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- 2025年07月15日
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- 文献和实验
- 技术资料
- 品系：
详见说明书
- ATCC Number：
Cas9稳定表达的人非小细胞肺腺癌细胞；NCI-H1975-Cas9-594
- 细胞类型：
详见说明书
- 肿瘤类型：
详见说明书
- 供应商：
上海邦景
- 库存：
25
- 生长状态：
贴壁生长
- 年限：
详见说明书
- 运输方式：
低温冷藏
- 器官来源：
详见说明书
- 是否是肿瘤细胞：
是
- 细胞形态：
上皮样
- 免疫类型：
详见说明书
- 物种来源：
详见说明书
- 相关疾病：
详见说明书
- 组织来源：
详见说明书
- 规格：
株
冷冻保存方法二：冷冻管置于已设定程序之可程序降温机中每分钟降1-3℃至–80℃以下，再放入液氮槽期储存。-20℃不可超过1小时，以防止冰晶过大，造成细胞大量死亡，也可跳过此步骤直接放入-80℃冰箱中，但存活率稍微降低一些。
细胞名称 Cas9稳定表达的人非小细胞肺腺癌细胞；NCI-H1975-Cas9-594使用说明书
形态特性 上皮样
生长特性 贴壁生长
特征特性 该细胞是采用慢病毒感染的方式使NCI-H1975细胞稳定表达Cas9-Flag-Neo，经400ug/mlG418筛选得到的单克隆，经Western Blotting验证该克隆可以表达Cas9蛋白，可直接用Crispr技术编辑基因组DNA。
培养条件 RPMI 1640 (w/o Hepes) 10%FBS；400ug/ml G418
传代方法 1:3~1:6传代；每周换液2~3次。
传代情况 C3
冻存条件 基础培养基+5%DMSO+20%FBS
支原体检测 培养法（-）
STR Amelogenin：x,x；CSF1PO：12,12；D12S391：17,17；D13S317：10,13；D16S539：9,12；D18S51：13,13；D19S433：15,15.2；D21S11：28,28；D2S1338：17,17；D3S1358：14,15；D5S818：11,12；D6S1043：12,12；D7S820：8,8；D8S1179：13,13；FGA：21,24；Penta E：12,12；TH01：7,7；TPOX：8,11；vWA：18,18；
同工酶
染色体
使用权限 A类
Cas9稳定表达的人非小细胞肺腺癌细胞；NCI-H1975-Cas9-594使用说明书复苏操作要点：
1）将培养基在37℃水浴锅预热；准备一个15mL无菌的离心管，加入8mL预热培养基。
2）将冻存细胞从液氮罐中取出，快速放入37℃水浴锅中复温（可准备一洁净的烧杯，装满37℃的水，细胞冻存管取出后迅速放入烧杯内，再逐步转移到水浴锅中）。轻轻晃动冻存管，使细胞能在1~2min内完全解冻，使细胞能尽快通过最易受损的温度段（-5~0℃）。注意冻存管管口不能没入水中，BRL(大鼠肝细胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭冻存管后再置于超净台内，将管内细胞转移至准备好的离心管内，轻轻吹打液体，使细胞均匀分散，降低DMSO浓度，吹打时避免产生气泡。用新鲜培养基洗管壁2次，均转移至离心管内。
4）800rpm离心5min，弃上清，加入新鲜的培养基，吹打制成细胞悬液。
5）将细胞悬液转移至T25细胞瓶内，补加适量的培养基，轻轻晃动细胞瓶使细胞分布均匀，放入温箱内培养。
6）第二天观察细胞贴壁生长情况，换新鲜培养基以去除死细胞。继续培养，待细胞长至80~90%汇合时正常传代。一般刚复苏的细胞需经过2~3次传代，细胞活力恢复后才能进行后续的实验。
Cas9稳定表达的人非小细胞肺腺癌细胞；NCI-H1975-Cas9-594使用说明书质量保证:
我们的细胞株来源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，购买到货后，由我们实验室扩增、冻存，冻存的产品全部经过QC检测，100%进口来源，100%保证5代以内，活力>95%，无细菌、真菌、支原体污染。
细胞到达客户手中，1个月内出现任何问题，导致细胞在冻存前死亡，我们公司都可以免费再向客户提供一次。
对细胞的真实性，支持客户鉴定STR或者基因突变测序数据，如证明细胞错误，全额退款。
Cas9稳定表达的人非小细胞肺腺癌细胞；NCI-H1975-Cas9-594使用说明书产品形式：
公司提供2种形式的产品：
第一种是冻存产品，由液氮直接拿出，干冰运输给客户。一般不推荐这种，也较少使用这种方式，因为复苏手法对于细胞状态影响较大，一旦细胞状态不好，很难说是细胞自身不行，还是复苏没操作好；另外温度对细胞、基因功能状态影响很大，-80C也不是细胞储存的最好方式，快递时间也很难控制，多种因素影响产品的质量；运费电询(顺丰)。
第二种是我们复苏好细胞，QC通过后，T-25灌满培养基常温运输给客户，排除复苏造成影响，常温运输也对细胞影响也不大，运费电询(顺丰)。
默认是发第二种，如果想要第一种，请事先告知。
Cas9稳定表达的人非小细胞肺腺癌细胞；NCI-H1975-Cas9-594使用说明书购买流程 ：
1. 客户确定订购；
2. 公司将合同发给客户签字（电子版或者纸质版），同时快递发票给客户；
3. 由客户报销费用到公司账户；
4. 报账过程中，我公司将复苏细胞，做QC；
5. QC通过，同时费用到账，即可发货给客户（顺丰）。
6-PG-BaD-葡萄糖-6嶙酸钡盐10KU高纯，99%
(2,4-二录本氧乙酸)
Fluridone1-甲基-3-本基-5-(3-三扶甲基本基)-4(1H)-酮150u高纯，95%
酚(异构体混和物) Crqsol 1319-77-3
C.L.E.D培养基shēng huà shì jì容量：200张/盒
N-月桂酰肌安醋内盐;N-十二酰基-N-基甘安醋内 N-Lcuroylscrcosinq wo7ium sclt;wo7ium N-lcuroylscrcosinctq;Scrcosyl;Scrkosyl NL 137-16-6
MIPK3-甲基-25克BR
拂硼醋钾;硼拂化钾 PotcssiuM fluoborctq;PotcssiuM borofluoridq 14072-23-7
乙酰辅酶A/乙酰辅酶A钠盐/Acetyl CoA BR，93% 1毫克 国产/进口
化镍/二化镍/化亚镍/Nickel(II) fluoride tetrahydrate CP，30%， 250克 国产/进口
盐酸盐shēng huà shì jì容量：2～8℃25克
80-59-1惕格酸Tiglic acid
植物血球凝集素PHA-Mshēng huà shì jì容量：RT25克
3,4-二甲氧基溴苯 4-Bromoveratrole,98% 2859-78-1 25G 通用试剂
姬姆萨氏色素/吉氏色素/姬姆色素/吉氏溶液/吉姆氏色素/姬姆氏色素/吉姆萨染料/姬姆氏色素染料/3-(二甲基基)-7-基吩噻嗪-5-鎓化物/Giemsa′s Stain BS 10克 国产/进口
GP140 Others HIV 人类免疫缺陷病毒Ⅰ型 HIV-1 (group M, subtype CRF07_BC) gp140 人细胞裂解液 (阳性对照)
CM-H014人气管平滑肌细胞完全培养基100mL
SCLY Others Human 人 SCLY / Selenocysteine Lyase 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照)
恒河猴肾细胞;MMK2 人脑星型胶质瘤细胞，SW 1088[SW-1088;SW1088]细胞 T-47D(管癌细胞)
人肝癌细胞;Hep G2 [HepG2]
原代系膜细胞特制基础培养基Many types of cells包装：500/250/100
CL-0072Daudi(人淋巴瘤细胞)5×106cells/瓶×2
SDF2 Others Human 人 SDF2 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照)
细胞凋亡蛋白酶-3分析试剂盒CAS
HT-29细胞，人结肠癌细胞 人胚肾细胞,293细胞 肾系膜细胞Many types of cells包装：5 ×105次方(1ml)
家兔骨髓间充质干细胞;2012083MSC
SFRP4 Others Human 人 sFRP4 人细胞裂解液 (阳性对照)
Cas9稳定表达的人非小细胞肺腺癌细胞；NCI-H1975-Cas9-594使用说明书PC-12（高分化） 大鼠上腺嗜鉻细胞瘤细胞（高分化）
PC-12（未分化） 大鼠上腺嗜鉻细胞瘤细胞（未分化）
Pcc4 小鼠畸胎瘤细胞
raw264.7 小鼠单核巨噬细胞白血病细胞
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文献和实验CRISPR/Cas9 基因敲除实验 -- 293FT 细胞转染验证 and trouble shooting
%；2. 72 h 后收集细胞提取基因组 DNA（按照基因组 DNA 提取试剂盒的说明书操作）；3. 使用事先设计好的引物进行 PCR 扩增，这里使用的酶是 NEB 公司的 Q5 high-fidelity Polymerase，一切按照该酶的说明书严格操作；4. 将目的条带切割下来并使用胶回收试剂盒回收 DNA 条带，一切按照胶回收试剂盒说明书进行操作；5. 回收后的 DNA 样本，经 T7 Endonuclease I 酶解验证错配 DNA，部分结果如下：T7 EI验证成功，开始正式实验时间飞逝，上次说
的细胞上使用只带 gRNA 的病毒，结果完全没有编辑，却误以为是靶点问题。下单前务必确认宿主细胞是否表达 Cas9，以及表达是否有功能（做过阳性对照验证）。 --- 二、六个选型维度逐个看 1. 筛选标记 抗生素抗性（puromycin、blasticidin、hygromycin）：可富集被感染细胞，是稳转株构建的标配。要注意细胞对药物的敏感性需预先测定（做杀伤曲线），不同细胞系的耐受浓度差异很大。 荧光蛋白（GFP、mCherry）：便于流式分选和感染效率可视化，适合不能加药筛的场景
足够）、以及使用可诱导或自限性表达系统。 代价 3：整合风险 随机整合理论上可能破坏内源基因或激活原癌基因。在基础研究中风险可接受（慢病毒载体经过多代安全改造，且整合位点偏好相对温和），但在治疗性应用中需要严格评估。 代价 4：操作要求 需要在 BSL2 条件下操作，涉及病毒的包装、浓缩、储存和废弃物处理，对实验室条件和管理有要求。 --- 四、吉凯基因CRISPR相关产品与服务 CRISPR/Cas9慢病毒产品 提供 sgRNA 与 Cas9 慢病毒包装，适用于难转染细胞、悬浮细胞、稳定株构建与文库
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