可调式易错PCR试剂盒促销

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百奥莱博专业生产销*(代"售")可调式易错PCR试剂盒促销，我公司供应的分子生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。

名称：可调式易错PCR试剂盒促销
品牌：百奥莱博
英文名：Controlled Error-prone PCR Kit
编号：BTN160903
产地：国产|进口
易错PCR是利用Taq DNA多聚酶不具有3´→5´校对功能的特性，在一定条件下(如不同的dNTP浓度、Mg浓度和MnCl2存在)能够按较高的机率引入随机引入突变。如果有适当的选择方法，则可从构建的突变库选出所需突变体。易错PCR和常规PCR的比较如下：


产品特点：
1. 即开即用，十分简单方便，尤其在生物制药和酶学研究领域显示出了它的优越性。
2. 配方经过精心优化，实验人员在一定范围内可以控制突变率，一轮PCR的突变率范围在2-8突变/1000bp，更高的突变率可以通过多轮PCR达到。
3.可用于连续易错PCR，只需把上一次易错PCR的产物用作下一次易错PCR的模板即可，使每一次获得的小突变累积而产生重要的有益突变。
4.可以扩增的DNA片段更长，达到3kb，对于3kb以上的产物，建议分段扩增。

试剂盒组成：

 

成分	规格
Taq DNA聚合酶(5U/μL)	100μl
易错PCR专用dNTP 2.0,10×	300μl
易错PCR Mix 2.0,10×	300μl
易错PCR专用MnCl2	300μl
易错PCR专用dGTP	300μl
超纯水	1ml

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期为一年。

使用方法：

1. 将模板DNA稀释到1ng/uL。将引物稀释到10uM。
 注意：引物是决定易错PCR成败的关键因素，设计引物时要保证其Tm在70℃，长度在25-30nt之间，GC含量在45%-60%之间，3端GC含量低，并且没有发夹结构。
2. 根据每1000bp的预期突变数按下表确定易错PCR的反应条件中MnCl2和dGTP的用量。表中的A表示易错PCR专用的MnCl2，B表示易错PCR专用的dGTP：

预期突变数	2个	3个	4个	5个	6个	7个	8个
A的用量(μl)	0	1.0	2.5	4.0	4.0	4.0	4.0
B的用量(μl)	0	0	0	1.0	2.0	3.0	4.0

3.以30μL的标准PCR反应体系为例，如果反应体系不是30μL，各成分需要按等比例增加或减少。在一干净的PCR管中，加入下列成分
 注意：可以先计算出超纯水的用量，优先加水

成分	用量
超纯水	根据第2步加
易错PCR Mix,10×	3μl
易错PCR 专用dNTP，10×	3μl
易错PCR 专用MnCl2	根据上步
易错PCR 专用dGTP	根据上步
自备DNA模板(1ng/μl)	1μl
自备PCR引物(10μM each)	1μl each
Taq DNA聚合酶(5U/μl)	1μl

4. 按已经优化的PCR条件进行一定循环数的PCR(循环数与突变率的关系见下表)，然后取5μL电泳检查。如果没有优化的PCR条件，一般可以先尝试下面的PCR条件(对1Kb长的模板而言)：

PCR前变性	94℃ 3分钟
易错PCR(循环30次)	94℃ 1分钟
	45℃ 1分钟
	72℃ 1分钟

注：易错PCR一般不需要热启动，也不需要在PCR结束后做延伸处理。长度每增
加1Kb，时间延长1分钟。易错PCR循环次数决定每个核苷酸位置的突变几率，进而决定每个PCR产物可能的突变位点数，所以所需循环数由客户根据需要改动。
5.电泳检测是否得到预计长度的PCR产物。
6. 克隆片段进行功能筛选、或者克隆后进行测序分析突变率、或者用此轮PCR的产物为模板，进行下一轮的易错PCR。

疑难解答：
Q：现象：没有PCR产物。
A：可能原因：一是引物没有优化，可以重新设计引物；二是模板DNA太少，可以增加用量；三是模板不纯，最好先胶回收；四是溶解DNA的溶液中有EDTA，降低了PCR反应体系的Mg离子浓度，可以适当补加Mg离子。
Q：现象：太多的PCR条带或PCR条带模糊一片。
A：可能原因：一是PCR循环数太多；二是复性温度太低；三是延伸时间太长；四是引物没有优化，可以重新设计引物；五是PCR条件没优化，可以使用touch-down PCR；六是模板有其他DNA污染；七是DNA模板质量不高或者浓度太高。
Q：如果需要更高的突变率，如何办？
A：可以使用连续多次易错PCR来提高突变率。但最好先用胶纯化回收PCR片段,再用于下一轮易错PCR。此外不能用少于千分之一的第一次PCR产物作为第二轮易错PCR的模板，否则多样性将受到影响。第三轮易错PCR最好使用所有第二轮的PCR产物作为模板，但需要在10mL体系中完成(可以分成很多100μL体系进行)。


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·柱式尿液DNA提取试剂盒
编号：BTN90314
英文名称：Urine DNA column extraction kit
规格：50次
尿液中的DNA主要是来自于尿道中脱落的细胞，用尿液DNA进行分子生物学基础研究和临床诊断有很多特殊的优点：
1)尿液收集物是非介入、无创伤性的。
2)从尿液中提取DNA要比从血液中提取DNA更加简单。本产品就是专门用于从尿液中提取基因组DNA的产品，提取的DNA可直接用于PCR反应。

产品特点：
1.操作简单，整个过程室温操作约20分钟，适合大规模样品处理。
2.DNA产率女性一般为53-200ng/mL尿液，男性一般为3-50ng/mL尿液。
3.所提取的DNA纯净，可直接用于PCR、DNA甲基化鉴定、癌症检测等。
4.安全无毒，本试剂盒对人体无毒，无腐蚀性和刺激性气味。
5.性价比高，质量和国外同类产品相当，但价格更便宜。

试剂盒组成：

成分	规格
溶液A	20mL
离心吸附柱	50套
通用洗柱液	50mL
通用洗脱液	5mL
说明书	1份

储存条件：常温运输、4℃保存，有效期一年。

使用方法：
1.收集1.5-50mL尿液样品到适当的离心管中，室温2000rpm离心10分钟。
2.小心吸弃上清，加入300μL溶液A，漩涡震荡，直到溶液变得澄清。
3.将液体转移到离心吸附柱中并静置2-5分钟，以使DNA与膜充分结合。
4.12000rpm离心半分钟，DNA将吸附到膜上，弃收集管中的废液。
5.加入0.7mL的通用洗柱液，12000rpm离心半分钟，弃收集管中的废液。
6.加入0.3mL的通用洗柱液，12000rpm离心半分钟，弃收集管中的废液。
7.12000rpm离心半分钟，甩干残留液体。此步很重要，以去除膜上残留通用洗柱液，否则会影响后续反应。
8.将离心吸附柱置于一新的1.5mL塑料离心管(自备)中，加入30μL通用洗脱液，室温放置2分钟。如果将通用洗脱液在65℃预热后再使用，洗脱DNA的效果会更好。
9.12000rpm离心半分钟，离心管底溶液即DNA溶液。可以立即使用或放冰箱长期保存。


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