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- 技术资料
- 库存:
732
- 英文名:
Yeast Chemical Competent Cell Preparation Kit
- 保质期:
一年
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件:
-80℃
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
北京酵母化学感受态细胞制备试剂盒(A型)哪里卖由专业试剂供应商北京百奥莱博提供,用于生化研究,本产品质量好,且极具价格优势,深为用户称道,了解更多酵母化学感受态细胞制备试剂盒(A型)等克隆与表达产品请联*(代"系")我司咨询订购。
名称:酵母化学感受态细胞制备试剂盒(A型)
英文名:Yeast Chemical Competent Cell Preparation Kit
规格:20次
编号:BTN81109A
产地:国产|进口
本酵母化学感受态细胞制备试剂是一种通过化学处理,高效快速制备酿酒酵母化学感受态细胞,用于长期冻存以备后续转化的产品。
产品特点:
1.一次制备,-80℃保存,多次使用,免去每次转化都要制备酿酒酵母感受态细胞。
2. 操作简单,单溶液制备,除酵母培养的时间外,整个操作只需要30分钟
3. 主要用于酿酒酵母S. cerevisiae,也适用于其他多种实验用酵母菌株,包括S. pombe、C. albicans、Pichia pastoris等。
4. 受体酵母可以不含质粒,也可用于携带有选择性质粒的酵母。
5. 对酿酒酵母,最高转化效率可达到0.2-1×105个转化子/μg质粒DNA。对其他酵母,效率稍低,范围在100-2000个转化子/μg质粒DNA。
6. 得到的感受态细胞可以用各种线性或环状酵母穿梭质粒DNA进行转化,例如YIp,YRp,YCp,YEp和YAC等。
7.可以用于酵母双杂交、定点突变(Site-Directed Mutagenesis)、基因破坏(Gene Disruption)、等位突变基因修复(Mutant Allele Recovery)等实验。
8. 本产品可以制备20 只酵母感受态细胞(需要200mL 酵母培养液),其中A型只用于制备感受态细胞,B型还带高效转化液。
储存条件:常温运输和保存,有效期一年。
产品组成:
| 成分 | 20T(A) | 20T(B) |
| 制备液A | 120ml | 120ml |
| 制备液B | 6ml | 6ml |
| 制备液C | 10ml | 10ml |
| 转化液A | 无 | 30ml |
| 转化液B | 无 | 30ml |
| 说明书 | 1份 | 1份 |
自备试剂:YPD培养基
使用方法:
一:酵母化学感受态细胞的制备
说明:按本方法制备1 管酵母化学感受态细胞就需要OD600达到0.6-1.0的新鲜酵母培养液10mL,用户需根据所需酵母感受态细胞的数量决定培养细胞的体积。如果超过10mL,则制备液的使用量需要按比例增加。
1. 挑取酵母受体菌的新鲜的单菌落(4℃放置不超过3周的也可以),接种到装在50mL离心管中的10mL的自备的YPD培养基中。
2. 30℃摇晃培养,摇床速度250rpm/分钟,直到OD600达到0.6-1.0(相当于0.6-1×10⁷细胞/mL)。
3.室温3000rpm离心5 min,弃上清得酵母细胞沉淀。
4. 新鲜制备适量的酵母感受态制备工作液。对10mL 酵母需要5.25mL的工作液,其配制方法是:将4.75mL 制备液A、0.25mL 制备液B和0.25mL 制备液C 加入到一个无菌的离心管中后充分震荡混匀即可。酵母感受态制备工作液可放室温待用。
5. 用0.5倍体积的新鲜配制的酵母感受态制备工作液洗涤酵母细胞沉淀一次(对10mL 酵母则需要5mL 酵母感受态制备工作液)。即混合后振荡1分钟,室温3000rpm离心3分钟,去上清得洗涤后的酵母细胞沉淀。
6. 再用0.02倍体积的酵母感受态制备工作液充分重悬菌体(对10mL酵母,则需要0.2mL 酵母感受态制备工作液)。
7. 按每管0.2mL 分装到冷冻管中,放入保温冰盒中冷却半小时后再放入-80℃冰箱待用。0.2mL的感受态细胞足够1次转化使用。注意:放入保温冰盒的目的是使温度缓慢下降,急冻将使转化效率降低,这点跟大肠杆菌感受态制备过程不同。
二:化学转化酵母感受态细胞(只有B型提供相关试剂)
1. 将总体积不超过20μl的0.1-5μg质粒DNA 加到刚从-80℃冰箱取出的、还处于凝固状态的0.2mL 酵母感受态细胞上。注意:最好同时做一个不加质粒DNA的阴性对照组。
2.室温充分振荡直到凝固的感受态细胞完全融化。注意:此步非常关键,如果能在恒温振荡器上37℃振荡5分钟,则效果更好。
3. 加入1.4mL转化液A,轻柔颠倒混匀一分钟。
4. 30℃培养1小时。
5.室温3000g离心5秒,弃上清。
6.在酵母细胞沉淀中加1.0mL转化液B,振荡一分钟。
7.室温3000g离心5秒,弃上清。
8.在酵母沉淀细胞中加入适量(如100μl)的转化液B,混匀后在在选择培养基上全部涂盘。
9. 30℃培养3-5 天后即得酵母转化菌落。
关键词:酵母化学感受态细胞制备试剂盒,Yeast Chemical Competent Cell Preparation Kit,酵母化学感受态细胞制备试剂盒(A型),BTN81109A
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