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- 技术资料
- 保存条件：
-20
- 保质期：
3个月
- 英文名：
MiaoLingBio
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1000
- 供应商：
淼灵生物
- 规格：
1管
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文献和实验一、材料和试剂 1. Hairpin-pLKO.1vector（OpenBiosystems） 2. Packagingvectors:第二代包装质粒包含gag,pol,和rev基因（pCMV-dR8.91或pCMV-dR8.74psPAX2）和包被质粒（pMD2.G）（Addgene） 3. 脂质体2000（Invitrogen） 4.OptiMEM无血清培养基（Invitrogen） 5. 293T包装细胞（ATCC）
，然后我收集这些上清直接去感染肝癌细胞，24小时候也 能看到至少80%的细胞表达GFP，说明包装过程中所用的包装质粒，试剂以及细胞应该没 有问题。我现在有几个疑问，请有经验的战友指点： 1）师姐留给我的protocol上，转染HEK293FT的方法如下，以10cmdish为例： prepare the following transfection mix: 10.0 ug PLKO.1 shRNA plasmid 10.5 ug pLP1 10.5 ug pLP2 9.0 ug pVSVG
感染细胞的基因组，进行长时间的稳定表达。 （2）服务流程 1）含目的基因的慢病毒RNAi干扰载体的构建和纯化提取； 2）慢病毒干扰载体、pGag/Pol、pRev、pVSV-G四质粒共转染293T细胞； 3）培养48~72h，收集培养上清； 4）病毒的纯化和浓缩（超离和/或超滤）； 5）滴度测定、目的基因检定 6）将制得的慢病毒液转导客户的靶细胞，筛选混合稳定细胞株，并检测靶基因的表达。 客户提供 1）表达miRNA/shRNA的质粒（提供测序图谱）或所要
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