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- 详细信息
- 技术资料
- 库存:
大量
- 英文名:
即用型易错PCR试剂盒
- 保质期:
3年
- 供应商:
江西江蓝纯生物试剂有限公司
- 保存条件:
低温保存
- 规格:
100ml
即用型易错PCR试剂盒
产品特点
易错 PCR 是在采用 DNA 聚合酶进行目的基因扩增时,通过调整反应条件来改变扩增过程中的突变频率,从而以一定的频率向目的基因中随机引入突变,获得蛋白质分子的随机突变体。其关键在于对合适突变频率的选择,突变频率太高会导致绝大多数突变为有害突变,无法筛选到有益突变;突变频率太低则会导致文库中全是野生型群体。本产品基于以上原理研制。
它具有下列特点:
1.操作简便;
2. 突变没有趋向性,突变率稳定,突变率为 0.66%;
3. 本产品只适用于扩增 1kb 以下的产物,对于1kb 以上的产物,建议分段扩增。
4. 可用于连续易错 PCR(sequential error-prone PCR)。
成分规格
产品组成
2×Error Prone PCR Mix 1.5 mL
10× MnCl2 300 μL
保存条件
-20℃可保存12个月
使用方法
1.易错PCR体系 推荐反应体系(30μl)
|
试剂 |
用量 |
|
模板 DNA |
10-100ng |
|
Primer F (10 μM) |
1μl |
|
PrimerR(10 μM) |
1μl |
|
2× Error Prone PCR Mix |
15μl |
|
10× MnCl2 |
3μl |
|
ddH2O |
Up to 30μl |
2.易错PCR程序
按用户已经优化的PCR条件进行一定循环数的PCR,如果没有优化的PCR条件,可先尝试下面的PCR程序。
|
过程 |
温度 |
时间 | |
|
预变性 |
94℃ |
3min | |
|
30-60cycles |
变性 |
94℃ |
30sec |
|
退火 |
45℃ |
30sec | |
|
延伸 |
72℃ |
1min/kb | |
3.结果检测:反应结束后取5 μl反应产物,加入适量上样缓冲液,然后进行琼脂糖凝胶电泳,检测是否得到预期片段大小的PCR产物。
4. 胶回收易错PCR扩增产物、克隆并对单菌落进行功能筛选或测序分析、如果需要增加突变率,可以突变后的DNA为模板,进行连续易错PCR。
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