北京BL21(DE3)感受态细胞大量库存促销

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北京百奥莱博专业生产销*(代"售")北京BL21(DE3)感受态细胞大量库存促销，我公司供应的分子生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。

名称：北京BL21(DE3)感受态细胞大量库存促销
英文名：BL21(DE3)Competent Cell
规格：100μl×10支
品牌：百奥莱博
  本产品是大肠杆菌BL21(DE3)菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞，可用于DNA的热击转化。BL21(DE3)菌株适合表达非毒性蛋白，该菌株是以T7 RNA聚合酶为表达系统的外源基因蛋白高效表达的宿主。T7噬菌体RNA聚合酶基因的表达受λ噬菌体DE3区的lacUV5启动子调控，该区整合在BL21染色体上。使用pUC19质粒检测，转化效率可达107。

产品组成：

 

组份	0.1ml×10支
BL21(DE3)Competen t Cell	10×100μl
Control DNA pUC19，0.1ng/μl	10μl

实验前准备及重要注意事项
1、感受态细胞一定要用干冰运输。感受态细胞应在-80℃下保存，不可反复冻融和放置时间过长，以免降低感受态细胞的转化效率。
2、转化所有步骤均在无菌条件下操作。
3、包装中有0.1ng/μl的pUC19DNA，供对照试验使用。

使用方法：
1、取感受态细胞置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为50-100μl，可以根据实际情况分装使用。以下实验以50μl感受态细胞为例。
2、待感受态细胞融化后，向感受态细胞悬液中加入目的DNA(根据实际情况加入适量的DNA，通常100μl感受态细胞能够被1ng超螺旋质粒DNA所饱和)，用移液器轻轻吹打混匀，冰浴30分钟。
3、42℃热击45秒，迅速将离心管转移到冰浴中，冰上静置2-3分钟。
4、向每个离心管中加入450μl无菌的SOC或LB培养基(不含抗生素)，混匀后置于37℃摇床，150 rpm振荡培养45分钟使菌体复苏。
5、根据实验需求，取适量已转化的感受态细胞，加到含相应抗生素的SOC或LB固体琼脂培养基上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于37℃直至液体被吸收，倒置培养，37℃培养12-16小时。
注意：
1)涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA总量较多，可取少量转化产物涂布平板；若转化的DNA总量较少，可取200-300μl转化产物涂布平板。若预计的克隆数较少，可通过离心(4000rpm，2分钟)后吸除部分培养液，悬浮菌体后将其涂布于平板中。
2)新制备的固体培养基不易涂干，可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。
3)涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的转化菌落数过少，可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。

储存条件：-80℃。

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·高灵敏度ECL化学发光检测试剂盒
编号：WE0308
英文名称：eECL Western Blot Kit
规格：50ml|250ml
  高灵敏度化学发光检测试剂盒是免疫印迹实验中与辣根过氧化物酶(HRP)配套使用的的高灵敏增强型检测试剂盒。该产品基于新一代增强型化学发光底物研制而成，在HRP的催化下产生高强度的信号，能够检测pg级别的抗原。灵敏度高、发光信号强烈持久，可以使用照相技术(X-光胶片曝光)或者其他成像方法(如荧光或化学发光成像仪)进行检测。

试剂盒组成：

组成	50ml	250ml
eECL-A(Luminol Enhancer)	25ml	125ml
eECL-B(Peroxide)	25ml	125ml

注意事项：
1、在与膜发生接触过程中，请佩戴手套且使用干净镊子等洁净器材，避免蛋白污染及高背景。
2、避光条件下，配制好的化学发光检测底物工作液可在室温下稳定保存8小时。阳光或其他强光会影响工作液，故应避免强光长时间的照射。正常实验室灯光短时间照射不影响工作液的使用。
3、百奥莱博提供多种蛋白转移用膜、封闭液、一抗、酶标二抗、缓冲液等，详情请查询公司网站。

操作步骤：
1、二抗孵育完毕后，将印迹膜充分洗涤。
2、根据需要量，将eECL-A和eECL-B按照1：1的比例等体积混合，配制为化学发光检测底物工作液(一张8 cm×6 cm的膜大约使用1ml工作液)。
3、弃去洗涤缓冲液，将发光底物工作液滴加在印迹膜上，确保工作液覆盖整张膜，室温孵育3-5分钟。
4、用移液器吸去多余发光底物工作液，将印迹膜置于两层干净的塑料薄膜之间，此过程应小心完成，避免膜与膜之间产生气泡。
5、在暗室内进行X-光胶片曝光，或将膜放置到化学发光成像仪内，按照仪器说明书进行检测。
 

问题	可能原因	解决方法
胶片反相(白色条带，黑色背景)	系统中HRP过量	稀释HRP标记物至少10倍以上
膜上出现棕色或黄色条带
暗室中看到强烈发光
发光信号持续时间过短
信号较弱或者无信号	发光反应系统中HRP 过多，消 耗底物过快，引起信号迅速降低	稀释HRP标记物至少10倍以上
	抗原/抗体量不够	增加抗原/抗体使用量
	蛋白转移率低	优化转移系统
高背景	系统中HRP 过量	稀释HRP标记物至少10倍以上
	封闭不足	优化封闭程序
	封闭试剂选择不当	选择另一种封闭试剂
	冲洗不充分	增加冲洗时间，次数
	曝光过度	减少曝光时间
	抗原/抗体浓度过高	降低抗原/抗体使用浓度
蛋白条带为点状	蛋白转移失败	优化转移过程
	膜未平衡	按照说明书处理膜
	胶片与膜之间有气泡	曝光前去除所有气泡
出现非特异条带 (高背景、信号维持时间较短)	系统中HRP过多	稀释HRP标记物
出现非特异条带 (背景干净信号维持时间正常)	一抗用量过多	进一步稀释一抗
	SDS 导致非特异结合	在实验过程中避免使用SDS

储存条件：2～8℃，避光保存


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·His标签蛋白纯化试剂盒(包涵体蛋白)
编号：WE0266
英文名称：His-Tagged Protein Purification Kit(Inclusion Body Protein)
规格：5ml
  该镍柱纯化系统对6×His-tag蛋白具有显著特异吸附能力，能够高效一步纯化带有6个组*酸亲和标签的蛋白。该系统具有4个Ni2+螯合位点，较只有3个螯合位点的Ni-IDA结合Ni2+更为牢固，有效防止纯化过程中Ni2+脱落且增强对His标签蛋白的结合能力，提高纯化效率。较高的基团密度，大大提高了蛋白载量。该系统在天然或变性条件下，对来源于各种表达系统(如杆状病毒，哺乳细胞，酵母以及细菌)中的His标签蛋白，均有很好的纯化效果。本产品已螯合镍离子，可直接用于包涵体蛋白的纯化，使用方便，快捷。

镍柱参数：
支持物：CL-6B琼脂糖凝胶
载量：20-30 mg His标签蛋白/ml填料
粒径：50-160μM

试剂盒组成：

组份	5ml
Ni-Agarose Resin	5ml
Bacterial Protein Extraction Reagent	65ml
Urea	365 g
1 M Tris-HCl(pH7.9)	15ml
1 M Imidazole	65ml
3 M NaCl	120ml
Protease Inhibitor Cocktail	700μl
吸附柱(12ml)	1套

保存条件：Protease Inhibitor Cocktail，-20℃；Ni-Agarose Resin，2～8℃，避免冷冻；其它组分，2～8℃

注意事项：
1、在纯化之前采用电泳检测蛋白的可溶性，本试剂盒只适合于包涵体蛋白的纯化，如需纯化可溶性蛋白，请选择我公司的可溶性蛋白纯化试剂盒，货号为WE0267。
2、缓冲液中不建议使用 β-巯基乙醇、DTT和EDTA。
3、整个纯化过程中切忌凝胶脱水变干。
4、为提高纯化效率，首先确定Binding Buffer和Elution Buffer中Imidazole(咪唑)的最佳使用浓度。必要时可以使用线性或梯度浓度的Imidazole(咪唑)(10-500 mM)洗脱蛋白，并通过SDS-PAGE或Western Blotting来检测目的蛋白的纯度。
5、请使用高纯度的试剂配制缓冲液，并通过0.22μM或者0.45μM过滤器过滤。为避免柱子被堵塞，建议将裂解液进行离心，或者使用0.22μM或者0.45μM过滤器过滤。
6、柱再生时，保证每步洗完后都要用足够的去离子水冲洗至中性。
7、如果有些蛋白采用尿素的溶解效果不好，可以采用盐*(代"酸")胍进行溶解。

使用方法：

I 缓冲液的准备
包涵体蛋白纯化缓冲液配方：

组份	Tris-HCl(pH7.9)	Imidazole	NaCl	Urea
Binding Buffer	20 mM	5 mM	0.5 M	8 M
Elution Buffer	20 mM	500 mM	0.5 M	8 M

II 组装层析柱
1、将Ni-Agarose Resin填料混匀后加入层析柱，室温静置10分钟，待凝胶与溶液分层后，把底部的出液口打开，让乙醇通过重力作用缓慢流出。。
注意：
1)填料的上层是乙醇保护层，将填料和乙醇一起混匀，以每ml填料纯化20-30mg His标签蛋白计算，取需要的填料与乙醇的混合液加入层析柱。
2)如果乙醇不流出，可以给柱子一个外力，例如用大拇指对柱口轻轻按压一下，迫使乙醇流出。
3)本实验都是通过重力作用使溶液流出。
2．向装填好的柱中加入5倍柱体积的去离子水将乙醇冲洗干净后，再用8倍柱体积的Binding Buffer平衡柱子，平衡结束后即可上样。
注意：柱体积指的是填料的体积。

III 包涵体蛋白的纯化
1、收集菌体后，每100 mg菌体(湿重)加入2ml细菌裂解液(每1ml细菌裂解液中请预先加入10μl 蛋白酶抑制剂混合物)，如有需要可以超声裂解菌体。
注意：
1)当提取物粘度高或提取蛋白为包涵体时，建议加入DNase I和Lysozyme。每1ml 细菌抽提试剂中加入1μl DNase I(1000U/ml)，2μl Lysozyme(50 mg/ml)，DNase I和Lysozyme可单独从我公司购买，货号：Lysozyme(WE0214S)、 DNase I(WE0213S)，如使用其它公司产品，请按照相应说明书操作。
2)超声过程中保持菌液处于冰浴中，超声条件依赖于所使用的超声仪功率，探头种类，容器的大小形状，需实验中自己摸索，应避免连续超声导致的大量产热，可分成短时间，多次超声，通过一定的间隔时间避免溶液过热。最终菌液变清即可。
2、10000×g，4℃离心15分钟，分离上清和沉淀，并收集沉淀。
3、将沉淀重悬于Binding Buffer中，尽量混匀使包涵体充分溶解。
4、10000×g离心20分钟，收集上清。
注意：建议将离心后的上清以孔径为0.22μM或者0.45μM的滤膜过滤。
5、将上清负载上柱，流速为10倍柱体积/小时，收集流穿液。
注意：
1)本试剂盒中附带有一块筛板，使用时先将筛板加至填料的上层，再将处理好的上清负载上柱。该筛板可用于杂质较多的蛋白的过滤，防止过多的杂蛋白堵塞柱子，但是筛板放入柱子后不易取出。
2)通过控制加入的上清(菌体裂解液)的速度来控制流速。
6、使用15倍柱体积的Binding Buffer冲洗柱子，洗去杂蛋白。
7、使用适量Elution Buffer洗脱，收集洗脱峰。
注意：通过蛋白监测仪监测，洗脱峰可以分管收集，每1ml收集1管。
8、洗脱后，依次使用5倍柱体积的Binding Buffer，5倍柱体积的去离子水洗涤柱子，再用3倍柱体积的20%乙醇平衡(乙醇要将填料浸没)，封柱后2～8℃保存。
注意：
1)在纯化包涵体蛋白时，所有缓冲液均含有变性剂，可以降低Binding Buffer中的咪唑浓度(比5 mM更低)。洗脱时，若蛋白在较高pH下洗脱失败，可以选用低pH缓冲液作为洗脱缓冲液(pH6.5，pH5.9或pH4.5)。
2)如果是分段梯度洗脱，最大洗脱缓冲液中咪唑浓度未达到500 mM，则使用浓度为500 mM的咪唑进行洗脱10倍柱体积后，再进行第8步的操作。

Ⅳ 柱再生
当填料使用多次后，结合效率会有所下降(表现为流速变慢或填料失去蓝绿色)，可以用以下方法再生，提高填料的使用寿命和蛋白质的结合效率。
1、使用2倍柱体积的6 M盐*(代"酸")胍冲洗后，使用3倍柱体积的去离子水冲洗。
2、使用1倍柱体积的2% SDS冲洗。
3、依次使用1倍柱体积的25%、50%、75%和5倍柱体积的100%乙醇冲洗，再依次使用1倍柱体积的75%、50%和25%的乙醇冲洗。
4、使用1倍柱体积的去离子水冲洗。
5、使用5倍柱体积含50 mM EDTA缓冲液(PH8.0)冲洗。
6、使用3倍柱体积去离子水，3倍柱体积20%乙醇冲洗。
7、2～8℃保存。
8、再次使用前，需首先使用10倍柱体积去离子水冲洗，然后使用5个柱体积的50 mM NiSO4 再生，3个柱体积的Binding Buffer平衡。

储存条件：-20℃


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·RNase A溶液(100mg/ml)
编号：WE0225
英文名称：RNase A(100mg/ml)
规格：1ml

·抗His标签抗体琼脂糖介质
编号：WE0330
英文名称：Anti-His Mouse Monoclonal Antibody Agarose
规格：100μl|500μl
抗His标签免疫亲和介质是将抗His标签的单克隆抗体共价偶联到琼脂糖上，这种琼脂糖能进行免疫沉淀或者免疫共沉淀，能检测包含有His标签的蛋白。

抗体类型：鼠单克隆抗体IgG1
免疫原：人工合成多肽序列
应用范围：IP

·Western Ladder笔
编号：WE0294
英文名称：Western Blot Ladder Pen
规格：1000次
  蛋白免疫印迹(WB)是分子生物学、生物化学和免疫遗传学中常用的一种实验方法，经常用于检测抗体和抗原之间的特异性，而且能够对目的蛋白进行定性或定量分析研究。但是在试验中，抗原或者抗体往往都不是单一的成分，这些可能会导致在最终底片曝光出多条条带，或出现一些不明分子量的条带，或者目的条带的位置都不能确定。因此确定这些条带的分子量对我们进行下一步的分析就显得非常重要。
  目前，市场上有一些预染Marker，能很好监测我们的转膜效率，电泳转膜后能在杂交膜上看到Marker相应的条带，但是这些Marker 最终不能在底片上曝出条带。
  Western Blot Ladder Pen 正是要为您解决这个问题，通过转膜后对着预染Marker或经过丽春红染色确定的非预染Marker的各条带进行相应的标记，最终这些笔迹都能在目的位置曝光出相应的条带，用作分子量标准。同时也可以用它在膜上做其它标记，或者用作阳性对照。

注意事项：
1、本产品适用于HRP底物系统。
2、WB Ladder Pen使用完成后，请水平放置于2～8℃，请勿冻存于-20℃。
3、使用前请先将WB Ladder Pen在纸上画几笔之后再在膜上做相应的标记。
4、标记过程中请勿用力太大，以免破坏膜的结构，轻划即可。
5、随着笔使用时间的增加，信号可能会逐渐减弱。

操作步骤：

1、电泳的过程中，可以使用预染蛋白Marker或者非预染蛋白Marker。
2、常规的转膜后，将膜取下。
a. 使用预染蛋白Marker的NC膜：去离子水漂洗膜后，使用上下两层滤纸或者卫生 纸吸掉膜上多余的液体(请勿将膜吸的过干)。
b. 使用非预染蛋白Marker的NC膜：丽春红染膜后，用铅笔将非预染蛋白Marker的 各个条带标记。TBST漂洗膜，以完全去掉膜上的丽春红，使用上下两层滤纸或者 卫生纸吸掉膜上多余的液体(请勿将膜吸的过干)。
3、使用WB Ladder Pen在膜上做好相应的标记(轻划即可)，放置15秒之后将膜放置 于封闭液中封闭。
4、按常规步骤进行后续的WB试验。

储存条件：2～8℃

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