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- NobleRyder
- P4816
- 北京
- 2025年12月13日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
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99
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12个月
- 供应商：
北京诺博莱德科技有限公司
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已收到实际货物为准
产品简介：
Triton X-100细胞裂解液是一种经典的快速裂解细胞组织并获得蛋白的裂解液。所获得的蛋白质可以用于PAGE电泳，Western，免疫沉淀(Immunol Precipitation，IP)和免疫共沉淀(co-IP)等。Triton X-100、NaCl、Tris-HCl等组成，并含有多种蛋白酶抑制剂成分，可以有效抑制蛋白的降解，并维持原有的蛋白间相互作用。作用原理是利用去污剂Triton X-100破坏脂质双分子层，溶解胞质和细胞膜，破坏分子间微弱结合键的大部分蛋白质抗原。其浓度在0.1%～1%时即可满足几乎所有溶解的需求，且可补充等离子浓度的盐及使pH接近中性。不宜用Bradford法测定由Triton X-100 Lysis Buffer获得样本的蛋白浓度。
产品组成：
| 编号 名称 |
P4816 | Storage |
| Triton X-100 Lysis Buffer | 100ml | -20℃ |
| PMSF(100mM) | 1.5ml | -20℃ |
| 使用说明书 | 1份 | |
操作步骤(仅供参考)：
(一)贴壁培养细胞
取Triton X-100 Lysis Buffer室温溶解混匀，加入PMSF，使PMSF终浓度为1mM。
去培养液，用PBS、NS或无血清培养液清洗1次，低速离心，弃上清，留取沉淀。
按照6孔板每孔加入150～250μl含有PMSF的裂解液的比例加入Triton X-100 Lysis Buffer。移液器轻轻吹打，使裂解液和细胞充分接触。置于冰上或4℃裂解，通常裂解液作用于细胞1～3s内，细胞就会被裂解。通常6孔板每孔细胞加入150μl裂解液已经足够，但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到200～250μl。
10000～12000g，4℃离心5～10min(如无低温离心机，室温下离心亦可)，取上清。
进行后续的SDS-PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。
(二)悬浮培养细胞
取Triton X-100 Lysis Buffer室温溶解混匀，加入PMSF，使PMSF终浓度为1mM。
低速离心悬浮细胞，弃上清，收集沉淀。
用手指轻弹细胞，使其松散。按照6孔板每孔细胞加入150～250μl含有PMSF的裂解液的比例，加入NobleRyder Triton X-100 Lysis Buffer 。通常6孔板每孔细胞加入150μl裂解液已经足够，但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到200～250μl。再用手指轻弹以充分裂解细胞，充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。
10000～12000g， 4℃离心5～10min(如无低温离心机，室温下离心亦可)，取上清。
进行后续的SDS-PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。
(三)组织样本
取Triton X-100 Lysis Buffer室温溶解混匀后，加入PMSF，使PMSF终浓度为1mM。
把组织剪切成细小的碎片，越小越好。
取在液氮或超低温冰箱中冷冻30min以上的组织，迅速用液氮研磨，研磨过程尽量控制在1～2min之内，以减少蛋白的降解。
按照每20mg组织加入150～250μl裂解液的比例加入含有PMSF的裂解液。冰上或4℃裂解15～30min。
步骤3、4亦可以采用如下过程：按照每20mg组织加入150～250μl裂解液的比例加入含有PMSF的Triton X-100 Lysis Buffer。用玻璃匀浆器或组织研磨器匀浆，直至充分裂解，该过程尽量控制在1～2min之内，以减少蛋白的降解。
10000～12000g，4℃离心5～10min(如无低温离心机，室温下离心亦可)，取上清。
进行后续的PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。
注意事项：
去除贴壁细胞的培养液后，如果血清中的蛋白没有干扰，可以不用清洗。
如果裂解不充分可以适当增加裂解液的用量，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量。
如果细胞量较多，必需分装成50～100万细胞/离心管，然后再裂解。大团的细胞较难裂解充分，而少量的细胞由于裂解液容易和细胞充分接触，相对比较容易裂解充分。
如果组织样品本身非常细小，可以适当剪切后直接加入裂解液裂解，通过强烈Vortex使样品裂解充分。然后同样离心取上清，用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便，不必使用匀浆器，缺点是不如使用匀浆器那样裂解得比较充分。
溶解Triton X-100 Lysis Buffer时，应尽量缩短溶解时间，避免有效成分失效。
裂解产物中经常会出现一小团透明胶状物，属正常现象。该透明胶状物为含有基因组DNA等的复合物。在不检测和基因组DNA结合特别紧密的蛋白的情况下，可以直接离心取上清用于后续实验。如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白，则可以通过超声处理打碎打散该透明胶状物，随后离心取上清用于后续实验。如果检测一些常见的转录因子，例如NF-KB、p53等时，通常不必进行超声处理，就可以检测到这些转录因子。
细胞裂解的操作步骤，应置于冰上或4℃进行。
有效期： 12个月有效。
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文献和实验Rapid Method for Preparation of Genomic DNA from P.aeruginos
buffer by pipetting gently up and down until the pellet is completely resuspended. Pellet the cells by centrifuging as before. Resuspend the pellet in 135 µl TNE buffer. Add 135 µl of TNE buffer containing 2% Triton X-100.
Rapid Method for Preparation of Genomic DNA from P. aeruginosa
TNE buffer. Add 135 µl of TNE buffer containing 2% Triton X-100. Add 30 µl freshly prepared lysozyme (5 mg/ml). Mix well by tapping the tube. Incubate in a 37℃ water bath for 30 minutes. Add 15 µl proteinase K solution (20 mg/ml). Mix
of gels containing the nonionic detergent Triton X?100, referred to as Triton/acetic acid/urea (TAU) polyacrylamide gels, for analysis of histones. Also included are support protocols detailing several accessory techniques: assembly of gel plates
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