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3年
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pCANTAB-5E(非空载)
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100
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上海柯雷生物
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20ul
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文献和实验结构域(非功能区)可供外源序列插入或替换。目前,用PV系统已成功展示了有活性的大分子蛋白β-半乳糖苷酶(465 ku)和植物外源凝血素BPA(120 ku)等[13]。λ噬菌体的装配在细胞内进行,故可以展示难以分泌的肽或蛋白质。该系统展示的外源蛋白质的拷贝数为平均1个分子/噬菌体,这表明外源蛋白质或多肽可能干扰了λ噬菌体的尾部装配。 (2)D蛋白展示系统。 D蛋白的分子质量为11 ku,参与野生型λ噬菌体头部的装配。低温电镜分析表明,D蛋白以三聚体的形式突出在壳粒表面[13
体表面,而体内组装是将含D融合基因的质粒转化入λD—溶源的E.Coli菌株中从而补偿溶源茵所缺的D蛋白,通过热诱导而被组装,或利用噬菌体P1的Cre—loxP定点重组系统将外源基因整合进入噬茵体基因组中。D蛋白展示系统的特点:因为是在病毒细胞内完成组装.无需将外源肽或蛋白分泌到细菌细胞膜,可以展示对细胞有毒性的蛋白。另外,D蛋白展示系统还可以用于cDNA文库的构建,抗原位点分析及作为基甲输送工具。Mikawa等对D蛋白的基因进行了改造,使外源序列在D蛋白的N端和C端都能插入,并成功地表面展示了有活性的葡萄
噬菌体展示抗体库构建的载体 抗体库技术是将某种动物的所有抗体可变区基因克隆在质粒或噬菌体中表达,利用不同的抗原筛选出携带特异抗体基因的克隆,从而获得相应的特异性抗体 单链抗体(ScFv)是一种基因工程抗体,能够在原核宿主中表达,不论是在性能方面,还是在制备方面,均具有独特的优越性。关于基因工程抗体的特点与制备过程,见本书第一章的有关内容。这里仅介绍噬菌体展示技术在制备单链抗体中的应用,说明该技术的操作过程。 pFUW80是一个多拷贝的噬菌粒载体,用于表达单链
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