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3个月
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MiaoLingBio
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1000
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淼灵生物
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1管
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文献和实验相关实验
冲液后,PCR扩增TFPI基因。 (二)TFPI基因的体外重组与测序 以EcoRI和BamHI双酶切扩增出的TFPI基因和pGEM-3Zf(-)质粒,在T4DNA连接酶的作用下,将TFPI基因与pGEM-3Zf(-)质粒重组获得pGEM-3Zf(-)-TFPI克隆质粒,转化大肠杆菌DH5α,涂LBA平板,挑阳性克隆。 为了保证所获基因的准确性,必须对其进行DNA序列测定。现有许多生物技术公司能够提供测序服务,其快捷、方便,且价格合理,为大多数实验室所采用。 (三)表达
非病毒载体介导的基因治疗有许多优点,但就目前大多数表达体系而言普遍存在外源基因表达水平低而短暂等问题为了使外源基因稳定持续表达,必须对质粒DNA 进行改造。附着体质粒载体(episomal vector)可以使外源基因以附着体形式复制,分离到子代细胞,从而使基因高效持续表达,是种新型的非病毒表达载体 。 我们构建了以EB病毒(Epstein Barr virus,EBV)复制子(EBV replicon,EBVR)为基础的附着体质粒载体,并将报告基因增强型绿色
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