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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
室温(15~30℃)
- 保质期:
长期
- 英文名:
Gel DNA Extraction Micro Kit
- 库存:
409
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
北京百奥莱博专业生产供应北京微量凝胶DNA回收试剂盒厂家,我公司销*(代"售")全品类的分子生物学试剂,价格优惠,欢迎广大科研工作者垂询订购。
名称:北京微量凝胶DNA回收试剂盒厂家
品牌:百奥莱博
英文名:Gel DNA Extraction Micro Kit
编号:WE0169
产地:国产|进口
规格:50次
本试剂盒专用于从普通或低熔点琼脂糖凝胶中回收纯化微量DNA片段,溶胶速度快,并利用硅基质膜技术,以非常小的终洗脱体积(可少至10μl),从琼脂糖凝胶中,快速纯化50 bp-50 kb的DNA片段,纯化过程有效去除引物、寡核苷酸、酶等杂质,从而可获得高纯度、高浓度,完整性好的DNA,回收率高达90%。本试剂盒回收纯化的DNA可直接用于测序、连接和转化、酶切、标记、体外转录等分子生物学实验。
试剂盒组成:
| 组份 | 50次 |
| Buffer PG | 25ml |
| Buffer PS | 15ml |
| Buffer PW(浓缩) | 10ml |
| Buffer EB | 10ml |
| 离心吸附柱DE及收集管 | 50套 |
自备试剂:无水乙醇,异丙醇。
实验前准备及重要注意事项/strong>:
1、所有组分可在干燥、室温(15~30℃)环境稳定保存1年,将吸附柱置于2~8℃可保存更长时间。
2、第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明在Buffer PW中加入无水乙醇。
3、使用前请检查Buffer PG如果出现结晶或者沉淀,可在37℃水浴中放置3-5分钟,即可恢复澄清。
4、电泳时最好使用新的电泳缓冲液,避免影响电泳和回收效果。
5、切胶时,紫外照射时间应尽量短,以免对DNA造成损伤。
6、回收率与初始DNA量和洗脱体积有关,初始量越少,洗脱体积越少,回收率越低。
7、将水浴锅预热至50℃。
8、Buffer PG中含有pH指示剂,当pH≤7.5时溶液的颜色为黄色,此时DNA才能够有效的与膜结合,当pH值偏高时溶液的颜色变为桔红色和紫色,需要进行调整。
操作步骤:
1、将单一目的DNA条带从琼脂糖凝胶中切下(尽量切除多余部分),放入干净的离心管(自备)中,称量计算凝胶重量(提前记录离心管重量)。
注意:若胶块的体积过大,可将胶块切成碎块。
2、向胶块中加入1倍体积Buffer PG(如凝胶重为100 mg,其体积可视为100μl,依此类推)。
3、50℃水浴温育,其间每隔2-3分钟温和地上下颠倒离心管,以确保胶块充分溶解。如果还有未溶的胶块,可再补加一些溶胶液或继续放置几分钟直至胶块完全溶解。
注意:
1)凝胶完全融解后胶溶液为黄色,可进行后续操作;若胶溶液为桔红色或紫色,可向胶溶液中加10-30μl 的3 M醋酸*(pH5.0),将溶液的颜色调为黄色后再进行后续操作。
2)胶块完全溶解后最好将胶溶液温度降至室温再上柱,吸附柱在较高温度时结合DNA的能力较弱。
4、(可选步骤)当回收片段<300 bp时,应加入1/2胶体积的异丙醇,上下颠倒混匀(如凝胶重100 mg,则加入50μl的异丙醇)。
5、柱平衡:向已装入收集管中的吸附柱DE中加入200μl Buffer PS,13000rpm(~~~16200×g)离心1分钟,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。
6、将步骤3或4所得溶液加入到已装入收集管的吸附柱中,室温放置2分钟,13000rpm离心1分钟,倒掉收集管中的废液,将吸附柱放回收集管中。
7、向吸附柱中加入450μl Buffer PW(使用前先检查是否已加入无水乙醇),13000rpm离心1分钟,倒掉收集管中的废液,将吸附柱放回收集管中。
注意:如果纯化的DNA用于盐敏感的实验(例如平末端连接或直接测序),建议加入Buffer PW静置2-5分钟再离心。
8、重复步骤7。
9、13000rpm离心1分钟,倒掉收集管中废液。将吸附柱置于室温数分钟,以彻底晾干。
注意:这一步目的是将吸附柱中残余乙醇去除,乙醇的残留会影响后续酶促反应(酶切、PCR等)。
10、将吸附柱放到一个新的1.5ml离心管(自备)中,向吸附膜中间位置悬空滴加10-50μlBuffer EB,室温放置2分钟。13000rpm离心1分钟收集DNA溶液。-20℃保存DNA。
注意:
1)为了提高DNA的回收量,可将离心得到的溶液重新滴加到吸附柱中,室温放置2分钟,13000rpm离心1分钟。
2)回收大于10 kb的DNA片段时,Buffer EB应在50℃水浴中预热,可增加回收效率。
储存条件:室温(15~30℃)。
我公司的北京微量凝胶DNA回收试剂盒厂家,性价比高,货期短,送货上门,欢迎您来电咨询购买,另外,我公司还生产供应销*(代"售")下列产品:
·Tris-甘*酸转膜缓冲液(pH8.3,10×)
编号:WE0311
英文名称:Tris-Glycine Transfer Buffer(pH8.3, 10×)
规格:500ml
·一步法逆转录实时荧光定量PCR试剂盒(低含量ROX校正染料)
编号:WE0149
英文名称:BaldStar TaqMan One Step RT-qPCR Kit(Low ROX)
规格:100次
本试剂盒是采用探针法(TaqMan,Molecular Beacon等)进行一步法Real-Time RT-qPCR的专用试剂盒。使用本产品进行Real Time RT-qPCR反应时,逆转录和定量PCR在同一反应体系中进行,反应过程中无需添加试剂,无需打开管盖,避免了污染的同时提高了实验效率。本产品的检测灵敏度高,荧光信号强,信噪比高,非常适合于RNA病毒等微量RNA的检测。其所包含的特殊缓冲系统能使逆转录酶与DNA聚合酶同时发挥最大功效,提高反应效率。使用本产品可以得到更宽广的线性范围,对目的基因定量更准确,重复性好,可信度高。
ROX染料用于校正定量PCR仪孔与孔之间产生的荧光信号误差,一般用于ABI、Stratagene等公司的Real Time PCR 扩增仪。不同仪器的激发光学系统有所不同,因此ROX染料的浓度必须与相应的荧光定量PCR仪相匹配。
不需要ROX校正的仪器:(WE0148)
Roche LightCycler 480,Roche LightCyler 96,Bio-rad iCyler iQ,iQ5,CFX96等。
需要Low ROX校正的仪器:(WE0149)
ABI Prism7500/7500 Fast,QuantStudio® 3 System,QuantStudio® 5 System,QuantStudio® 6 Flex System,QuantStudio® 7 Flex System,ViiA 7 system,Stratagene Mx3000/Mx3005P,Corbett Rotor Gene 3000等。
需要High ROX校正的仪器:(WE0150)
ABI Prism7000/7300/7700/7900,Eppendorf,ABI Step One/Step One Plus等。
试剂盒组成:
| 组份 | WE0148-100次 | WE0149-100次 | WE0150-100次 |
| 2×BaldStar TaqMan One Step Buffer | 1.4ml | 1.4ml | 1.4ml |
| BaldStar TaqMan One Step EnzymeMix | 100μl | 100μl | 100μl |
| 50×Low ROX | - | 50μl | - |
| 50×High ROX | - | - | 50μl |
| RNase-Free Water | 1.5ml | 1.5ml | 1.5ml |
注意事项:
1、本试剂盒中试剂使用前请上下颠倒轻轻混匀,尽量避免起泡,并经短暂离心后使用。
2、本产品以RNA为模板进行一步法RT-PCR实验,在操作过程中应避免RNase污染,建议在专门的区域进行RNA操作,使用专门的仪器和耗材,操作人员带口罩和一次性手套并经常更换手套,实验相关耗材应用0.1%DEPC(焦碳酸二乙酯)水溶液在37℃处理12小时,并高压灭菌30分钟后使用。
3、本试剂盒中的各试剂应尽量避免反复冻融,反复冻融可能使产品性能下降。
4、本试剂盒必须使用特异性引物,引物的选择可根据具体实验来选择,引物设计的好坏直接影响到RT-qPCR反应的结果,设计引物时需考虑GC含量,引物长度,引物位置,PCR产物的二级结构等因素,建议采用专业的引物设计软件进行设计。
5、本试剂盒推荐使用特异性探针,建议采用专业的设计软件进行设计。
使用方法:
以下举例为常规的反应体系和反应条件,实际操作中应根据模板、引物结构和目的片段大小的不同进行相应的改进和优化。(反应液的配置请在冰上进行)
1、将RNA模板、引物、2×BaldStar TaqMan One Step Buffer、BaldStar TaqMan One Step EnzymeMix和RNase-Free Water溶解并置于冰上备用。
2、PCR反应体系:
| 试剂 | 25μl反应体系 | 终浓度 |
| 2×BaldStar TaqMan One Step Buffer | 12.5μl | 1× |
| Forward Primer,10μM | 0.5μl | 0.2μM |
| Reverse Primer,10μM | 0.5μl | 0.2μM |
| Probe,10μM | 0.5μl | 0.2μM |
| BaldStar TaqMan One Step EnzymeMix | 1.0μl | |
| RNA Template | Xμl | 10 pg~100ng |
| 50×Low ROX or High ROX(可选) | 0.5μl | 1× |
| RNase-Free Water | up to 25μl |
注意:
1)通常引物浓度以0.2μM可以得到较好结果,可以在0.1-1.0μM作为设定范围的参考。
2)使用的探针浓度,与使用的荧光定量PCR仪、探针种类、荧光标记物质种类有关,实际使用时请参照仪器说明书,或各荧光探针的具体使用要求进行浓度的调节。
3)通常RNA模板的量以10 pg – 100ng为参照,因不同物种的模板中含有的目的基因拷贝数不同,可对模板进行梯度稀释,以确定最佳的模板使用量。
4)不同仪器的激发光学系统有所不同,根据使用荧光定量的仪器选择加入50×Low ROX or 50×High ROX。
3、混匀,短暂离心,将溶液收集到管底。
4、RT-PCR反应条件:
| 步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
| 逆转录 | 45℃ | 10 min | |
| PCR预变性 | 95℃ | 10 min | |
| 变性 | 95℃ | 15 s | 30-40个循环 |
| 退火/延伸 | 60℃ | 45 s |
注意:
1)1)本产品所采用的热启动酶须在预变性95℃、5-10 min条件下实现酶的活化。
2)建议采用两步法PCR反应程序,若因使用Tm值较低的引物等原因,得不到良好的实验结果时,可尝试进行三步法PCR扩增,退火温度请以 56℃-64℃的范围作为设定参考。
储存条件:-20℃,避免反复冻融
北京微量凝胶DNA回收试剂盒厂家关键词:WE0169,Gel DNA Extraction Micro Kit,微量凝胶DNA回收试剂盒
·溶菌酶
编号:WE0214
英文名称:Lysozyme
规格:100mg
·FITC标记山羊抗兔IgG(H+L)
编号:WE0384
英文名称:Goat Anti-Rabbit IgG, FITC Conjugated
规格:100μl
本产品为FITC标记的经亲和纯化的山羊抗体,特异识别兔IgG,检测灵敏度高,本底低,对其他种属IgG无明显交叉反应,常用于免疫荧光和流式细胞等标记检测。
免疫原:兔IgG
缓冲液:0.01M PBS,50%甘油,pH7.6
稳定剂:15 mg/ml BSA(不含IgG和蛋白酶)
防腐剂:0.05%叠氮*
荧光团:FITC,Amax=492; Emax=520
应用范围:Immunofluorescence(1:25-100)
·高效无内毒素质粒大量提取试剂盒
编号:WE0167
英文名称:NoEndo Plasmid Maxi Kit
规格:2次|10次
本试剂盒提供一种简单快捷高效提取无内毒素质粒的新方法,在碱裂解法裂解细胞的基础上,采用独特的硅基质膜吸附技术,高效专一结合质粒DNA;同时采用特殊的缓冲液系统和除内毒素过滤器,有效去除内毒素、基因组DNA、RNA、蛋白等杂质。本试剂盒所得质粒纯度高、提取量大,特别适用于细胞转染,同时也可用于DNA测序,PCR,体外转录,内切酶消化等实验。
为什么使用本试剂盒?:内毒素是质粒提取中常见的污染物,由于真核细胞对内毒素非常敏感,因此,如果质粒中含有内毒素会大大降低真核细胞转染效率。
试剂盒组成:
| 组份 | 2次 | 10次 |
| Buffer P1 | 30ml | 125ml |
| Buffer P2 | 30ml | 125ml |
| Buffer E3 | 30ml | 125ml |
| Buffer PS | 15ml | 30ml |
| Buffer PW(浓缩液) | 10ml | 50ml |
| Endo-Free Buffer EB | 10ml | 30ml |
| RNase A(10 mg/ml) | 600μl | 2ml |
| 推柄 | 2个 | 10个 |
| 内毒素过滤器FQ | 2个 | 10个 |
| 吸附柱DQ及收集管 | 2套 | 10套 |
| 离心管(50ml) | 2个 | 10个 |
自备试剂:无水乙醇、异丙醇。
实验前准备及重要注意事项/strong>:
1、所有组分可在干燥、室温(15~30℃)环境稳定保存1年,将吸附柱置于2~8℃可保存更长时间,加入RNase A的Buffer P1 置于2~8℃可稳定保存6个月。
2、Buffer P1 在使用前先加入RNase A(将试剂盒中提供的RNase A 全部加入),混匀,置于2–8℃保存。使用前需在室温中放置一段时间,恢复至室温后使用。
3、第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明在Buffer PW中加入无水乙醇。
4、使用前请先检查Buffer P2 和Buffer E3是否出现结晶或沉淀,如有结晶或沉淀现象,可在37℃水浴几分钟,即可恢复澄清。
5、注意Buffer P2和Buffer E3含有刺激性物质,请戴手套操作,使用后应立即盖紧盖子。
6、使用Buffer PS处理过的吸附柱最好立即使用,避免放置时间过长影响使用效果。
7、提取质粒的量和纯度与细菌培养浓度、菌株种类、质粒大小、质粒拷贝数等因素有关。
操作步骤:
1、取150ml过夜培养的菌液,加入离心管(自备)中,12000×g离心2-3分钟收集细菌,尽量吸弃全部上清。
2、向留有菌体沉淀的离心管中加入12ml Buffer P1(请先检查是否已加入RNase A),使用移液器或涡旋振荡器充分混匀,悬浮细菌沉淀。
注意:如果菌块未彻底混匀,将会影响裂解效果,使提取量和纯度偏低。
3、向离心管中加入12ml Buffer P2,温和地上下颠倒混匀8-10次,使菌体充分裂解,室温放置3-5分钟。此时溶液应变得清亮粘稠。
注意:温和混匀,不要剧烈震荡,以免打断基因组DNA,造成提取的质粒中混有基因组DNA片段。如果溶液未变得清亮,提示可能菌量过大,裂解不彻底,应减少菌体量。
4、向离心管中加入12ml Buffer E3,立即上下颠倒混匀8-10次,此时出现白色絮状沉淀,室温放置5分钟。12000×g离心10分钟,将上清全部倒入除内毒素过滤器中,慢慢推动推柄(Plungers)过滤,滤液收集在干净的50ml离心管(自备)中。
注意:Buffer E3 加入后应立即混匀,避免产生局部沉淀。
5、向滤液中加入0.3倍滤液体积的异丙醇,上下颠倒混匀。
注意:加入异丙醇过多容易导致RNA污染。
6、柱平衡:向已装入收集管中的吸附柱中加入2ml Buffer PS,12000×g离心2分钟,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。
7、将步骤5中滤液与异丙醇的混合溶液转移到平衡好的吸附柱(已装入收集管)中。
8、6000-12000×g离心2分钟,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。
注意:吸附柱的最大容积为15ml,所以第7步中所得溶液分多次过柱。如果离心机转子倾角较大时,建议加入吸附柱的溶液体积不超过10ml,以防发生漏液现象。
9、向吸附柱中加入10ml Buffer PW(请先检查是否已加入无水乙醇),6000-12000×g离心2分钟,倒掉收集管中的废液。
10、重复步骤9。
11、将吸附柱重新放回收集管中,12000×g离心5分钟,倒掉废液,将吸附柱置于室温数分钟,以彻底晾干吸附柱中残余的漂洗液。
注意:这一步的目的是将吸附柱中残余的乙醇去除,乙醇的残留会影响后续的酶促反应(酶切、PCR等)。
12、将吸附柱置于一个新的离心管中,向吸附膜的中间部位加入1-3ml Endo-Free BufferEB,室温放置2-5分钟,12000×g离心5分钟,将质粒溶液收集到离心管中。-20℃保存质粒。
注意:
1)为了增加质粒的回收效率,可将得到的溶液重新加入到吸附柱中,室温放置2-5分钟,12000×g离心5分钟,将质粒溶液收集到离心管中。
2)质粒拷贝数较低或>10 kb时,Endo-Free Buffer EB在65-70℃水浴预热,可以增加提取效率。
储存条件:室温(15~30℃)
北京微量凝胶DNA回收试剂盒厂家关键词:WE0169,Gel DNA Extraction Micro Kit,微量凝胶DNA回收试剂盒
·植物基因组DNA提取试剂盒
编号:WE0173
英文名称:Plant Genomic DNA Extraction Kit
规格:50次|200次
本试剂盒适用于从植物组织和植物干粉中提取总DNA,包括基因组DNA,线粒体DNA以及叶绿体DNA。本品可以处理多至100 mg的样本,可纯化获得最大为50 kb的DNA,多数片段在20-30 kb之间。本试剂盒采用先进的硅胶膜技术和简单的离心程序,无需乙醇沉淀,简单快速地分离得到高纯度的DNA,有效去除PCR和其他酶促反应的抑制剂。本品可以在1小时内完成总DNA的提取, 纯化得到的DNA可以直接用于酶切、 PCR、 Real-Time PCR、 文库构建、 Southern Blot、分子标记等下游实验。
试剂盒组成:
| 组份 | 50次 | 200次 |
| Buffer GP1 | 40ml | 160ml |
| Buffer GP2 | 40ml | 160ml |
| Buffer GW1(浓缩液) | 13ml | 52ml |
| Buffer GW2(浓缩液) | 15ml | 50ml |
| Buffer GE | 15ml | 60ml |
| 吸附柱DM及收集管 | 50套 | 200套 |
自备试剂:β-巯基乙醇、*仿、无水乙醇。
注意事项:
1、样品应避免反复冻融,否则会导致提取的DNA片段较小且提取量下降。
2、Buffer GP1在使用前请加入β-巯基乙醇,1ml Buffer GP1加1μl β-巯基乙醇。加入β-巯基乙醇的Buffer GP1室温可保存1个月。
3、第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明在Buffer GW1和Buffer GW2中加入无水乙醇。
4、使用前请检查Buffer GP1和Buffer GP2是否出现结晶或者沉淀,如有结晶或者沉淀,请将Buffer GP1和Buffer GP2于65℃水浴重新溶解。
5、如果下游实验对RNA污染比较敏感,可以在加入Buffer GP1孵育后,加入4μl DNase-Free的RNase A(100 mg/ml),RNase A本试剂盒并未提供,如需要可单独向本公司订购,货号:WE0225S。
操作步骤:
1、取植物新鲜组织约100 mg或干重组织约20 mg,加入液氮充分研磨。
2、将研磨后的粉末收集到离心管(自备)中,加入700μl 65℃预热的Buffer GP1(使用前在预热的Buffer GP1中加入β-巯基乙醇,使其终浓度为0.1%),迅速颠倒混匀后,将离心管置于65℃水浴20分钟,水浴过程中颠倒离心管混匀样品数次。
注意:如需去除RNA,可在上述步骤完成后,加入4μl浓度为100 mg/ml 的RNase A溶液(货号:WE0225S),震荡混匀,室温放置5-10分钟。
3、加入700μl *仿,充分混匀,12000rpm(~~13400×g)离心5分钟。
4、小心将上层水相转入一新的离心管(自备)中,加入700μl Buffer GP2,充分混匀。
5、将步骤4中所得溶液全部加入到已装入收集管的吸附柱DM中。若一次不能加完溶液,可分多次转入。12000rpm离心1分钟,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。
6、向吸附柱中加入500μl Buffer GW1(使用前检查是否已加入无水乙醇),12000rpm离心1分钟,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。
7、向吸附柱中加入500μl Buffer GW2(使用前检查是否已加入无水乙醇),12000rpm离心1分钟,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。
注意:如需进一步提高DNA纯度,可重复步骤7.
8、12000rpm离心2分钟,倒掉收集管中的废液。将吸附柱置于室温数分钟,以彻底晾干。
注意:这一步的目的是将吸附柱中残余的乙醇去除,乙醇的残留会影响后续的酶促反应(酶切、PCR 等)。
9、将吸附柱置于一个新的离心管(自备)中,向吸附柱的中间部位悬空加入50-100μlBuffer GE或灭菌水,室温放置2-5分钟,12000rpm离心1分钟,收集DNA溶液,-20℃保存DNA。
注意:
1)如果下游实验对pH值或EDTA敏感,可以用灭菌水洗脱。洗脱液的pH值对洗脱效率有很大影响,若用水做洗脱液应保证其pH值在7.0-8.5(可以用NaOH将水的pH值调到此范围),pH值低于7.0时洗脱效率不高。
2)离心之前室温孵育5分钟可以增加产量。
3)用另外的50-100μl Buffer GE或灭菌水再次洗脱可以增加产量。
4)如果要提高DNA的终浓度,可以将步骤9所得的DNA洗脱液重新加至吸附膜上,重复步骤9;若洗脱体积小于100μl,可以增加DNA的终浓度,但可能会减少总产量。如果DNA的量小于1μg,推荐用50μl Buffer GE或灭菌水洗脱。
5)因为保存在水中的DNA会受到酸性水解作用的影响,如需长期保存,推荐用Buffer GE洗脱并于-20℃保存。
储存条件:室温(15~30℃)。
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风险提示:丁香通仅作为第三方平台,为商家信息发布提供平台空间。用户咨询产品时请注意保护个人信息及财产安全,合理判断,谨慎选购商品,商家和用户对交易行为负责。对于医疗器械类产品,请先查证核实企业经营资质和医疗器械产品注册证情况。
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北京东西分析仪器有限公司医疗事业部 陈军 准确检测微量元素在人体中的含量是医学理论研究与临床应用的前提和基础,如果没有准确地检测,根本谈不上研究与应用。虽然从 20 世纪 70 年代就开始了微量元素研究,但它毕竟是一个新兴学科,检测微量元素的手段还比较陈旧和落后,无论从采样到测试前处理到测试直到结果分析都需专业人士来操作,步骤相当复杂,污染严重,且出结果时间长。这也正是医院在人体微量元素检测方面无法普及的重要原因之一。随着医疗水平的不断提高,微量元素与人体健 康的关系得到
的核酸凝胶染色试剂,能够在多数应用中提供可以接受的灵敏度,但它是一种高诱变性的化学物质。而且EB染色后具有较高的背景荧光信号。 SYBR Green I 和 SYBR Gold 也被厂家宣传为最灵敏的凝胶染色试剂。但 SYBR Green I 尤其是 SYBR Gold 在常用的微碱性电泳缓冲溶液或预制凝胶中会快速降解,稳定性差导致染色效果极不可靠。SYBR safe 被认为是市场上较为安全的核酸染料,但它的染色效果还远不及 SYBR Green I 。 Goldview从相似性对比试验结果来看
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