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-20
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3个月
- 英文名:
MiaoLingBio
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1000
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淼灵生物
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1管
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文献和实验表达的调控,单单靠GLA4不知道能不能起到调控蛋白表达的目的?有这方面的文献吗?先谢谢各位大侠的帮助了!!!! shilei5794749 类似GAL4-UAS系统,楼主可以借鉴这个系统。GLA4可以用pGBKT7或者pBIND上的,做成删除NLS序列的GAL4(BD+AD)或者GAL4BD-VP16。此质粒还可融合你要研究的蛋白,上游可以加调控元件。 另一个质粒用UAS序列打头,后置报告基因就行啦! 版主dnazyme留言:
相关专题 酵母双杂交技术专题 1.构建CaM诱饵质粒 ① PCR 扩增CaM基因的开放阅读框,正向和反向引物分别加接酶切位点。 ② 扩增得到的CaM插入T载体 ( T–CaM) 。 ③ T–CaM和pGBKT7 质粒 分别双酶切。 ④ 胶回收目的DNA。 ⑤ 将CaM连入pGBKT7,构建成表达载体 pGBKT-CaM,转化大肠杆菌DH5&alpha
。那么,如何对这个问题进行研究呢?这里狗哥就带大家简单梳理一下常用的蛋白质相互作用的研究方法。图 1酵母双杂交,Yeasttwo hybrid(Y2H), 这是一个古老的技术,Stanley Fields 和 Ok-KyuSong 在 1989 年的时候利用大肠杆菌中 GAL4 乳糖操纵子的原理,开发出这个方法用于检测蛋白质之间的相互作用 。GAL4 操纵子有两个结构域,BD(binding domain)结构域和 AD(activation domain),其中 BD 结构域可以结合在 UAS
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