即用型易错PCR试剂盒

即用型易错PCR试剂盒

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  • ¥1918
  • gelatins/江蓝纯
  • JLC-G13306
  • 国内
  • 2025年07月08日
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    • 英文名

      即用型易错PCR试剂盒

    • 保质期

      3年

    • 供应商

      江西江蓝纯生物试剂有限公司

    • 保存条件

      低温保存

    • 规格

      100ml

    即用型易错PCR试剂盒
    产品特点
    易错 PCR 是在采用 DNA 聚合酶进行目的基因扩增时,通过调整反应条件来改变扩增过程中的突变频率,从而以一定的频率向目的基因中随机引入突变,获得蛋白质分子的随机突变体。其关键在于对合适突变频率的选择,突变频率太高会导致绝大多数突变为有害突变,无法筛选到有益突变;突变频率太低则会导致文库中全是野生型群体。本产品基于以上原理研制。
    它具有下列特点:

    1.操作简便;
    2. 突变没有趋向性,突变率稳定,突变率为 0.66%;
    3. 本产品只适用于扩增 1kb 以下的产物,对于1kb 以上的产物,建议分段扩增。
    4. 可用于连续易错 PCR(sequential error-prone PCR)。
    成分规格
    产品组成 
    2×Error Prone PCR Mix 1.5 mL 
    10× MnCl2 300 μL
    保存条件
    -20℃可保存12个月
    使用方法
    1.易错PCR体系 推荐反应体系(30μl)

    试剂

    用量

    模板 DNA

    10-100ng

    Primer F (10 μM)

    1μl

    Primer(10 μM)

    1μl

    2× Error Prone PCR Mix

    15μl

    10× MnCl2

    3μl

    ddH2O

    Up to 30μl

    2.易错PCR程序
    按用户已经优化的PCR条件进行一定循环数的PCR,如果没有优化的PCR条件,可先尝试下面的PCR程序。

    过程

    温度

    时间

    预变性

    94℃

    3min

    3060cycles

    变性

    94℃

    30sec

    退火

    45

    30sec

    延伸

    72℃

    1min/kb

    3.结果检测:反应结束后取5 μl反应产物,加入适量上样缓冲液,然后进行琼脂糖凝胶电泳,检测是否得到预期片段大小的PCR产物。
    4. 胶回收易错PCR扩增产物、克隆并对单菌落进行功能筛选或测序分析、如果需要增加突变率,可以突变后的DNA为模板,进行连续易错PCR。

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