条带不清晰。本产品可以克服蛋白电泳此缺点。将本品加入到电泳液中，使蛋白在电泳过程中无法重新形成二硫键。

储存条件：常温运输、4℃保存，有效期一年。

·土壤腐殖酸清除剂
编号：BTN70603
英文名称：Soil Humic Acid Scavenger
规格：250mL
土壤和湖海沉积物中都含有棕黑色或黑色的腐殖酸，它们对PCR等后续反应有极大的抑制作用，所以有效去除土壤中腐殖酸是提取土壤微生物DNA的重要环节。但是目前市场上没有专门的产品，针对这一情况，百奥莱博开发了本产品，专门用于对提取DNA用的土壤进行预处理，以清除腐殖酸成分。

产品特点：
1. 清除效果好，一次能使腐殖酸的浓度降低50%左右。
2.适合于黄色、红色、黑色和棕黑色等各种质地的土壤和河海沉积物。
3. 操作过程简单快速，一次处理只需要10分钟。
4.扩容性好，可小规模操作，也可以大规模操作。

储存条件：常温运输和保存，有效期一年。

使用及效果：
按每1克土壤加10mL本产的比例将样品混合，振荡3～5分钟，3000-5000g室温离心5分钟，弃上清，沉淀可直接用于DNA提取。此操作可以多次重复。

图注：比较水和本产品处理泥碳(腐殖酸含量大于60%)样品的效果，C为用水处理后离心得到的结果，1-5是同一土壤样品用本产品洗涤1-5后所得到的上清液。

图注：用我司土壤DNA提取试剂(BTN60701)提取泥碳样品所得到的DNA溶液，1号样品所用土壤预先用水洗涤过三次，2号样品预先用本产品洗涤过三次。


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