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- 百奥莱博
- BTN140429-EGB
- 北京
- 2025年07月11日
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- 详细信息
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- 库存：
209
- 英文名：
E.coli M15 Chemical Competent Cell
- 保质期：
长期
- 供应商：
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件：
干冰运输、-80℃保存
特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
百奥莱博专业生产销*(代"售")大肠杆菌M15化学感受态细胞折扣价，我公司供应的分子生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。
名称：大肠杆菌M15化学感受态细胞
编号：BTN140429
产地：国产|进口
规格：0.1mL*10
品牌：百奥莱博
英文名：E.coli M15 Chemical Competent Cell
本产品是采用大肠杆菌M15菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞，可用于DNA的化学转化。使用pUC19质粒检测，本产品转化效率可达107。本产品具有卡那霉素抗性。
菌株基因型为：lac ara gal mtl recA+ uvr+ [pREP4 lacI kanaR]。
储存条件：干冰运输、-80℃保存，有效期半年。
自备试剂：目的DNA、SOC或LB培养基等。
使用方法：
1. 取感受态细胞置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为50-100μL，可以根据实际情况分装使用。
以下实验以50μL感受态细胞为例。
2. 待感受态细胞融化后，向感受态细胞悬液中加入目的DNA(根据实际情况加入适量的DNA，通常100μl感受态细胞能够被1 ng超螺旋质粒DNA 所饱和)，用移液器轻轻吹打混匀，冰浴30分钟。
3. 42℃热击45秒，迅速将离心管转移到冰浴中，冰上静置2-3分钟。
4. 每个离心管中加入450μl 无菌的SOC或LB培养基(不含抗生素)，混匀后置于37℃摇床，150rpm 振荡培养45分钟使菌体复苏。
5. 根据实验需求，取适量已转化的感受态细胞，加到含相应抗生素的SOC或LB 固体琼脂培养基上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于37℃直至液体被吸收，倒置培养，37℃培养12-16小时。
注意事项：
1. 涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA 总量较多，可取少量转化产物涂布平板；若转化的DNA 总量较少，可取200-300μl转化产物涂布平板。若预计的克隆数较少，可通过离心(4,000rpm，2分钟)后吸除部分培养液，悬浮菌体后将其涂布于平板中。
2. 新制备的固体培养基不易涂干，可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。
3. 涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的转化菌落数过少，可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。
关键词：大肠杆菌M15化学感受态细胞,E.coli M15 Chemical Competent Cell,BTN140429
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文献和实验7 的缓冲液来洗脱；洗脱液提前预热至 65℃ 也可以提高洗脱效率。 3. 提取质粒转化大肠杆菌效率低 大肠杆菌转化效率受到多种因素的影响，例如感受态细胞状态，转化方式及操作（电转或热激），质粒用量，质粒质量等等。从感受态角度优化，可以考虑感受态本身的状态，比如贮存时间、贮存方式不当会导致感受态转化效率明显降低，此外热激条件也会影响感受态转化效率，建议热激时间严格按照感受态类型或说明书操作。从质粒角度优化，可以进一步确认质粒用量，质粒浓度，质粒是否降解等。 4. 提取质粒转染细胞效率低
的菌株在30oC而不是在37oC生长，更有利于连接。作简单的亚克隆连接实验，亚克隆转化效率的感受态细胞就可满足克隆需要，更高转化效率的感受态细胞可用于作比较困难的克隆实验。为提高获得目的克隆的机会，应用尽可能高转化效率的感受态细胞（>108克隆/μg DNA）。 (2)大肠杆菌基因型 hsdR 有利于非甲基化DNA（如PCR扩增产物）的有效转化。 mcrA 有利于甲基化DNA（如基因组）的有效转化。 acZΔM15 用于蓝白斑筛选。 endA1 无Endonuclease I 酶活性，有利
实验目的1.了解转化的概念及其在分子生物学研究中的意义。2.学习氯化钙法制备大肠杆菌感受态细胞的方法。3.学习将外源质粒 DNA 转入受体菌细胞并筛选转化体的方法。实验原理转化( Transformation )是将异源 DNA 分子引入另一细胞品系，使受体细胞获得新的遗传性状的一种手段，它是微生物遗传、分子遗传、基因工程等研究的基本实验技术。转化中的受体细胞： 转化过程所用的受体细胞一般是限制性修饰系统缺陷的变异株，即不含限制性内切酶和甲基化酶的突变株，常用 RM 符号表示。转化方法：电击
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