北京BTN140384型农杆菌GV3101化学感受态细胞价格

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北京百奥莱博科技有限公司专业生产供应北京BTN140384型农杆菌GV3101化学感受态细胞价格，产品信息：

类别：克隆与表达

英文名：E.coli GV3101 Chemical Competent Cell

产品名	产品编号	包装规格
农杆菌GV3101化学感受态细胞	BTN140384	10×100μL

编号：BTN140384

规格：10×100μL

品牌：百奥莱博

产地：国产|进口

英文名：E.coli GV3101 Chemical Competent Cell

 本产品为GV3101农杆菌化学感受态细胞，其具有利福平和庆大霉素抗性，适用于拟南芥、烟草、玉米、土豆等植物的转基因操作，经pCAMBIA2301质粒检测转化效率高达104cfu/μg。

 

基因型：C58(rifR)Ti pMP90(pTiC58DT-DNA)(gentR/strepR)Nopaline。

 

储存条件：干冰运输、-80℃保存，有效期一年。

 

自备试剂：质粒DNA、液氮等

 

使用方法：

 

转化前准备

1. 冰水浴和37℃水浴。

2.液氮或干冰/乙醇混合物。

3. 将抗性平板在 28℃培养箱中平衡至少15分钟。

转化方法

1. 取-80℃保存的农杆菌感受态细胞于冰水浴中融化。

2. 无菌条件下，向刚刚融化的感受态细胞悬液中加入需要转化的质粒，每100μL感受态细胞加1μg质粒DNA，轻柔混匀。冰水浴中静置10分钟。

3. 将离心管置于液氮中速冻 5分钟(注：也可以用干冰和无水乙醇混合物替代液氮)。

4. 迅速将离心管置于37℃水浴静置中5分钟，不要晃动水面。然后快速转至冰水浴中静置5分钟。

5. 加入800μl 无抗生素的2×YT或LB液体培养基，28-30℃振荡培养2~3小时。使菌体复苏，表达抗性。

6. 5000rpm离心1分钟收菌，保留100μl左右上清，轻轻吹打重悬菌体，均匀涂布到含有相应抗生素的LB 固体培养基平板上，待平板中的液体完全吸收后，倒置平板，28-30℃培养48-72小时。

 注：当平板只含有50μg/mL kan时，28℃培养48小时即可；平板中同时加入50μg/mL kan，20μg/mL rif时，需 28℃培养 60h；如果使用的平板含有50μg/mL rif 则需要 28℃培养 72-90小时。

 

注意事项：

1. 加入质粒时体积不应大于感受态体积的1/10 ；质粒不纯或存在乙醇等有机物污染，转化效率急剧下降；质粒增大一倍，转化效率下降一个数量级。

2. 混入质粒时应轻柔操作。

3.转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。

4. 利福平浓度不应高于25μg/μL，过高的利福平浓度不利于农杆菌生长，会降低其生长速度和转化效率。本公司感受态计算转化效率时所用平板只含有 50μg/mL kan，若所用平板含有 20μg/mL rif 则转化效率降低到1/2。

5.培养基中加入利福平的目的是防止杂菌生长、筛选农杆菌；根据所用菌株抗性加入链霉素或庆大霉素可防止 Ti质粒丢失，但链霉素不利于农杆菌的转基因操作，所以一般培养农杆菌时不考虑链霉素或庆大霉素，Ti质粒丢失的概率极低(可以忽略)。

6.相关抗生素配方：

 

抗生素	配方	原液	工作液
羧苄青霉素(carb)	双蒸水溶解	50mg/mL	50μg/mL
硫*(代"酸")卡那霉素(kan)	双蒸水溶解	50mg/mL	50μg/mL
链霉素(strep)	双蒸水溶解	10mg/mL	50μg/mL
利福平(rif)	DMSO溶解	10mg/mL	20μg/mL
庆大霉素(gent)	双蒸水溶解	20mg/mL	40μg/mL

 

北京BTN140384型农杆菌GV3101化学感受态细胞价格专业优质供应商：北京百奥莱博科技有限公司

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编号	类别	名称
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BTN130972	RNA纯化	miRNA分离纯化试剂盒(凝胶法)
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BTN130846	RNA纯化	白色念球菌RNA提取试剂盒

 

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