- ￥172 - 772
- 近岸蛋白(Novoprotein)
- M001
- 上海
- 2025年09月23日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
大量
- 供应商：
近岸
- 规格：
28000U/28000U*5
| 规格： | 28000U | 产品价格： | ￥172.0 |
|---|---|---|---|
| 规格： | 28000U*5 | 产品价格： | ￥772.0 |
1）DNA片段和载体DNA的连接；
2）DNA片段和Linker或Adaptor DNA的连接
产品特点
| 产品组成 | 体积 |
|---|---|
| T4 DNA Ligase (350U/μl) | 80μl |
| 10×T4 DNA Ligation Buffer | 1ml |
| 2×Quick Ligation Buffer | 1ml |
- 粘性末端的连接反应：插入片段和载体的摩尔浓度比特别重要，此比例在2～6:1之间最好，低了会导致较低的连接效率，高了则会导致多个片段插入。摩尔比请按载体与插入片段DNA浓度及分子大小来计算。
- 平末端的连接反应：平末端的连接反应与粘性末端相比反应较慢(其Km值约为粘性末端的100倍)。进行平末端的连接反应时，可提高DNA浓度，将使用酶量增加到粘性末端量的2～5倍左右。
- 向粘粒或噬菌体进行连接反应：可使载体和插入DNA的摩尔比调整为1:1，同时增大DNA浓度以便取得良好效果(0.05～0.1 μg/μl以上)。
- 反应温度：该酶的最适温度为37℃，由于热稳定性较差，因此长时间反应时通常需在16℃下进行。若反应1～2小时左右的话也可在室温下进行反应。
- 抑制剂：T4 DNA连接酶要求Mg2+，因此螯合Mg2+的EDTA的存在会阻碍反应。将溶解于含有高浓度EDTA缓冲液中的DNA准备作为样品使用时，最好先用灭菌蒸馏水或TE缓冲液进行置换。
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【交流】关于NEB的T4 DNA连接酶和快速连接试剂盒的常见问题及解答
因为看到园子中使用NEB T4 DNA连接酶的老师和同学比较多，也经常就一些连接的问题进行讨论和沟通。今天发一个关于NEB T4 DNA连接酶的一个专题，就使用过程中一些常见问题跟大家讨论一下。也希望各位老师同学能够踊跃参与，如果大家有什么疑问或者好的建议欢迎。 一、关于NEB M0202 T4 DNA 连接酶的使用方法和常见问题及解答 1、产品特性和使用方法 产品说明：该酶催化契合的双链DNA或RNA的5'-磷酸末端和3'-羟基末端形成磷酸二酯键。该酶不仅能够催化平滑
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