- ￥300
- 2026年01月01日
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- 详细信息
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- 服务名称：
实时荧光定量PCR服务
- 提供商：
威斯腾生物
（1）对于检测普通基因表达情况的样本，原价：300 元/样本，现价：210 元/样本
（2）引物合成，费用全免。
（3）免费提供3次重复的实验结果。
（4）引物和探针设计免费。
（5）RNA抽提费用全免。
（6）免费提供RNA保护试剂，上门服务取样。
注：
1、此活动不能与其他活动同时参与；
2、样本数量必须大于 5，检测的基因数量不小于 3 个
3、此活动的最终解释权归威斯腾生物所有。
一、荧光定量PCR
荧光定量 PCR（也称 TaqMan PCR,以下简称 FQ-PCR）是美国 PE（Perkin Elmer）公司 1995 年研制出来的一种新的核酸定量技术，该技术是在常规 PCR 基础上加入荧光标记探针来实现其定量功能的，与变通 PCR 相比，FQ-PCR 具有许多优点。与普通 PCR 相比，FQ-PCR 具有许多优点：1、封闭反应，无需 PCR 后处理。2、特异性强，灵敏度高。3、采用对数期分析，摒弃终点数据，定量准确。4、定量范围宽，可达到 10 个数量级。5、仪器在线式实时检测，结果直观，避免人为判断。6、可实现一管双检或多检。7、操作安全，缩短时间，提高效率。荧光定量 PCR 是通过对PCR 扩增反应中每一个循环产物荧光信号的实时检测从而实现对起始模板定量及定性的分析。
二、主要实验步骤如下：
1、设计并合成 Realtime PCR 引物。
2. 引物溶解后使用 Promega 的 TaqDNA 聚合酶进行含 SG（SYBR®； Green）的 PCR 反应的优化。
3. 客户样品 RNA 抽提 。
a.实验对象为组织样品，取适量（50-100 mg）新鲜组织样品或正确保存的组织样品加 1 ml 的 RNA 抽提试剂Trizol（Invitrogen），匀浆后抽提 RNA。
b.实验对象为细胞样品，每份样品取 1×106～1×107 细胞，PBS 清洗细胞，去 PBS 加 1 ml 的 RNA 抽提试剂 Trizol（Invitrogen），裂解后抽提 RNA 。
4. RNA 质量检测
a. 紫外吸收测定法测定 RNA 在分光光度计 260 nm 和 280 nm 处的吸收值，以计算其浓度并评估 RN A纯度 。
b. 使用ambion公司的甲醛电泳试剂进行变性琼脂糖凝胶电泳，检测RNA纯度及完整性。
5. 使用逆转录酶（Promega）进行反应，将样品RNA逆转录为cDNA。
6. 制备标准曲线样品：
进行相对定量，需要先将样品的目的基因以及管家基因进行PCR扩增，其产物进行梯度稀释用于做标准曲线。
7. 标准曲线样品和待测样品分别加入到含SG的RealTime PCR反应液中，进行RealTime PCR扩增和检测。
8. 检测结果进行标准曲线分析：以对待测样品的目的基因进行定量。相对定量实验需要进一步用样品的目的基因测得值除以管家基因测得值以校正误差，所得结果代表某样品的目的基因相对含量。
9. 提供实验报告：包括详细的实验方法及实时荧光定量 PCR 实验结果的相关图表 。
三、荧光定量 PCR 中的一些术语
CT值：荧光信号有统计意义显著增长(即穿过阈值线)时的循环次数，或者说是从基线到指数增长的拐点所对应的循环次数。
阈值：阈值的默认设置是 3-15 个循环的荧光信号的标准偏差的 10 倍。
CT值与起始模板的量成线性关系。
四、客户须知：
1、请您提供新鲜的且尽量多的材料，或直接提供纯化好的总 RNA 或 DNA（大于 5 ug/样本）。如是如织：100－200 mg
2、请通过 EMAIL 提供已知的全长基因序列。
3、请提供详细背景资料：DNA/RNA 来源，丰度。
五、结果提供：
1、实验详细步骤，和相关数据。
2、标准曲线，扩增曲线，溶解曲线。
3、完整的实验报告（含软件分析结果）
（威斯腾生物--原代培养、细胞敲除、模式动物一站式科研服务！）
实验服务流程
威斯腾生物服务项目
| 分子生物学类 | 蛋白质与免疫学 | 动物实验 |
| 实时荧光定量PCR | 单克隆抗体制备 | 帕金森疾病模型 |
| 免疫共沉淀（Co-IP） | 多克隆抗体制备 | 抑郁症动物模型 |
| ELISA（酶联免疫吸附法）技术 | Western-blot 实验服务 | 脊髓损伤模型 |
| 生化指标检测 | 蛋白双向电泳实验服务 | 脑外损伤模型 |
| 双荧光素酶报告基因检测 | 原核蛋白表达纯化 | 骨神经损伤模型 |
| 染色质免疫共沉淀（ChIP） | 真核蛋白表达纯化 | 心肌缺血模型 |
| GST pull Down | ITRAQ定量蛋白质组学 | 心力衰竭模型 |
| SLAC蛋白组学 | 肺动脉高血压动物模型 | |
| 高血压模型 | ||
| 病毒类 | 实验课题整体外包 | 粥样动脉硬化模型 |
| 过表达/干扰慢病毒包装纯化 | 整体课题外包 | 大脑中动脉阻塞模型 |
| 过表达/干扰腺病毒包装纯化 | 细胞整体实验外包 | 慢性之气管炎模型 |
| 逆转录病毒包装纯化 | 动物整体实验外包 | 过敏性哮喘模型 |
| 腺相关病毒包装纯化 | 肺炎大鼠模型 | |
| 肝炎-肝硬化-肝癌模型 | ||
| 蛋白芯片 | 原代细胞培养 | 肝纤维化模型 |
| 细胞因子芯片 | 骨髓间充质干细胞培养 | 胆结石模型 |
| 生长因子芯片 | 脂肪干细胞培养 | 急性胰腺炎模型 |
| 信号通路磷酸化水平检测芯片 | 心肌成纤维细胞培养 | 急性肾衰竭模型 |
| BioPlex悬浮芯片 | 软骨细胞培养 | 体内血栓模型 |
| 生长因子芯片 | 血管内皮细胞培养 | 关节炎模型 |
| 炎症因子芯片 | 神经元细胞培养 | I型和II型糖尿病模型 |
| 血管生成因子芯片 | 内皮组细胞原代培养 | 裸鼠成瘤 |
| 凋亡因子芯片 | 基因编辑动物 | |
| 趋化因子芯片 | 电生理相关服务 | 动物整体实验服务 |
| HuProt TM 20K人类蛋白组芯片 | 膜片钳实验 | |
| 细胞生物学 | 高通量测序 | 代谢组学 |
| 细胞原代培养 | mRNA测序 | 气相色谱GC/MS |
| MTT检测 | LncRNA测序 | 液相色谱LC/MS |
| 细胞凋亡检测 | 全基因组测序 | 核磁共震NMR |
| 细胞周期检测 | RNA-Seq测序 | |
| 细胞克隆形成实验 | 外显子测序 | 影像学相关实验 |
| Transwell细胞迁移/侵袭 | 16s扩增子测序 | Micro-CT |
| 流式分选 | Small RNA测序 | 小动物活体成像 |
| CCK8/XTT检测 | 宏基因组测序 | 核磁共振 |
| 台盼蓝检测细胞活性 | 单细胞测序 | PET-CT |
| 药物筛选细胞学实验 | circleRNA测序 | |
| 细胞粘附性检测 | 甲基化测序 | 基因编辑动物 |
| 细胞划痕实验 | 条件性敲除小鼠/大鼠 | |
| 细胞生物学整体实验 | 全基因敲除小鼠/大鼠 | |
| 细胞成管实验 | ||
| 病理类 | CRISPR/Cas9细胞敲除/敲入 | 基因芯片 |
| 扫描电镜 | 基因定点突变细胞系 | LncRNA芯片 |
| 透射电镜 | 单基因敲除细胞系 | miRNA芯片 |
| HE染色 | 多基因敲除细胞系 | mRNA芯片 |
| 免疫组化 | 目的基因敲入细胞系 | 甲基化芯片（限人和小鼠来源样本） |
| Tunel（原位末端凋亡法）检测 | 报告基因敲入细胞系 | SNP芯片（限人和小鼠来源样本） |
| 激光共聚焦 | miRNA/LncRNA敲除细胞系 | |
| 免疫荧光 | ||
| Masson染色 | CRISPR/Cas9动物敲除/敲入 | 科研方案设计与SCI相关服务 |
| 原位杂交 | 基因敲除大鼠/小鼠 | 科研文献论著翻译 |
| 荧光原位杂交 | 基因敲入大鼠/小鼠 | SCI论文翻译润色服务 |
| 特殊染色（PSA、茜素红、阿尔新蓝等） | 临床实验/科研实验设计方案指导 | |
| 行为学检测 | 药物筛选服务项目 | 药效学评价 |
| 水迷宫实验 | 高通量自动药物筛选平台 | 神经系统药物药效学评价 |
| 旷场实验 | 细胞高内涵药物筛选平台 | 抗肿瘤药物药效学评价 |
| 重复性刻板行为检测 | 蛋白质组学靶标研发平台 | 心血管系统药物药效学评价 |
| 动物跑台检测 | 分子药理研究平台 | 泌尿系统药物药效学评价 |
| 强迫游泳 | 生物膜片钳药物筛选平台 | 内分泌系统药物药效学评价 |
| 常规药物体外筛选 | 抗炎免疫药物药效学评价 |
【本平台合作项目】
分子生物学、细胞生物学、基因敲出/入、模式动物、SPF动物保种、病理学检测、免疫学检测、影像学检测、原代培养、细胞药筛、CRISPR/Cas9基因编辑、基因芯片、高通量测序、蛋白组学、代谢组学、高通量高内涵筛选、药效学评价、药理毒理学实验、慢病毒包装与稳转株建立、SiRNA与纳米载药、ChIP、CO-IP、生物信息学分析、知识产权服务！
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文献和实验技术研究和生物技术产业化研发的专业人士共同创立的新型科技企业，公司专注于向国内生命科学研究、生物技术产业研发及医学临床提供全方位现代实验技术服务。 团队于2003年组建，立足于深厚的分子生物学背景和扎实的科研实验技术服务基础，立命于终身为祖国的科研工作者提供全方位实验技术服务，并孜孜不倦地打造出我们自己研发生产的、比国际一流品牌产品还过硬的科研产品民族品牌，为国家科学技术研究和人民身心健康事业添砖加瓦!经过几年来的不懈努力，公司已建立了涵盖分子遗传学、细胞生物学、蛋白组学、免疫学、信号传导和神经生物
技术产业化研发的专业人士共同创立的新型科技企业，公司专注于向国内生命科学研究、生物技术产业研发及医学临床提供全方位现代实验技术服务 。 团队于2003年组建，立足于深厚的分子生物学背景和扎实的科研实验技术服务基础，立命于终身为祖国的科研工作者提供全方位实验技术服务，并孜孜不倦地打造出我们自己研发生产的、比国际一流品牌产品还过硬的科研产品民族品牌，为国家科学技术研究和人民身心健康事业添砖加瓦!经过几年来的不懈努力，公司已建立了涵盖分子遗传学、细胞生物学、蛋白组学、免疫学 、信号传导和神经生物
DQ探针是上海辉睿生物自行开发的拥有自主知识产权的第五代探针技术，DQ探针打破了荧光定量PCR领域国外专利技术垄断的现状，并成为国家“十一五”“艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治”科技重大专项成果中的亮点，解决了大量细菌耐药、SNPs等方面中单碱基突变特异性检测的难题。 研发背景：思考→什么是核心竞争力？ 测序、荧光定量 → ABI → 美国 诊断试剂 → Roche → 瑞士 化学试剂 → Sigma → 美国 液相芯片 → Luminex→ 美国 LNA(锁核酸
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