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文献和实验基因敲除 - 概述 基因敲除是自80年代末以来发展起来的一种新型分子生物学技术，是通过一定的途径使机体特定的基因失活或缺失的技术。通常意义上的基因敲除主要是应用DNA同源重组原理，用设计的同源片段替代靶基因片段，从而达到基因敲除的目的。随着基因敲除技术的发展，除了同源重组外，新的原理和技术也逐渐被应用，比较成功的有基因的插入突变和RNAi技术，它们同样可以达到基因敲除的目的 基因敲除 - 介绍 基因敲除就是通过同源重组将外源基因定点整合入靶细胞基因组上某一确定的位点，以达到
冲液后，PCR扩增TFPI基因。 (二)TFPI基因的体外重组与测序 以EcoRI和BamHI双酶切扩增出的TFPI基因和pGEM-3Zf(-)质粒，在T4DNA连接酶的作用下，将TFPI基因与pGEM-3Zf(-)质粒重组获得pGEM-3Zf(-)-TFPI克隆质粒，转化大肠杆菌DH5α，涂LBA平板，挑阳性克隆。 为了保证所获基因的准确性，必须对其进行DNA序列测定。现有许多生物技术公司能够提供测序服务，其快捷、方便，且价格合理，为大多数实验室所采用。 (三)表达
非病毒载体介导的基因治疗有许多优点，但就目前大多数表达体系而言普遍存在外源基因表达水平低而短暂等问题为了使外源基因稳定持续表达，必须对质粒DNA 进行改造。附着体质粒载体(episomal vector)可以使外源基因以附着体形式复制，分离到子代细胞，从而使基因高效持续表达，是种新型的非病毒表达载体 。 我们构建了以EB病毒(Epstein Barr virus，EBV)复制子(EBV replicon，EBVR)为基础的附着体质粒载体，并将报告基因增强型绿色
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