SuperTOPO-Amp TA克隆试剂盒(国产,进口)

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百奥莱博专业生产供应SuperTOPO-Amp TA克隆试剂盒(国产,进口)，我公司销*(代"售")全品类的分子生物学试剂，价格优惠，欢迎广大科研工作者垂询订购。

名称：SuperTOPO-Amp TA克隆试剂盒(国产,进口)
产地：国产|进口
品牌：百奥莱博
英文名：SuperTOPO TA Cloning Kit
规格：25次
编号：BTN160686-25A
本试剂盒是基于Topoisomerase能够在几秒钟之内高速连接DNA片段的原理开发的无背景克隆试剂盒，它使用了本公司通过定点突变改良的TOPO酶，连接效率比野生型更高。

产品特点：
1.高效快速，连接反应几乎在几秒钟内完成，连接率几乎达到100%。
2.适用于具有A 尾巴的DNA片段使用。
3. 无杂带或引物二聚体的PCR扩增产物可以不经过纯化直接用于连接反应。
4.转化时只需要37℃,10分钟复苏即可涂盘，免去冰浴、热休克和复苏步骤。
5. 零背景，无需IPTG-X-Gal蓝白斑筛选，故不需要IPTG-X-Gal培养基。
6. 本试剂盒按10μL标准反应体系，有25次和50次两种规格包装供选择。
7. 提供含Amp和Kan两种抗性的载体供选择(BTN160686-25A是含Amp抗性TOPO载体，BTN160686-25K是含Kan抗性TOPO载体)。

试剂盒组成：

 

成分	规格
SuperTOPO-Amp载体	25μl(BTN160686-25A)
SuperTOPO-Kan载体	25μl(BTN160686-25K)
连接缓冲液	25μl
超纯水	1ml
说明书	1份

注意：BTN160686-25A提供SuperTOPO-Amp载体，BTN160686-25K提供SuperTOPO-Kan载体。

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：

1. PCR扩增或酶切回收DNA插入片段。如果是PCR制备插入片段，所用引物不能磷酸化，使用Taq系列的DNA聚合酶。
2.电泳检测并相对定量PCR片段或酶切回收片段(跟DNA marker比较)。
 并根据插入片段长度和下表确定每次连接反应需要的最佳用量：

插入片段长度	最佳用量
100-1000bp	20-50ng
1000-2000bp	50-100ng
2000-5000bp	100-200ng

3.在一个干净的塑料离心管中，室温下(不要放在冰上)设置如下连接反应体系：

成分	用量
纯化后的PCR产物	不超过8μl(详见注意事项)
SuperTOPO-Amp载体或 SuperTOPO-Kan载体	1μl
连接缓冲液	1μl
超纯水	补到10μL

 注意：如果使用未经纯化的PCR产物，则需要加入量不能超过1μL，否则PCR 体系会干扰连接体系。
4. 轻柔吹打混匀后，短暂离心，常温(20-30℃)放置0-5分钟。如果在冬天室温低于20℃，建议使用25℃水浴或金属浴。注意：连接时间超过5分钟的话连接效率会降低。
5. 如果当天不转化，可以将离心管放-20℃保存。如果转化，则取5μL连接液加到50-100μL刚刚融化的感受态细胞中，轻柔混匀。注意：本产品要求感受态细胞的转化效率不得低于5﹡10E7cfu/ug。
6. 如果片段长度小于2Kb，则不需要冰浴和热激，直接在离心管中加入500μL不含抗菌素的SOC或LB培养基，然后取200μL涂盘。也可以先3000g离心2分钟后，弃掉大部分上清，只留约100μl左右，然后重悬细菌后全部涂盘在含Amp(对SuperTOPO-Amp)或Kan(对SuperTOPO-Kan)的培养皿上，37℃过夜培养。
7. 如果片段长度长于2Kb，则按常规转化方式，先冰浴2-30分钟，然后42℃热激30秒，冰上防放置2分钟，再在离心管中加入500μL不含抗菌素的SOC或LB培养基，37℃ 250rpm培养60分钟，然后取200μL涂盘。也可以先3000g离心2分钟后，弃掉大部分上清，只留约100μL左右，然后重悬细菌后全部涂盘在含Amp(对SuperTOPO-Amp)或Kan(对SuperTOPO-Kan)的培养皿上，37℃过夜培养。
8. 用菌落PCR、直接测序或其他方法鉴定重组子。

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