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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
357
- 英文名:
Yeast Electro Competent Cell Preparation Kit
- 保质期:
一年
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件:
常温运输和保存
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
百奥莱博专业生产供应酵母电转感受态细胞制备液促销,我公司销*(代"售")全品类的分子生物学试剂,价格优惠,欢迎广大科研工作者垂询订购。
名称:酵母电转感受态细胞制备液促销
规格:20次
编号:BTN81201
英文名:Yeast Electro Competent Cell Preparation Kit
品牌:百奥莱博
本酵母电感受态细胞制备试剂是一种通过化学处理酿酒酵母和裂殖酵母电感受态细胞,使之不但马上能用于电转化,还能长期放置后用于电转化。
产品特点:
1. 操作简单,单溶液制备,除酵母培养的时间外,整个操作只需要10余分钟。
2. 制备得到的感受态细胞可以-80℃保存一年,方便多次使用,免去每次转化都要新鲜制备感受态细胞。
3. 主要用于酿酒酵母S.cerevisia和S.pombe,但能否用于其他酵母(如C.albicans、Pichia pastoris等)不详。
4. 最高转化效率可达到0.2-1×106个转化子/ug质粒DNA。
5. 得到的感受态细胞可以用各种线性或环状酵母穿梭质粒DNA进行转化,例如YIp,YRp,YCp,YEp和YAC等。
6.可以用于酵母双杂交、定点突变、基因破坏、等位突变基因修复等实验。
7. 本试剂盒足够处理200mL酵母菌液,制备40管酵母感受态细胞。
储存条件:常温运输和保存,有效期一年。
自备试剂:
灭菌水,SD液体培养基(不含*基酸的0.67% Bacto Yeast Nitrogen Base,2%葡萄糖),SD固体培养基(在SD液体培养基中再加2%琼脂),YPD液体培养基(1% Bacto Yeast Extract,2% Bacto Peptone,2%葡萄糖),YPD固体培养基(在YPD液体培养基中再加2%琼脂)
使用方法:
一:电感受态细胞的制备
说明:按本方法制备1 管酵母电感受态细胞就需要OD600达到1.0的新鲜酵母培养液5mL,用户需根据制备的酵母感受态细胞数量决定培养细胞的体积。下面操作只是以10mL酵母为例说明。
1.培养S.pombe细胞:挑取新鲜单菌落(4℃放置不超过3周的也可以),接种到10mL SD液体培养基中。30℃摇晃培养,摇床速度250rpm/分钟,直到OD600达到1.0左右(相当于1×107细胞/mL)。
2.培养S.cerevisiae细胞:挑取新鲜单菌落(4℃放置不超过3周的也可以),接种到装在10mL YPD液体培养基中。30℃摇晃培养,摇床速度250rpm/分钟,直到OD600达到1.0左右(相当于1×107细胞/mL)。
3. 冰上放置15分钟。
4.室温1600rpm离心5 min,弃上清。
5. 用冰浴的灭菌水洗涤3次。
6. 用0.2mL冰浴的本产品重悬细胞。
7. 按每管0.1mL分装到1.5-2mL的冷冻管中,直接放入-80℃冰箱待用。
注意:不能放在液氮中,否则将丧失电转化能力。
二:电转化酵母感受态细胞
1. 将装有0.1mL感受态细胞的冷冻管从冰箱取出的、放置在30℃水浴中快速化冻(快速化冻的效果好于缓慢化冻)。
2. 用1mL冰浴的本产品洗涤一次。
3. 加入50μL冰浴的本产品重悬细胞。
4. 加入1-30 ng质粒DNA 并轻柔混匀。
5.转移到预冷的、距离为0.2cm的电击杯中。
6. 按电击仪的手册设置电击参数并进行电击处理,参考条件为:10kV/cm(对0.2 cm的电击杯,则为2kV),5ms(25F,200)(各厂家仪器的使用略有不同,请严格按电击仪厂家提供的手册进行操作)。
7.电击后将细胞转移到1mL预冷的本产品中,轻柔混匀。
8. 取0.2mL转化细胞涂盘(S.pombe细胞需涂盘在SD 固体培养基上,S.cerevisiae细胞需涂盘在YPD固体培养基上),30℃培养4-6天。
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文献和实验慢冻快融是细胞冻存和复苏原则,当细胞冷到零度以下,细胞器脱水,细胞中可溶性物质浓度升高,并在细胞内形成冰晶。而冻存液产品能大大降低细胞在冻存过程中冰晶对于细胞的损伤,有效提高细胞复苏率和活力。现在,告诉你一个好消息:赛业生物全线细胞冻存液年终大促销,低至 252 元起,比同行便宜一半多!点此马上选购>>冻存液优势:效率更高:复苏率达 90%,远超普通冻存液的 70% 的效率;省事省时:无需程序冻存,细胞可直接置于 - 80℃ 冰箱;成分明确:不影响细胞的生长和分化潜能及其它高级应用。质量
5mlLB培养基中,于37℃培养3-5小时 3.将培养液全部转到100mlLB培养基中培养2-3小时,到OD600=0.3-0.4感受态细胞制备: 4.将培养液转入1.5ml离心管中,在冰上放置15-30min 5.4000rpm离心5min,弃上清 6.加入0.8ml预冷的0.1mol/l CaCl2,悬浮沉淀,冰上预冷10min 7.4000rpm离心5 min,弃上清 8.加入0.2ml预冷的0.1mol/l CaCl2,悬浮沉淀,即可使用。也可加入总体积15%的甘油 可-70℃长期
一、目的1.了解感受态细胞生理特性及制备条件,掌握大肠杆菌感受态细胞制备方法。2.掌握质粒DNA 转化大肠杆菌的方法,了解转化的条件和利用半乳糖苷酶基因插入失活选择重组质粒DNA 的原理。二、原理(一)大肠杆菌感受态细胞制备的原理所谓感受态,是指细菌生长过程中的某一阶段的培养物,只有某一生长阶段中的细菌才能作为转化的受体,能接受外源DNA而不将其降解的生理状态。感受态形成后,细胞生理状态会发生改变,出现各种蛋白质和酶,负责供体DNA 的结合和加工等。细胞表面正电荷增加,通透性增加,形成能接受
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