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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
大量
- 英文名:
BJ5183菌株
- 保质期:
1-2年
- 供应商:
上海钰博生物科技有限公司
- 保存条件:
-20℃
- 规格:
1管
| 产品货号 |
产品名称 |
| YB01240 | BJ5183菌株 |
产品信息:
名称:BJ5183菌株
规格:300ul甘油菌
储存温度:-80℃
基因组:
engA1 sbcBC recBC galK met thi-1 bioT hsdR (Strr)
产品简介:
BJ5183是高效重组E.coli菌株。该宿主菌能够将含有同源序列的两个质粒, 一个是含有目的基因的转移载体,另一个是含有腺病毒基因组的腺病毒载体,通过菌株中含有的重组组件和两个质粒上的同源序列,将这两个质粒进行重组。BJ5183可在37℃有氧的条件下用LB进行培养,然后用30%的甘油保藏。
操作说明:
1,本品包含一份甘油菌,使用本甘油菌时可以不用完全融解,在甘油菌表面蘸取少量涂板或进行液体培养即可。也可以完全融解后使用,但随着冻融次数的增加,细菌的活力会逐渐下降。
2,为保证菌种纯正,避免其它细菌污染,尽量先划平板,然后再挑单克隆菌落进行后续操作。
冷冻管开封:
用浸过75%酒精的脱脂棉严格消毒冷冻管盖。
菌株复溶:
无菌环境中旋开装有复溶液的滴瓶盖,吸取1ml 左右复溶液,加入到冷冻管中。轻轻振荡,使冻干菌株溶解呈悬浮状。
菌株复壮:
用无菌吸管吸取菌悬液,转移到复溶液滴瓶中。做好标识,在适宜温度下培养。细菌在30-35℃培养箱中培养24-48h,真菌在23-28℃培养箱中培养24-72h(必要时,可适当延长培养时间)。
菌株传代:
将得到的菌株的新鲜培养物转接到适宜的固体培养基及液体培养基中(尽量增大接种量:如用无菌吸管吸取≥50μl 新鲜培养物至固体培养基,边移动边缓慢释放),适宜温度下培养,用以菌株的保藏、传代及制备工作菌株。
注意事项:
1、菌种活化前,将冷冻管保存在低温、清洁、干燥的环境中,长时间室温下放置会导致菌种衰退;
2、冷冻管开封、冻干粉复溶、菌株恢复培养等操作应在无菌条件下进行;
3、一些菌种经过冷冻干燥保存后,延迟期较长,部分需连续两次继代培养才能正常生长;
4、苛养菌的培养需采用含特定营养成分的培养基,敬请正确选择,不清楚时来电询问;
5、某些厌氧菌的培养,自开封到接种完成,均需以无氧气体充填,以保持厌氧状态;培养过程中亦要保持厌氧状态;
6、某些菌种,如肺炎链球菌、流感嗜血杆菌、淋病奈瑟菌等需要5-10%CO2 促进生长;
7、如发现冷冻管盖松动、复溶液浑浊等异常情况,应停止使用对应产品。
8、部分菌种有致病性、扩散性,请专业人员在专业环境下有保护性操作。
保藏条件:
-20℃保存(复溶液于2-8℃保存)
保藏时间:
2-10 年,应根据菌种状况及时转接
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文献和实验Generation of Recombinant Adenovirus Using the Escherichia coli BJ5183 Recombination System
here uses homologous recombination machinery of Escherichia coli BJ5183 to construct plasmids used in generation of adenoviral vectors. With this method, no ligation steps are involved in generating the plasmids, and any region of the adenoviral genome
(细菌内同源重组AdEasy System)一、目的基因的克隆(以pshuttle-CMV质粒为例)步骤1、选择适当酶切位点,进行酶切连接,将目的片段插入pshuttl-CMV质粒多克隆位点。2、重组质粒鉴定: 酶切鉴定或测序。3、重组质粒扩增,纯化并准备适量含目的基因的穿梭质粒。4、用PmeI单酶切线性化重组穿梭质粒,电泳鉴定质粒完全被切开。5、胶回收线性化质粒,以备共转化使用。二、共转化 1、大肠杆菌BJ5183电转感受态制备 (1)从新鲜琼脂板上挑取单个BJ5183细菌,接种于LB
最小的菌落),接种于3ml含25-50mg/ml的LB培养基,37℃培养10-15hr。 8 碱裂法提取质粒,0.8%琼脂糖凝胶电泳筛选,大质粒为可能阳性克隆,进一步酶切鉴定。以PacI单酶切,0.8%琼脂糖凝胶电泳如显示出一条大片段(约30kb),及一条小片段(约3.0或4.5kb)(同时可进行其它酶切鉴定),则基本确定为阳性克隆。 9 取1-5µl 阳性质粒转化至DH5α大肠杆菌细胞(BJ5183为recA+,质粒DNA易发生突变,DH5α或JM109,XL1-blue菌株
技术资料暂无技术资料 索取技术资料








