北京大片段Bst DNA聚合酶价格厂家

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名称：北京大片段Bst DNA聚合酶价格厂家
编号：BTN100209
英文名：Bst DNA Polymerase，Large Fragment
规格：800U
品牌：百奥莱博
产地：国产|进口
Bst DNA聚合酶大片段是将缺少5´→3´外切核酸酶结构域的Bacillus stearothermophilus(嗜热脂肪芽孢杆菌)DNA聚合酶基因在E.coli中表达纯化而得。

产品特点：
1. 5´→3´DNA聚合酶活性，但不具有5´→3´外切核酸酶活性，因此没有纠错功能。
2. 嗜温性，最适反应温度为68℃，建议反应温度不要超过70℃。
3. 强链置换能力，可以用于DNA链置换反应和LAMP扩增。还可用于68℃DNA测序(该条件尤其适用于富含GC的模板和纳克级的模板)。
4. 不能用于热循环测序或PCR，80℃ 10分钟即可失活。

产品组成：

 

成分	规格
Bst DNA聚合酶(8U/μL)	100μl
10×Bst Buffer	1.5ml
说明书	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存、有效期一年。长期贮存需补加100μg/mL BSA或0.1% Triton X-100。

1×Bst DNA聚合酶Buffer的组成：20mM Tris-HCl(pH8.8 @ 25 ℃)，10mM KCl，10mM(NH4)2SO4，2mM MgSO4，0.1% Triton X-100

活性定义及检测条件：1 U 指65℃条件下，30分钟内使10nmoL的dNTP 掺入酸不溶性沉淀物所需要的酶量。活性检测条件为：50mM KCl，20mM Tris-HCl(pH8.8),10mM MgCl2，30 nM M13mp18 ssDNA，70 nM M13 测序引物(-47)24 mer，200μm dATP，200μm dCTP,200μm dGTP,100μm[3H] dTTP，100μg/mL BSA和酶，65℃温育。

贮存条件：50mM KCl，10mM Tris-HCl(pH7.5)，1mM DTT，0.1mM EDTA，0.1% Triton X-100和50%甘油，贮存于-20℃。

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·线状DNA清除剂
编号：BTN101101
英文名称：Linear DNA Scavenger
规格：30次
分离纯化环状DNA(质粒DNA、线粒体DNA、叶绿体DNA和某些病毒DNA)的时候经常需要去除其中的基因组DNA污染，否则会对后续的PCR、WGA和测序等反应产生干扰。而基因组DNA一般都十分巨大，无论是线状(如真核细菌基因组DNA)还是环状(如细菌DNA)，经过常规的DNA纯化过程都会变成20-50 Kb大小的线状DNA，而上述环状DNA一般还能保持环状构型。根据这一特点，本公司开发了专门用于去除线状DNA的本产品。

产品特点：
1. 即开即用，不需用户花费大量时间去摸索各种条件。
2.酶法去除线性DNA，使线状DNA污染降级几个数量级，不会干扰后续试验。
3. 柱式法纯化回收环状DNA，能快速高效清除残留酶，得到的DNA可直接使用。
4.酶法处理不依赖于DNA序列，适于于任何线状DNA。而内切酶去除线状DNA则需要预先确知其在环状DNA上没有酶切位点。
5.适用的环状DNA包括质粒DNA、线粒体DNA、叶绿体DNA、环状病毒DNA等。
6. 得到的环状DNA可用于多种后续试验，尤其是WGA、PCR和测序等对污染敏感的试验。

产品组成：

成分	规格
线状DNA清除剂溶液A	100μl
线状DNA清除剂溶液B	30μl
微量核酸沉淀剂	2ml

储存条件：低温运输、-20℃保存，有效期一年。

使用方法：
1.在干净塑料离心管中，按下表加入各成分(30μl体系)：

成分	样品	正对照	负对照
DNA(1-10μg)	(样品DNA)	(自备环状DNA)	(自备线状DNA)
溶液A	3μl	3μl	3μl
溶液B	1μl	1μl	1μl
	补水到30μL	补水到30μL	补水到30μL

2. 加200μl石蜡油后，37℃保温16小时。注意：保温时间过短可能会形成短的DNA片段，影响后续反应，所以最好保温16小时。必须加石蜡油，否则长时间保温期间水分会蒸发到管盖上。如果使用热盖打开的PCR仪则可以不加石蜡油。
3. 65℃加热灭活线状DNA清除反应的酶。
4. 如果使用了石蜡油，则需要将30μl酶反应溶液转移到一个新的1.5mL离心管中，再加入60μL 微量核酸沉淀剂。如果没有使用石蜡油，则直接在30μL酶反应溶液中加入60μl 微量核酸沉淀剂。注意：微量核酸沉淀剂取用前需要充分摇匀。
5.室温15000g离心10分钟。
6. 弃上清后加自备的75%乙醇1mL，振荡混匀。
7. 15000离心3～5分钟，弃上清。
8. 再短暂离心后小心吸弃上清，沉淀即为回收的DNA沉淀，可溶于TE或水中。


北京大片段Bst DNA聚合酶价格厂家关键词：BTN100209,大片段Bst DNA聚合酶,Bst DNA Polymerase，Large Fragment


·非冻型血液RNA保存液
编号：BTN111202
英文名称：RNAhold Blood RNA non-freezing preservation solution
规格：100mL
由于血液富含RNase，因此血液RNA非常容易降解，是临床分子生物学研究中的一个棘手的问题。为解决此问题，本公司在非冻型组织RNA保存液的基础上，开发了本产品。

产品特点：
1. 能快速渗透到新鲜血液细胞内，抑制RNA分子的降解。保存的血液RNA常温可放置3天，4℃可放置5天，-20℃可放置3个月。
2. 操作简单，直接将本产品和新鲜血液细胞沉淀按比例混合即可。
3.适用于人新鲜血和哺乳动物新鲜血液，不适用于陈旧血液和冻凝血液，也不适用于禽类血液和其他动物血液。
4. 重复性好，效果跟进口同类产品相当。
5. 保存的样品可直接用本公司血液RNA提取试剂盒提取RNA。

储存条件：室温运输及保存，有效期两年。

使用方法：
注意：RNase污染无处不在，最好用本公司的高效无毒固相RNase清除剂处理RNA工作区域，千万不要使用烷基化试剂DEPC(相当于芥子*(代"气"))。

一:以白细胞为材料的保存方法(此法效果好于全血保存法)
1.室温1500-2000 g离心新鲜抗凝血液10-15分钟，最上层为血浆，最下层为红细胞，中间层为膜状的、含白细胞的Buffy Coat(含白细胞多的血液此层可能很厚)。
2. 吸出血浆后，小心将中间的白细胞层吸出(允许污染部分红细胞)到新的离心管中，加入5-10倍体积的本产品，混匀后放常温(不超过30℃)保存不超过3天或者放-20℃保存3月(放-20℃前需要现在4℃放置过夜，然后再离心去除保存液，最后再把细胞沉淀放到-20℃。如果直接放入-20℃，冰晶会刺破白细胞，释放出其中的RNA，在后续实验去掉上清时会丢失)。

二：以EDTA抗凝全血为材料的保存方法
3. 将血液取到EDTA抗凝管中后，迅速将0.5mL血液与1.5mL本产品混合，充分颠倒混匀，然后放常温(不超过30℃)保存不超过3天或者放-20℃保存3月(放-20℃前需要现在4℃放置过夜，然后再离心去除保存液，最后再把细胞沉淀放到-20℃。如果直接放入-20℃，冰晶会刺破白细胞，释放出其中的RNA，在后续实验去掉上清时会丢失)。

三：血液RNA的提取(本产品不含RNA提取试剂。此处以本公司的跟Trizol相当的动物RNA提取试剂盒操作步骤为参考。用户也可以使用其他RNA纯化试剂)
4. 提取RNA时，如果保存的白细胞在-20℃，则需要先室温化冻，如果保存在常温或4℃，则直接使用。
5. 取1.8mL混合液到新的2mL离心管中，5000g室温离心1分钟。
6.小心吸弃上清液(本产品)，细胞将形成沉淀(如果样品时全血，沉淀中将含有大量血液蛋白)。注意：上清一般会很浑浊，一定要尽可能弃尽。有时沉淀上面有白色晶体出现，属于正常现象。
7.在细胞沉淀中加入动物RNA提取试剂盒 1mL溶液A，剧烈震荡30秒(不能感觉到震荡即可，一定要看见管底液体旋转起来，否则只是液体表面的震动，下同)。震荡后颠倒几次看溶液是否均匀，如果有颗粒状物体说明还需要震荡裂解。
8.室温放置5分钟以使细胞充分裂解。
9. 将0.2mL自备的*仿加入到离心管中，剧烈震荡30秒。
10. 12000～15000g4℃离心3分钟。一般上清为无色的水相(含RNA，约0.5-0.9mL)；中间层为白色，含有DNA、蛋白质和其他细胞破碎物，不要触及；下层为有机相，一般呈深红色。注意：有时水相比重大于有机相，出现反相现象，此时应该取下面的水相。
11.小心将水相转移到另一自备的1.5mL塑料离心管中。如果水相超过0.75mL，则需要分成2管，否则在下步没法加入等体积的异丙醇。
12. 加入等体积的异丙醇到水相中，充分颠倒混匀。
13. 12000～15000g4℃离心10分钟沉淀RNA。
14. 吸弃上清。注意：如果离心后出现两个相，则需要吸弃上面的一相，然后在下相(含RNA)中加入一倍体积的超纯水和一倍体积的异丙醇，混匀后12000～15000g4℃离心10分钟沉淀RNA，吸弃上清。
15. 将75% RNase-free乙醇加入到RNA沉淀中，震荡几秒后12000～15000g4℃离心1分钟。
16. 弃上清
17. 12000～15000g4℃离心半分钟，用移液枪去除残留的液体。
18. 将20-50μL DEPC处理的水加入到沉淀中并吹打溶解，立即用于下述完整性、产率和纯度的检测，也可直接用于后续RT-PCR等试验或存放于-80℃待用。

四: RNA的检测(列出步骤仅供参考，本产品不提供相关产品)
19. RNA完整性的电泳检测：强烈建议用户使用甲醛变性胶进行RNA电泳，因为非变性胶中单链RNA分子会自生折叠成各种形状，尤其不能使用DNA上样液，因为没有经过去RNase处理。
20. RNA产量产率测定：将5-10μl RNA用TE缓冲液(pH8.2)稀释10倍后检测其在OD260的光吸收。通过光吸收可以得出RNA浓度(1 OD260的RNA=40μg/mL)，进而计算出RNA的产量(浓度X体积)和产率(RNA产量/组织用量)。人血RNA产率一般为2-5μg/mL。
21. RNA纯度测定：无污染的总RNA的OD260/OD280一般在2.0左右(具体数值与其碱基组成和溶液成分等多种因素有关)，高于此范围则分别表示样品可能有蛋白质污染，但一般不影响RT-PCR等反应。



北京大片段Bst DNA聚合酶价格厂家关键词：BTN100209,大片段Bst DNA聚合酶,Bst DNA Polymerase，Large Fragment

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