总RNA提取试剂盒

别名	总RNA提取试剂盒
英文名称	Total RNA Extraction Kit
储存条件	2-8℃，避光，有效期1年
单位	盒

规格：50T/100T
产品内容：

试剂盒组成	R1200-50	R1200-100	保存	有效期
裂解液	50ml	100ml	2-8℃	一年
漂洗液	15ml	30ml	RT	一年
洗柱液	50ml	100ml	RT	一年
RNase free ddH2O	15ml	30ml	RT	一年
RNase free吸附柱	50个	100个	RT	一年
RNase free收集管(2ml)	50个	100个	RT	一年

操作步骤：1. 样品处理： a. 植物组织：取新鲜或-70℃冻存100mg组织在液氮中研磨，把粉末加入到1ml裂解液中混匀。
b. 动物组织：取新鲜或-70℃冻存100mg组织加1ml裂解液，用组织研磨杵或匀浆器匀浆处理。
c. 贴壁细胞：直接在培养板中加入裂解液裂解细胞，每10⁶细胞加1ml 裂解液。用取样器吹打混匀。
d. 细胞悬液：离心收集细胞。每10⁶动物、植物和酵母细胞或每10⁷细菌细胞加1ml裂解液混匀。
e. 血液处理：取0.2-1ml新鲜血液加3倍体积红细胞裂解液，混匀后室温放置10分钟，10000rpm离心1分钟。弃上清，若沉淀含有红细胞，可加入2倍体积红细胞裂解液重复裂解步骤。离心后沉淀加入1 ml裂解液混匀。
2. 将处理后的样品在室温放置5分钟，使得核酸蛋白复合物完全分离。
3. 向匀浆样品中加0.2ml氯仿，盖好管盖，剧烈振荡15秒，室温放置3-5分钟。
4. 2-8℃ 12000 rpm离心10分钟。RNA主要在上层无色的水相中，把水相转移到新管中，不要吸到沉淀。
5. 吸附柱前处理：在吸附柱中加入500ul 洗柱液，室温放置2分钟，2-8℃ 12,000 rpm离心2min，弃废液。
6. 第4步收集的上清中加入200ul无水乙醇混匀，加入吸附柱静置2分钟，2-8℃ 12000rpm离心2min，弃废液。
7. 向吸附柱中加入600ul漂洗液(使用前请先检查是否已加入无水乙醇)，2-8℃ 12,000 rpm离心2min，弃废液。
8. 向吸附柱中加入600ul漂洗液，2-8℃ 12,000 rpm离心2min，弃废液。
9. 12000rpm离心2min，弃掉收集管，将吸附柱置于室温放置数分钟将吸附柱中残余的漂洗液去除。
10. 将吸附柱放入新管中，向膜中央滴加50-100ul RNase free ddH2O，室温放置5min，12000rpm室温离心2min即得到RNA。
注意事项：
1，所有相关器皿耗材都应为RNase-free产品，操作过程要小心，带口罩、手套避免环境中RNA酶污染样品。
2，RNA在水溶液中OD值可能在1.5-1.9之间，但这并不表示RNA不纯，需电泳检测。