pUC18载体价格

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北京百奥莱博专注于生命科学和生物技术领域，致力于为客户提供包括pUC18载体价格在内的一系列分子生物学试剂产品，并提供一系列相关的技术服务。

名称：pUC18载体价格
规格：2μg
品牌：百奥莱博
英文名：pUC18 vector
编号：RFT117
产地：国产|进口
pUC18载体适用于双脱氧法对DNA 片段进行测序，它克隆的DNA 片段比使用 M13 phage作载体时克隆的片段长。 由于在 lacZ 领域中含有多克隆位点， 因此可以在含有 IPTG、 X-Gal的平板培养基上通过蓝白筛选判断载体中有无 DNA 片段的插入。同时还可以通过载体上的lac promoter表达外源基因， 使用M13系列的通用引物对插入载体中的DNA片段进行测序。



贮存液：10 mM Tris-HCl(pH8.0) ，1 mM EDTA。
链长：2686 bp。
制备：使用 CsCl-EtBr 密度梯度超离心法纯化。
纯度：
1、含 70%以上的双链 Covalently closed circular DNA(RFI) 。
2、用双脱氧测序法确认多克隆位点。
3、确认 EcoR I，Sac I，Kpn I，Sma I，BamH I，Xba I，Sal I，Pst I，Sph I 和 Hind III只有一个酶切位点。
用途：
1、外源基因的克隆以及使用 lac 启动子进行表达。
2、使用 M13 系列引物进行 DNA测序。

储存条件：-20℃。

我公司的pUC18载体价格，性价比高，货期短，送货上门，欢迎您来电咨询购买，另外，我公司还生产供应销*(代"售")下列产品：

·5×TBE
编号：RFT190
规格：500ml|10×500ml
本品常用于DNA琼脂糖凝胶电泳。

·即用型DAPI染色液
编号：RFT199
英文名称：DAPI Stain Solution
规格：10ml
本品是适用于常见细胞和组织细胞核染色的染色液。本DAPI染色液为即用型，可以直接用于固定细胞或组织的细胞核染色。

DAPI是一种可以穿透细胞膜的蓝色荧光染料。和双链DNA结合后可以产生比DAPI自身强20多倍的荧光。和EB(ethidium bromide)相比，对双链DNA的染色灵敏度要高很多倍。 DAPI染色常用于细胞凋亡检测，染色后用荧光显微镜观察或流式细胞仪检测。DAPI也常用于普通的细胞核染色以及某些特定情况下的双链DNA染色。 DAPI的最大激发波长为340nm，最大发射波长为488nm；DAPI和双链DNA结合后，最大激发波长为364nm，最大发射波长为454nm。

操作步骤：
1、对于细胞或组织样品，固定后，适当洗涤去除固定剂。随后如果需要进行免疫荧光染色，则先进行免疫荧光染色，染色完毕后再按后续步骤进行DAPI染色。如果不需要进行其它染色，则直接进行后续的DAPI染色。
2、对于贴壁细胞或组织切片，加入少量DAPI染色液，覆盖住样品即可。对于悬浮细胞，至少加入待染色样品体积3倍的染色液，混匀。
3、室温放置3-5分钟。
4、吸除DAPI染色液，用TBST、PBS或生理盐水洗涤2-3次，每次3-5分钟。
5、直接在荧光显微镜下观察或封片后荧光显微镜下观察。细胞发生凋亡时，会看到凋亡细胞的细胞核呈致密浓染，或呈碎块状致密浓染。

注意事项：
1、本DAPI染色液的浓度经过优化，确保可以满足各种常规染色的需要。
2、荧光染料都存在淬灭的问题，建议染色后尽量当天完成检测。
3、为减缓荧光淬灭可以使用抗荧光淬灭封片液。
4、DAPI对人体有一定刺激性，请注意适当防护。

储存条件：-20℃避光，有效期12个月。


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·Western及IP细胞裂解液
编号：RFT157
英文名称：Cell lysis buffer for Western and IP
规格：100ml
本产品是一种在非变性条件下裂解细胞的裂解液。本细胞裂解液裂解的细胞，可以用于PAGE，Western，免疫沉淀和免疫共沉淀。Western及IP细胞裂解液的主要成分为20mMTris (pH7.5)，150mMNaCl，1% Triton X-100，以及sodiu*(代"m") pyrophosphate，β-glycerophosphate，EDTA，Na3VO4，leupeptin等多种抑制剂。可以有效抑制蛋白的降解，并维持原有的蛋白间相互作用。用Western及IP细胞裂解液裂解得到的蛋白样品，可以用BCA蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度。由于含有较高浓度的Triton X-100等干扰物质，不能用Bradford法测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度。

使用方法：
对于培养细胞样品：

1、融解Western及IP细胞裂解液，混匀。取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的最终浓度为1mM。
2.1、对于贴壁细胞：去除培养液，用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍(如果血清中的蛋白没有干扰，可以不洗)。按照6孔板每孔加入100-200微升裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞1-2秒后，细胞就会被裂解。
2.2、对于悬浮细胞：离心收集细胞，用手指把细胞用力弹散。按照6孔板每孔细胞加入100-200微升裂解液的比例加入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多，必需分装成50-100万细胞/管，然后再裂解。大团的细胞较难裂解充分，而少量的细胞由于裂解液容易和细胞充分接触，相对比较容易裂解充分。
3、充分裂解后，10000-14000g离心3-5分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。
裂解液用量说明：通常6孔板每孔细胞加入100微升裂解液已经足够，但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到150微升或200微升。

对于组织样品：
1、把组织剪切成细小的碎片。
2、融解Western及IP细胞裂解液，混匀。取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的最终浓度为1mM。
3、按照每20毫克组织加入100-200微升裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量。)
4、用玻璃匀浆器匀浆，直至充分裂解。
5、充分裂解后，10000-14000g离心3-5分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。
6、如果组织样品本身非常细小，可以适当剪切后直接加入裂解液裂解，通过强烈vortex使样品裂解充分。然后同样离心取上清，用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便，不必使用匀浆器，缺点是不如使用匀浆器那样裂解得比较充分。

注意事项：
1、为取得最佳的使用效果，尽量避免过多的反复冻融。可以适当分装后使用。
2、需自备PMSF。
3、裂解样品的所有步骤都需在冰上或4℃进行。

储存条件：-20℃，有效期12个月。


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·1kb plus DNA ladder(300～10000bp)
编号：RFT004
规格：100T(2×250μl)
本产品是由12条带状双链DNA条带组成的DNA Ladder，适用于琼脂糖凝胶电泳中DNA条带的分析。含有1×loading buffer，可根据实验需要，直接取2-5μl电泳，使用方便，电泳图像清晰。12条带包括300，500，800，1000，1500，2000，3000，4000，5000，6000，8000，10000bp。其中2000bp条带含量为100ng/5μl，其余条带浓度含量为50ng/5μl。



使用方法：
1. 取2-5μl本产品加入到琼脂糖凝胶的加样孔中进行电泳。
注：根据电泳梳子的厚度和宽度确定上样量。每1mm×1mm(厚度×宽度)加样孔上样1μl；窄齿梳子(一般为1mm×2mm)上样2μl；宽齿梳子(一般为1mm×5mm)上样5μl。如果使用厚齿梳子或宽于5mm的梳子，可以适当调整上样量。
2. 建议电泳条件：凝胶浓度为1.0％，凝胶长度8-10cm，电泳电压4-10v/cm，电泳时间35-40分钟。
3. 通过EB染色后紫外灯下观察条带。

注意事项：
1. 琼脂糖的质量对DNA的电泳有很大影响，电泳时请尽量使用质量优等的琼脂糖。
2. 请使用新鲜配制的电泳缓冲液和新鲜配制的琼脂糖凝胶进行电泳，以保证Marker良好的分离效果。

储存条件：-20℃，有效期1年。

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