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- 上海
- 2025年12月24日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 提供商：
上海代轩生物科技有限公司
- 服务名称：
普通RT-PCR
- 规格：
胶/基因
普通RT-PCR
聚合酶链反应是以cDNA为模板，利用变性，退火和延伸多步骤、多循环来扩增目的DNA片段的分子生物学技术。在该反应过程中，目的DNA产量呈指数增长，使一些极为微量DNA样品检测成为可能。具有反应特异性强，灵敏度高，简单快捷，对样品纯度要求低等特点。
一、实验步骤
1、样品RNA的提取
2、RNA质量检测
3、将样品RNA逆转录为cDNA
4、PCR扩增
5、琼脂糖凝胶电泳
6、照相采图，测定条带灰度值或吸光度值
7、提供实验报告（实验数据及结果分析图表）
二、提供结果
可提供引物序列，琼脂糖电泳图，原始数据及处理后的正式实验数据
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文献和实验realtime PCR 在PCR体系中加有sybr green或者探针，普通的RT-PCR则没有。realtime PCR上机后从电脑上直接读出结果，普通的RT-PCR需要跑胶、紫外线下观察结果或用凝胶成像系统分析。realtime PCR一次测多种mRNA表达需要多色荧光，这就需要仪器支持多色荧光并且探针用不同荧光标记。普通的RT-PCR，可以采取双重PCR的方法同时检测2种mRNA表达。
随机引物 适用于长的或具有发卡结构的 RNA。适用于 rRNA、mRNA、tRNA 等所有 RNA 的反转录反应。主要用于单一模板的 RT-PCR 反应。 Oligo dT 适用于具有 PolyA 尾巴的 RNA。（原核生物的 RNA、真核生物的 Oligo dT rRNA 和 tRNA 不具PolyA 尾 巴。）由于 Oligo dT 要结合到 PolyA 尾巴上，所以对 RNA 样品的质量要求较高，即使有少量降解也 会使全长 cDNA 合成量大大减少。 基因特异性引物 与模板序列互补
定量RT-PCR （Quantitative RT-PCR）
A = B(1+e) n A=amplified products, B=input templates, n=cycle number, and e=amplification efficiency. Factors affecting amplification efficiency in the RT-PCR process include the efficiency of reverse
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