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实时荧光定量PCR服务(实时荧光定量PCR、免疫共沉淀(Co-IP)、原位杂交、全基因合成、引物合成、基因测序、DNA/总RNA/质粒提取、分子克隆与质粒载体构建、ELISA(酶联免疫吸附法)技术等) 威斯腾生物,让科研更简单!

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供应商信息

威斯腾生物
商家诚信度:
成立时间:2007
入驻丁香通年限:8年
商家等级:金牌客户
产品信息完整度:50%
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产品详情

提供商: 威斯腾生物
服务名称: 实时荧光定量PCR服务
活动内容:
(1)对于检测普通基因表达情况的样本,原价:300 元/样本,现价:200 元/样本
(2)引物合成,费用全免
(3)免费提供3次重复的实验结果。
(4)引物和探针设计免费
(5)RNA抽提费用全免
(6)免费提供RNA保护试剂,上门服务取样。

注:
1、此活动不能与其他活动同时参与;
2、样本数量必须大于 5,检测的基因数量不小于 3 个
3、此活动的最终解释权归威斯腾生物所有。

一、荧光定量PCR
荧光定量 PCR(也称 TaqMan PCR,以下简称 FQ-PCR)是美国 PE(Perkin Elmer)公司 1995 年研制出来的一种新的核酸定量技术,该技术是在常规 PCR 基础上加入荧光标记探针来实现其定量功能的,与变通 PCR 相比,FQ-PCR 具有许多优点。与普通 PCR 相比,FQ-PCR 具有许多优点:1、封闭反应,无需 PCR 后处理。2、特异性强,灵敏度高。3、采用对数期分析,摒弃终点数据,定量准确。4、定量范围宽,可达到 10 个数量级。5、仪器在线式实时检测,结果直观,避免人为判断。6、可实现一管双检或多检。7、操作安全,缩短时间,提高效率。荧光定量 PCR 是通过对PCR 扩增反应中每一个循环产物荧光信号的实时检测从而实现对起始模板定量及定性的分析。

二、主要实验步骤如下: 
1、设计并合成 Realtime PCR 引物。 
2. 引物溶解后使用 Promega 的 TaqDNA 聚合酶进行含 SG(SYBR®; Green)的 PCR 反应的优化。 
3. 客户样品 RNA 抽提 。
a.实验对象为组织样品,取适量(50-100 mg)新鲜组织样品或正确保存的组织样品加 1 ml 的 RNA 抽提试剂Trizol(Invitrogen),匀浆后抽提 RNA。 
b.实验对象为细胞样品,每份样品取 1×106~1×107 细胞,PBS 清洗细胞,去 PBS 加 1 ml 的 RNA 抽提试剂 Trizol(Invitrogen),裂解后抽提 RNA 。
4. RNA 质量检测  
a. 紫外吸收测定法测定 RNA 在分光光度计 260 nm 和 280 nm 处的吸收值,以计算其浓度并评估 RN A纯度 。
b. 使用ambion公司的甲醛电泳试剂进行变性琼脂糖凝胶电泳,检测RNA纯度及完整性。 
5. 使用逆转录酶(Promega)进行反应,将样品RNA逆转录为cDNA。 
6. 制备标准曲线样品: 
进行相对定量,需要先将样品的目的基因以及管家基因进行PCR扩增,其产物进行梯度稀释用于做标准曲线。 
7. 标准曲线样品和待测样品分别加入到含SG的RealTime PCR反应液中,进行RealTime PCR扩增和检测。 
8. 检测结果进行标准曲线分析:以对待测样品的目的基因进行定量。相对定量实验需要进一步用样品的目的基因测得值除以管家基因测得值以校正误差,所得结果代表某样品的目的基因相对含量。 
9. 提供实验报告:包括详细的实验方法及实时荧光定量 PCR 实验结果的相关图表 。

三、荧光定量 PCR 中的一些术语
CT值:荧光信号有统计意义显著增长(即穿过阈值线)时的循环次数,或者说是从基线到指数增长的拐点所对应的循环次数。
阈值:阈值的默认设置是 3-15 个循环的荧光信号的标准偏差的 10 倍。
CT值与起始模板的量成线性关系。

四、客户须知:
1、请您提供新鲜的且尽量多的材料,或直接提供纯化好的总 RNA 或 DNA(大于 5 ug/样本)。如是如织:100-200 mg
2、请通过 EMAIL 提供已知的全长基因序列。Email:huameixinan@163.com
3、请提供详细背景资料:DNA/RNA 来源,丰度。

五、结果提供:
1、实验详细步骤,和相关数据。
2、标准曲线,扩增曲线,溶解曲线。
3、完整的实验报告(含软件分析结果)

 六、服务流程:

 威斯腾技术团队85%以上是硕博学历,并毕业于名校。

【本平台合作项目】
分子诊断、病理诊断、药效学评价、毒理学实验、细胞药筛、动物建模、PDX模型、CRISPR/Cas9基因编辑、病理检测、基因芯片、蛋白组学、代谢组学、高通量测序、ChIP、CO-IP、生物信息学分析、知识产权服务!
【全国免费热线】:400-675-6758
【电话】 023-65316016,023-65316556
【邮箱】 china-western@163.com
【官网网址】www.cqwestern.com
【地址】 重庆市高新区二郎创业大道高科创业园 D 栋 2 楼

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荧光定量PCR 实 验 技 术 服 务荧光定量PCR起源:荧光定量PCR(也称TaqMan PCR,以下简称FQ-PCR)是美国PE(PerkinElmer)公司1995年研制出来的一种新的核酸定量技术,该技术是在常规PCR基础上加入荧光标记探针来实现其定量功能的,与变通PCR相比,FQ-PCR具有许多优点。与普通PCR相比,FQ-PCR具有许多优点:1、封闭反应,无需PCR后处理。2、特异性强,灵敏度高。3、采用对数期分析,摒弃终点数据,定量准确。4、定量范围宽,可达到10个数量级。5、仪器在线式实时检测,结果直观,避免人为判断。6、可实现一管双检或多检。7、操作安全,缩短时间,提高效率。荧光定量PCR是通过对PCR 扩增反应中每一个循环产物荧光信号的实时检测从而实现对起始模板定量及定性的分析。荧光定量PCR分类:☆TaqMan荧光探针    PCR扩增时在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针,该探针为一寡核苷酸,两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。探针完整时,报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收;PCR扩增时,Taq酶的5‘-3‘外切酶活性将探针酶切降解,使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离,从而荧光监测系统可接收到荧光信号,即每扩增一条DNA链,就有一个荧光分子形成,实现了荧光信号的累积与PCR产物形成完全同步。 ☆SYBR Green荧光染料    SYBR Green是一种DNA结合染料,能非特异地掺入到双链DNA中去。在游离状态下,它不发出荧光,但一旦结合到双链DNA中以后,便可以发出荧光。它的最大优点就是可以与任意引物、模板相配合,用于任意反应体系中。从经济角度考虑,它也比其它的探针的价格要便宜得多。但由于它能与所有的双链DNA结合,所以一旦反应体系中出现非特异扩增,那它就会影响到定量结果的可靠性与重复性。要避免这种不利因素,可以通过选择良好的引物并优化反应条件以消除非特异性影响。●主要实验步骤如下: RT-qPCR是由三个步骤组成:1.反转录:依赖反转录酶将RNA反转录成cDNDA;2.扩增:用PCR的方法扩增cDNA;3.检测:实时检测和定量扩增的产物.具体实验操作步骤:1. 设计并合成Realtime PCR引物。 2. 引物溶解后使用Promega的TaqDNA聚合酶进行含SG(SYBR®; Gr
实时荧光定量PCR 技术于1996年由美国Applied Biosysterms 公司推出,由于该技术不仅实现了PCR 从定性到定量的飞跃,而且于常规PCR 相比,它具有特异性更强、有效解决PCR 污染问题、自动化程度高等特点,目前已得到广泛应用。所谓实时荧光定量PCR 技术,是指在PCR 反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号积累实时监测整个PCR 进程,最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。 荧光定量PCR操作流程:1.根据基因名称查询序列,设计引物、探针。2.提取核酸(DNA/ RNA)。3.荧光定量PCR扩增,结果分析。4.提供完整的实验资料(实验记录、实验结果、引物探针等技术资料)。 荧光定量PCR收费标准:1.基因组DNA提取:40元/反应;病原体DNA提取:20元/反应。2.总RNA提取:60元/反应。3.逆转录反应:40元/反应4.荧光定量PCR扩增:60元/反应。5.引物探针(设计免费):2000元/基因。6.内参引物探针免费,标准曲线免费赠送。 荧光定量PCR标本要求1.全血样本(EDTA抗凝):2-5ml。2.组织样本:≥100mg。3.细胞:≥106。
实时荧光定量PCR  实时荧光定量PCR 技术于1996年由美国Applied Biosysterms 公司推出,由于该技术不仅实现了PCR 从定性到定量的飞跃,而且于常规PCR 相比,它具有特异性更强、有效解决PCR 污染问题、自动化程度高等特点,目前已得到广泛应用。所谓实时荧光定量PCR 技术,是指在PCR 反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号积累实时监测整个PCR 进程,最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。 荧光定量PCR操作流程:1.根据基因名称查询序列,设计引物、探针。2.提取核酸(DNA/ RNA)。3.荧光定量PCR扩增,结果分析。4.提供完整的实验资料(实验记录、实验结果、引物探针等技术资料)。 维伯鑫科研团队具有丰富的实验经验和研究素质,其中核心研发人员在科学引文索引(SCI)杂志上发表多篇文章。为客户提供科研协作服务是我们的一大特色,通过提供科学的实验解决方案、规范化的实验研究流程管理和严格的质量控制以及建立包括分子生物学、细胞生物学、病理和免疫组织细胞化学、荧光原位杂交、基因芯片、动物学等多功能科学研究技术平台,为广大科研工作者提供高质量的技术服务。核酸类技术服务 总RNA提取  总DNA提取  质粒提取荧光定量PCR定性PCRPCR-SSCPPCR-RFLPPCR-SSP基因测序逆转录反应克隆构建质粒转化原位杂交实验siRNA实验慢病毒包装实验核酸生物信息学分析引物探针合成核酸荧光原位杂交 欢迎您来电咨询!!全国免费:400-6677-379电话:020-66377266传真:020-66377267地址:广州市高新技术产业开发区科丰路31号G11栋2层网址:www.vipotion.com邮箱:info@vipotion.com 
实时荧光定量PCR技术(Real-time Quantitative PCR),是指在PCR反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程,最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。荧光定量PCR以其特异性强、灵敏度高、重复性好、定量准确、速度快、全封闭反应等优点成为了分子生物学研究中的重要工具,目前已得到广泛应用(如转基因动植物检测、RNAi基因失活率检测、病原微生物或病毒含量检测、基因差异表达、基因分型)。荧光定量 PCR 分类TaqMan 荧光探针PCR 扩增时在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针,该探针为一寡核苷酸,两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。探针完整时,报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收;PCR扩增时,Taq酶的5′-3’外切酶活性将探针酶切降解,使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离,从而荧光监测系统可接收到荧光信号,即每扩增一条DNA链,就有一个荧光分子形成,实现了荧光信号的累积与PCR产物形成完全同步。SYBR Green荧光染料SYBR Green I是一种结合于所有dsDNA双螺旋小沟区域的具有绿色激发波长的染料。在游离状态下,SYBR Green I发出微弱的荧光,但一旦与双链DNA结合后,荧光大大增强。SYBR Green法价格经济,对于常规样本的基因表达量检测,具有方便、快速、准确、重复性好的优点。赛哲拥有的强大引物库及各类型样本和基因检测方案更是为数据结果的可靠性提供了强有力的保证。但由于染料可与所有的双链DNA结合,其特异性和灵敏度较弱,因此对于一些特殊样本(如血清样本)或应用(如病毒分型、SNP检测),则推荐使用探针法。科研实例使用探针法检测某SNP位点某SNP位点分析结果A.纯合(G/G),B.杂合(G/T)SNP分型散点图  SYBR Green 染料法检测人母乳中 miR-124 在不同时间的表达水平变化扩增曲线和熔解曲线miR-124在不同时间的表达水平变化服务内容和流程 1. 根据基因序列设计扩增目的基因以及看家基因的引物; 2. 提取RNA,通过A260/A280测定RNA的浓度和纯度; 3. 将RNA逆转录为cDNA; 4. 实时荧光定量PCR; 5. 数据分析,实验报告整理。客户提供

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