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445
- 英文名:
One Step Pcr Cloning Kit
- 保质期:
长期
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件:
2~8℃
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
一步法(快速/无缝)克隆试剂盒优惠由老牌试剂供应北京百奥莱博供货并提供技术支持,本产品用于生化科研试验,本产品质量好,且极具价格优势,深为用户称道,了解更多一步法(快速/无缝)克隆试剂盒等克隆与表达产品请联*(代"系")我司咨询订购。
名称:一步法(快速/无缝)克隆试剂盒优惠
品牌:百奥莱博
英文名:One Step Pcr Cloning Kit
规格:25T
编号:SY0279
一步法(快速/无缝)克隆试剂盒是一款简单、快速、高效的DNA定向克隆产品,该试剂盒可以将PCR产物定向克隆至任意载体的任意位点,可高效克隆50 bp~10 kp片段。将载体在克隆位点进行线性化,并在插入片段PCR引物5’端引入线性化克隆载体末端序列,使得插入片段PCR产物5’和3’最末端分别带有和线性化克隆载体两末端对应的完全一致的序列 (15 bp~20 bp)。将这种两端带有载体末端序列的PCR产物和线性化克隆载体按一定比例混合,在重组酶Exnase的催化下,仅需反应30 min即可进行转化,完成定向克隆。克隆阳性率可达95%以上。克隆载体酶切产物或PCR产物和插入片段PCR产物可以不进行DNA纯化直接用于重组克隆,极大的简化了实验步骤。
试剂盒中包含有重组反应所需缓冲液和重组酶Exnase,Exnase中添加了独特的重组增强因子,显著提高重组克隆效率,即便使用低效率感受态细胞 (107 cfu/μg)也可实现高效克隆 (100 cfu/ng Vector),而且Exnase还兼容常规酶切、PCR反应体系。
一步法(快速/无缝)克隆试剂盒可用于快速克隆、高通量克隆、无缝克隆和DNA定点突变。
产品组份:
5×CE Buffer——————100μl
Exnase——————50μl
500 bp control insert (25 ng/μl)——————5μl
pUC 19 control vector, linearized (50 ng/μl)————5μl
实验流程概览
1) 线性化克隆载体制备;
2) 插入片段扩增引物设计;
3) 插入片段PCR扩增;
4) 进行重组反应;
5) 反应产物转化、涂板;
6) 克隆鉴定。

图一 实验流程概览
注:插入片段PCR扩增时,引物5’端引入线性化克隆载体末端同源序列 (图中以蓝色和橙色标记),使得扩增产物5’和3’最末端序列分别和线性化克隆载体两末端序列完全一致。
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·R-藻红蛋白标记山羊抗兔小鼠IgG F(ab)2片段(Fcγ片段特异性)
编号:SY0690
英文名称:R-Phycoerythrin AffiniPure F(ab)2 Fragment Goat Anti-Mouse IgG,FcγFramgment Specific
规格:100μl
本品是由R-藻红蛋白标记的山羊抗小鼠IgG(H+L)F(ab)2片段,是将山羊抗血清经胃蛋白酶消化并使用抗原偶联的琼脂糖微珠亲和色谱纯化所得,借此可去除Fc片段和完整IgG分子。免疫电泳和/或ELISA法检测显示本品特异性结合小鼠IgG重链的Fc段,而不与小鼠免疫球蛋白Fab片段发生反应。本品预先与相近物种包括人、牛、马的血清蛋白经过亲和吸附处理,ELISA和/或固相免疫吸附检测证实本品与以上物种几乎无交叉反应。但可能会与其他物种免疫球蛋白发生交叉反应。本品不会与小鼠IgM以及非免疫球蛋白类的血清蛋白发生交叉反应。
R-藻红蛋白的Amax(最大激发波长)为490nm,545nm,566nm,Emax(最大发射波长)为580nm。本品可做多标实验,应用于流式细胞术(FC)等实验。
藻胆(色素)蛋白浓度:0.5mg/ml
缓冲液:0.01M 磷酸*,0.25M *化*, pH 7.6
稳定剂:15mg/ml BSA(无IgG,蛋白酶)
荧光素:Phycoerythrin Amax=490nm,545nm,566nm;Emax=580nm
防腐剂:0.05% 叠氮化*
推荐稀释比例:1:50~200(适用于大多数实验)
储存条件:-20℃,避免反复冻融,有效期一年。
·PU.1-Luc荧光素酶报告基因质粒
编号:SY0107
英文名称:PU.1 luciferase reporter plasmid
规格:1μg
PU.1荧光素酶报告基因(报告基因质粒)(PU.1 luciferase reporter plasimd)是用于检测PU.1转录活性水平为目的的报告基因。PU.1转录因子因其DNA结合区识别共有序列GAGGAA,故该区又被称为PU.1 box。PU.1主要在造血系统如髓细胞和B淋巴细胞中表达,调节关键髓系基因的转录从而调控造血系统的分化。
PU.1报告基因主要用于检测细胞中PU.1的活性、药物研究以及基因过表达和RNAi的表型分析等。
pGMPU.1-Lu是我公司改造后的哺乳动物真核表达载体,在其多克隆位点插入了多个PU.1结合位点,可以高灵敏度地检测PU.1的激活水平。同时,对载体中预测出的其它转录因子以外的结合位点进行了适当的突变,增加了质粒的转录因子结合特异性。由于质粒体积减小,使得PU.1报告基因更易于转染。
质粒图谱

注意事项
本质粒未经我公司允许不得用于任何商业用途,也不得移交给订货人实验室以外的任何人或单位。
为了您的健康,实验操作时请穿实验服和带一次性手套。
使用说明
pGMPU.1-Lu可以采用常规转染方法转染哺乳动物细胞。用荧光素酶检测试剂盒或双荧光素酶检测试剂盒进行检测。
储存条件:-20℃。
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文献和实验液,37度150r/min温和振荡培养60min,涂布,室温放置约20分钟后放于37度恒温培养箱过夜培养(17-20h)。 更多相关链接(生物谷) 试剂库 >> 克隆与表达 >> 感受态细胞 试剂库 >> 细胞 >> 感受态细胞 试剂库 >> 克隆与表达 >> 克隆试剂盒 试剂库 >> 克隆与表达 >> 转化 试剂库 >> 细胞培养 >> 培养基/琼脂混合物 试剂
一、Lighteningssembly Cloning Kit 传统克隆方法:引物设计合成、PCR、连入克隆载体、酶切获得插入片段,酶切获得线性载体,连接获得重组质粒。需酶切,引物设计受酶切位点限制;需连入克隆载体;步骤多,耗时长;效率低。 北京康碧泉公司代理的Gene-Foci试剂盒的克隆方法:引物设计合成、PCR获得插入片段,PCR或酶切获得线性载体,连接获得重组质粒。无需酶切,引物设计不受酶切位点限制;无需连入克隆载体;步骤少,速度快;高连接效率,高阳性克隆
1. 质粒载体构建不成功(目的片段和载体不能成功连接)的常见原因分析 ①DNA 片段纯度差:体系中的杂质会降低连接效率,如果使用不纯化直接连接的方法一直无法成功构建载体,可以考虑进行纯化后再进行连接; ②目的片段和载体片段使用比例悬殊,或者用量过多或过少:目的片段和载体的摩尔比需要控制在一定范围之内,否则会影响连接效率,具体比例可以草靠连接酶说明书; ③连接条件不当:比如连接时间不足、温度不合适、酶失活等,可以通过设置对照组来排查原因; ④引物设计问题:比如通过无缝克隆的方式进行连接,同源
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