北京现货金黄色葡萄球菌肠毒素B荧光PCR检测试剂盒(定性/定

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北京百奥莱博致力于最快速、最有效的检测产品，包括北京现货金黄色葡萄球菌肠毒素B荧光PCR检测试剂盒(定性/定量)怎么卖在内的细菌PCR检测试剂盒产品是我公司倾力打造的优势产品，欢迎选购。

北京百奥莱博科技有限公司专业生产供应北京现货金黄色葡萄球菌肠毒素B荧光PCR检测试剂盒(定性/定量)怎么卖，产品信息：

类别：细菌PCR检测试剂盒

产品名	产品编号	等级含量	包装规格
金黄色葡萄球菌肠毒素B荧光PCR检测试剂盒(定性/定量)	SYA041	科研试剂	48次/盒

品牌：百奥莱博

规格：48次/盒

编号：SYA041

等级：科研试剂

一、简介：

本试剂盒用一对金黄色葡萄球菌肠毒素B特异性引物，对金黄色葡萄球菌肠毒素B DNA进行体外扩增检测，用于临床上对可疑感染者的病原学诊断。

 

二、用途：

该试剂盒适合于检测水样粪便、疑似污染物的水、食物等样本中的金黄色葡萄球菌肠毒素B(SEB)，用于金黄色葡萄球菌肠毒素B(SEB)的辅助诊断，其检测结果仅供临床参考。

 

三、试剂盒组成：(48T)

组份 数量 规格

金黄色葡萄球菌PCR反应液(SEB-PCR MIX) 1管 672μL/管

DNA抽提液(DNA Extraction) 2管 1.5mL/管

酶混合物(Enzymes MIX) 1管 48μL/管

阴性对照(NTC) 1管 50μL/管

肠毒素B阳性对照(SEB-PTC 107copies/μL) 1管 50μL/管

肠毒素B阳性对照(SEB-PTC 106copies/μL) 1管 50μL/管

肠毒素B阳性对照(SEB-PTC 105copies/μL) 1管 50μL/管

肠毒素B阳性对照(SEB-PTC 104copies/μL) 1管 50μL/管

肠毒素B阳性对照(SEB-PTC 103copies/μL) 1管 50μL/管

 

四、储存条件及有效期：

本试剂盒于-20℃以下保存，有效期为6个月。

 

五、PCR仪器适用范围

ABI系列，Roche系列等PCR检测仪等。

 

六、样品的采集与DNA提取

6.1 样品的采集

6.1.1 食品样品：样品的采集与预培养按照样品的采集与预培养按照《食品安全国家标准食品微生物学检验金黄色葡萄球菌检验》(GB 4789.10-2010)要求进行。

6.1.2 粪便样品：取粪便置于灭菌的收集管中送检。

6.1.3 病灶部位样品：取发病部位新鲜渗出物、粘液脓血送检。

 注：上述样品建议经过增菌后，收集培养物用于检测。

6.2 DNA提取

可采用PCR试剂盒配备的DNA抽提液，按以下说明进行DNA核酸的粗提。也可采购北京百奥莱博科技有限公司生产的DNA提取试剂盒(过柱法-荧光配套)或其他合适的商业化产品，并按照相应试剂盒说明进行操作。

6.2.1液体培养物：取液体培养物100μL加到1.5mL无菌离心管中，8000rpm离心3min，尽量吸弃上清，加入50μL DNA抽提液充分混匀，100℃恒温10min，13000rpm离心3min，取上清5μL进行PCR反应。

6.2.2固体培养物：挑取单克隆菌落与50μL DNA抽提液充分混匀，100℃恒温10min，13000rpm离心3min，取上清5μL进行PCR反应。

6.2.3 粪便样品：挑取米粒大小粪便于灭菌离心管中，加入0.5mL生理盐水，振荡混匀，13000rpm离心3分钟，弃上清，沉淀中加入50μL DNA抽提液充分混匀，100℃恒温10min，13000rpm离心3min取上清5μL进行PCR反应。

6.2.4 其他液体标本：取标本2-3mL，13000rpm离心3min，弃上清，沉淀中加入50μL DNA抽提液充分混匀，100℃恒温10min，13000rpm离心3min取上清5μL进行PCR反应。

 注：建议采用相关标准方法进行前增菌，并按照6.2.1方法进行提取。阳性对照和阴性对照为已经抽提好的核酸(无需提取)，直接取5µL加入到反应体系中即可。由于阳性对照浓度较高，建议最后在样品制备区域加入阳性对照。

 

七、检测步骤：

7.1 试剂的准备

从试剂盒中取出荧光qPCR反应液(SEB-qPCR MIX)、酶混合液(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。

设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：

试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量

荧光PCR反应液 14µL N×14µL

酶混合液 1µL N×1µL

总量 15µL N×15µL

向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液，向每管中加入处理后样品/阴性对照(NTC)/阳性对照(SEB-PTC103、104、105、106、107copies/μL)5μL(建议由低浓度向高浓度顺序加入反应液，避免高浓度阳性对照品污染反应液)，10000rpm瞬时离心10秒。

7.2 qPCR反应条件

将各反应管放入实时荧光PCR仪器的反应槽内。

推荐循环条件:

1循环 50℃ for 2 min

预变性 1循环 95℃ for 10 min

PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec

60℃ for 60 sec

在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM，淬灭基团：NONE，请勿选择ROX参比荧光。

 

八、结果分析：

8.1 结果分析条件设定

直接读取检测结果。基线和阈值设定原则根据仪器噪声情况进行调整，以阈值线刚好超过正常阴性样品扩增曲线的最高点为准。

8.2 试验成立判定

（1） 阴性对照(NTC)：不应产生任何的扩增曲线。

（2） 阳性对照(SEB-PTC)：均产生扩增曲线。

（3） 以上条件应同时满足，否则，此次试验视为无效。

8.3 结果判定

（1） 在试验成立的条件下，Ct值≤35的样本为阳性，表明SEB核酸阳性。

（2） Ct值显示为无的样本为阴性样本，表明SEB核酸阴性。

（3） 如果35＜Ct值≤40，判为可疑样品。对于可疑样品，先看扩增曲线。如果扩增曲线为对数扩增曲线，则为可疑阳性，否则判为阴性。

（4） 对于可疑阳性样品，重新抽提核酸，再次进行SEB qPCR检测。如果重复扩增曲线为对数扩增曲线，判为样本阳性，表明SEB核酸阳性；否则判为样本阴性。

（5） 标准曲线相关系数数值介于0.97~1之间。(相关系数数值等同于r2值)，根据斜率及Y轴截距列出计算公式，并通过标准曲线计算样品RNA含量拷贝数。

例如：Y轴截距=41.5 斜率=-3.83

公式为：Y=-3.83(logX)+41.5

 

九、注意事项：

（1） 初次使用前请仔细阅读说明书。并严格按照说明书步骤操作。

（2） 所有使用的离心管最好高压灭菌，而且必须不含RNA酶。

（3） PCR操作应严格按照要求分区(试剂配制区、标本处理区、PCR扩增区等)，防止实验室污染。

（4） 样本提取、试剂配置、加样需在不同区的超净工作台进行，以免污染。

（5） 试剂盒里所有物品应视为污染物对待，并按照卫生部《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。

 

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使用离心机应注意什么？

首先应该根据自己的实验需求选择合适的离心机和转子以及离心管，使用离心机时的工作转速不应该超过离心机、转子以及离心管的最大允许转速。离心前注意严格 平衡样品。安装转子和转子盖要规范、准确。离心时要留人看守，发现离心机异常应立即关闭离心机。离心结束后要安放好转子。

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编号	类别	名称
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