T4 DNA连接酶哪里买

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北京百奥莱博科技有限公司专业生产供应T4 DNA连接酶哪里买，产品信息：

类别：工具酶

英文名：T4 DNA Ligase

产品名	产品编号	包装规格
T4 DNA连接酶	WE0239	100U|500U

产地：国产|进口

英文名：T4 DNA Ligase

规格：100U|500U

编号：WE0239

  T4 DNA Ligase 是从表达T4 DNA Ligase 基因的大肠杆菌经诱导表达后分离纯化而来的，催化相邻DNA链的5’磷酸基团和3’羟基基团以磷酸二酯键结合反应。该酶可催化平末端或粘性末端DNA之间的连接，还可修复双链DNA、RNA、DNA/RNA杂交双链中的单链切口。本品可应用于DNA插入片段和载体DNA的粘性末端和平末端的连接，以及线性DNA的自身环化。

 

产品组成：

 

组份	100U	500U
T4 DNA Ligase，5 U/μl	20μl	100μl
10×Ligation Buffer	150μl	750μl
50%PEG Solution	150μl	750μl

 

实验前准备及重要注意事项

1、T4 DNA Ligase的最终用量不要超过推荐的用量，否则影响连接效率。

2、PEG可以极大提高平末端的连接效率，我们推荐加入终浓度为5% PEG Solution以提高平末端的连接效率。

3、为了提高转化效率，建议所加入连接产物的量不要超过感受态细胞体积的10%。

4、由于T4 DNA Ligase中含有甘油，比较粘稠容易挂壁，建议使用之前短暂离心将液体收集到管底，取样时枪头尽量不要深入液面太深以免粘在枪头上造成损失。

 

使用方法：

 

一、粘性末端的连接：

 

1、按以下体系配制反应液：

 

组份	20μl体系	终浓度
线性载体DNA	Xμl	20-100ng
插入DNA片段	Yμl	插入片段：载体1:1-5:1
10×Ligation Buffer	2μl
T4 DNA Ligase，5 U/μl	0.2μl	1 U
ddH2O	补充至20μl

 

2、涡旋震荡，瞬间离心，将管壁上的溶液收集到管底。

3、反应条件：22℃孵育10分钟。

4、瞬间离心，将管壁上的溶液收集到管底，65℃孵育10分钟或70℃孵育5分钟以灭活T4 DNA Ligase。

5、可取5μl连接产物热击转化50μl感受态细胞或取1-2μl连接产物电击转化50μl感受态细胞。

注意：如需电击转化，推荐用乙醇沉淀法去除T4 DNA Ligase后进行电击转化。

 

二、平末端的连接：

 

1．反应体系：

 

组分	20μl体系	终浓度
线性载体DNA	Xμl	20-100ng
插入DNA片段	Yμl	插入片段：载体1:1-5:1
10×Ligation Buffer	2μl
T4 DNA Ligase，5 U/μl	1μl	5 U
50%PEG Solution	2μl	5%
ddH2O	补充至20μl	20μl

 

2、涡旋震荡，瞬间离心，将管壁上的溶液收集到管底。

3、反应条件：22℃孵育1小时。

4、瞬间离心，将管壁上的溶液收集到管底，65℃孵育10分钟或70℃孵育5分钟以灭活T4 DNA Ligase。

5、可取5μl连接产物热击转化50μl感受态细胞或取1-2μl连接产物电击转化50μl感受态细胞。

注意：如需电击转化，推荐用乙醇沉淀法去除T4 DNA Ligase后进行电击转化。

 

三、线性DNA的自身环化：

 

1、反应体系：

 

组分	50μl体系	终浓度
线性载体DNA	Xμl	5-50ng
10×Ligation Buffer	5μl
T4 DNA Ligase，5 U/μl	1μl	5 U
ddH2O	补充至50μl	50μl

2、涡旋震荡，瞬间离心，将管壁上的溶液收集到管底。

3、反应条件：粘性末端22℃孵育10分钟；平末端22℃孵育1小时。

4、瞬间离心，将管壁上的溶液收集到管底，65℃孵育10分钟或70℃孵育5分钟以灭活T4 DNA Ligase。

5、可取5μl连接产物热击转化50μl感受态细胞或取1-2μl连接产物电击转化50μl感受态细胞。

注意：如需电击转化，推荐用乙醇沉淀法去除T4 DNA Ligase后进行电击转化。

 

储存条件：-20℃。

T4 DNA连接酶哪里买专业优质供应商：北京百奥莱博科技有限公司

关键词：T4 DNA连接酶,WE0239,T4 DNA Ligase

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编号	类别	名称
WE0172	DNA纯化	新型固定组织基因组DNA提取试剂盒
WE0218	其他分子生物学试剂	红细胞裂解液
WE0362	FITC标记抗体	FITC标记山羊抗人IgG(H+L)
WE0346	一抗	抗GFP标签单克隆抗体
WE0376	HRP标记抗体	HRP标记山羊抗人IgM(Fc5μ)
WE0274	蛋白质研究	蛋白标准溶液BSA
WE0349	一抗	抗HA标签单克隆抗体
WE0340	一抗	抗VSV-G标签单克隆抗体
WE0351	一抗	抗His标签多克隆抗体
WE0199	RNA纯化	细菌RNA提取试剂盒(含DNase I)
WE0247	克隆与表达	TA快速连接试剂盒(pUC-T Simple)(含载体，连接酶)
WE0318	蛋白质研究	柠檬酸缓冲液(IHC抗原修复液，100×)
WE0321	蛋白质研究	一抗稀释液(WB IHC)
WE0223	其他分子生物学试剂	RNA酶抑制剂
WE0272	蛋白质研究	Ni琼脂糖凝胶
WE0120	核酸扩增(PCR)	血液直接PCR扩增试剂盒
WE0347	一抗	抗GFP标签多克隆抗体
WE0168	核酸电泳和回收	琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒
WE0341	一抗	HRP标记抗His标签多克隆抗体
WE0131	核酸扩增(PCR)	高效cDNA第一链合成试剂盒
WE0308	蛋白质研究	高灵敏度ECL化学发光检测试剂盒
WE0251	克隆与表达	TOP10感受态细胞
WE0148	核酸扩增(PCR)	一步法逆转录实时荧光定量PCR试剂盒
WE0175	DNA纯化	柱式小量血液基因组DNA提取试剂盒(0.1～20ml)
WE0259	蛋白质研究	蛋白酶抑制剂混合物
WE0113	核酸扩增(PCR)	BaHF高保真DNA聚合酶

 

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