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- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20
- 保质期：
3个月
- 英文名：
MiaoLingBio
- 库存：
1000
- 供应商：
淼灵生物
- 规格：
1管
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文献和实验（细菌内同源重组AdEasy System）一、目的基因的克隆（以pshuttle-CMV质粒为例）步骤1、选择适当酶切位点，进行酶切连接，将目的片段插入pshuttl-CMV质粒多克隆位点。2、重组质粒鉴定： 酶切鉴定或测序。3、重组质粒扩增，纯化并准备适量含目的基因的穿梭质粒。4、用PmeI单酶切线性化重组穿梭质粒，电泳鉴定质粒完全被切开。5、胶回收线性化质粒，以备共转化使用。二、共转化 1、大肠杆菌BJ5183电转感受态制备 （1）从新鲜琼脂板上挑取单个BJ5183细菌，接种于LB
最小的菌落）,接种于3ml含25-50mg/ml的LB培养基，37℃培养10-15hr。 8 碱裂法提取质粒，0.8%琼脂糖凝胶电泳筛选，大质粒为可能阳性克隆，进一步酶切鉴定。以PacI单酶切，0.8%琼脂糖凝胶电泳如显示出一条大片段（约30kb）,及一条小片段（约3.0或4.5kb）（同时可进行其它酶切鉴定），则基本确定为阳性克隆。 9 取1-5µl 阳性质粒转化至DH5α大肠杆菌细胞（BJ5183为recA+,质粒DNA易发生突变，DH5α或JM109，XL1-blue菌株
、TCID50、PFU Page 16： 1. pShuttle-CMV图谱 2. 病毒滴度测定 3. 重组腺病毒质粒转染 4. 重组腺病毒传代 Page 17： 1. 噬斑纯化 2. Adeno-X系统腺病毒包装protocol 3. PCR鉴定重组载体的缺陷 4. Sequences of pAdTrack-CMV and pAdEasy-1 5. BJ5183中质粒提取 Page 18： 1. 重组后质粒鉴定 2. BJ5183细菌的验证 3. 腺病毒
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