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- 2025年07月14日
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负80度
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3年
- 英文名：
pCas(Plasmid#62225)
- 库存：
100
- 供应商：
上海柯雷生物
- 规格：
20ul
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文献和实验CRISPR/Cas 是进行基因编辑的强大工具，可以对基因进行定点的精确编辑。在向导 RNA（guide RNA， gRNA）和 Cas9 蛋白的参与下，待编辑的细胞基因组 DNA 将被看作病毒或外源 DNA，被精确剪切。一、寻找目的基因的靶标使用在线设计网站 CRISPR direct，如需直接复制网址，可在生物学霸后台对话框回复 direct即可。靶点挑选要点：基因敲除靶点应设计在起始密码子附近（包括起始密码子）或者起始密码子下游的外显子范围内。不同 Cas9/gRNA 靶点在基因敲除效率
实验原理 TP53 是重要的抑癌基因。在多种肿瘤中都能发现 TP53 基因突变及功能丧失。我们将针对 TP53 基因设计的靶点构建到 pCas9/gRNA1 载体，转染 293T 细胞，构建了 TP53 基因敲除 293T 细胞系。 1、本实验基因敲除原理：pCas9/gRNA1 载体表达 gRNA 和 Cas9 蛋白。将靶点序列克隆到 pCas9/gRNA1 载体上，gRNA 将诱导 Cas9 蛋白对靶点 DNA 进行切割，造成 DNA 断裂。细胞通过邻端连接
的表达质粒。A）PCR 扩增的方法U6：来源于人 U6 小核启动子，常用小 RNA 表达，转录本为 shRNA。将 sgRNA 放到 U6 后面，利用 U6 的启动来扩增 sgRNA。将这部分内容整合到 Cas9 expression plasmid pSpCas9（Cas9 表达质粒）中，一起共转。B）sgRNA 表达质粒的方法现在我要用这个方法来举例设计 p53 引物找到包括 sgRNA 序列的前后 1000 个碱基的序列（2000 bp）找到的序列如下：将上面复制的序列粘贴到 blast 中
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