pCANTAB-5E噬菌体展示质粒(非空载)

基本信息
名称：pCANTAB-5E噬菌体展示质粒(非空载)
别称: pCANTAB-5E

质粒大小:	5216bp
质粒标签:	N-g3 signal，C-E tag
克隆菌株:	TG1
培养条件:	37度，2×YT培养基

质粒属性

载体宿主：	大肠杆菌
载体用途：	基因模板
基因种属：	空载体
基因类型：
原核抗性：	Amp
真核抗性：
荧光蛋白：

质粒简介
 pCANTAB-5E，要用2×YT培养基

质粒图谱


质粒序列
LOCUS       Exported                5216 bp ds-DNA     circular SYN 27-OCT-2017
DEFINITION  synthetic circular DNA
KEYWORDS    pCANTAB-5E
SOURCE      synthetic DNA construct
  ORGANISM  synthetic DNA construct
REFERENCE   1  (bases 1 to 5216)
  AUTHORS   .
  TITLE     Direct Submission
            http://www.miaolingbio.com
FEATURES             Location/Qualifiers
     source          1..5216
                     /organism="synthetic DNA construct"
                     /mol_type="other DNA"
     promoter        96..200
                     /gene="bla"
                     /label=AmpR promoter
     CDS             201..1061
                     /codon_start=1
                     /gene="bla"
                     /product="beta-lactamase"
                     /label=AmpR
                     /note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
                     related antibiotics"
                     /translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
                     ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
                     PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
                     EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
                     LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
                     LIKHW"
     rep_origin      1232..1820
                     /direction=RIGHT
                     /label=ori
                     /note="high-copy-number colE1/pMB1/pBR322/pUC origin of 
                     replication"
     promoter        2144..2174
                     /label=lac promoter
                     /note="promoter for the E. coli lac operon"
     protein_bind    2182..2198
                     /label=lac operator
                     /bound_moiety="lac repressor encoded by lacI"
                     /note="The lac repressor binds to the lac operator to 
                     inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be 
                     relieved by adding lactose or 
                     isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
     misc_feature    2218..2315
                     /label=g3 signal
     misc_feature    2329..3066
                     /label=Stuffer
     misc_feature    3075..3120
                     /label=E tag
     CDS             3520..4338
                     /codon_start=1
                     /label=fd gene 3
                     /translation="MFQNNRFRNRQGALTVYTGTVTQGTDPVKTYYQYTPVSSKAMYDA
                     YWNGKFRDCAFHSGFNEDPFVCEYQGQSSDLPQPPVNAGGGSGGGSGGGSEGGGSEGGG
                     SEGGGSEGGGSGGGSGSGDFDYEKMANANKGAMTENADENALQSDAKGKLDSVATDYGA
                     AIDGFIGDVSGLANGNGATGDFAGSNSQMAQVGDGDNSPLMNNFRQYLPSLPQSVECRP
                     YVFGAGKPYEFSIDCDKINLFRGVFAFLLYVATFMYVFSTFANILRNKES"
     rep_origin      complement(4560..5015)
                     /direction=LEFT
                     /label=f1 ori
                     /note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow 
                     indicates direction of (+) strand synthesis"
ORIGIN
        1 gacgaaaggg cctcgtgata cgcctatttt tataggttaa tgtcatgata ataatggttt
       61 cttagacgtc aggtggcact tttcggggaa atgtgcgcgg aacccctatt tgtttatttt
      121 tctaaataca ttcaaatatg tatccgctca tgagacaata accctgataa atgcttcaat
      181 aatattgaaa aaggaagagt atgagtattc aacatttccg tgtcgccctt attccctttt
      241 ttgcggcatt ttgccttcct gtttttgctc acccagaaac gctggtgaaa gtaaaagatg
      301 ctgaagatca gttgggtgct cgagtgggtt acatcgaact ggatctcaac agcggtaaga
      361 tccttgagag ttttcgcccc gaagaacgtt ttccaatgat gagcactttt aaagttctgc
      421 tatgtggcgc ggtattatcc cgtattgacg ccgggcaaga gcaactcggt cgccgcatac
      481 actattctca gaatgacttg gttgagtact caccagtcac agaaaagcat cttacggatg
      541 gcatgacagt aagagaatta tgcagtgctg ccataaccat gagtgataac actgcggcca
      601 acttacttct gacaacgatc ggaggaccga aggagctaac cgcttttttg cacaacatgg
      661 gggatcatgt aactcgcctt gatcgttggg aaccggagct gaatgaagcc ataccaaacg
      721 acgagcgtga caccacgatg cctgtagcaa tggcaacaac gttgcgcaaa ctattaactg
      781 gcgaactact tactctagct tcccggcaac aattaataga ctggatggag gcggataaag
      841 ttgcaggacc acttctgcgc tcggcccttc cggctggctg gtttattgct gataaatctg
      901 gagccggtga gcgtgggtct cgcggtatca ttgcagcact ggggccagat ggtaagccct
      961 cccgtatcgt agttatctac acgacgggga gtcaggcaac tatggatgaa cgaaatagac
     1021 agatcgctga gataggtgcc tcactgatta agcattggta actgtcagac caagtttact
     1081 catatatact ttagattgat ttaaaacttc atttttaatt taaaaggatc taggtgaaga
     1141 tcctttttga taatctcatg accaaaatcc cttaacgtga gttttcgttc cactgagcgt
     1201 cagaccccgt agaaaagatc aaaggatctt cttgagatcc tttttttctg cgcgtaatct
     1261 gctgcttgca aacaaaaaaa ccaccgctac cagcggtggt ttgtttgccg gatcaagagc
     1321 taccaactct ttttccgaag gtaactggct tcagcagagc gcagatacca aatactgttc
     1381 ttctagtgta gccgtagtta ggccaccact tcaagaactc tgtagcaccg cctacatacc
     1441 tcgctctgct aatcctgtta ccagtggctg ctgccagtgg cgataagtcg tgtcttaccg
     1501 ggttggactc aagacgatag ttaccggata aggcgcagcg gtcgggctga acggggggtt
     1561 cgtgcataca gcccagcttg gagcgaacga cctacaccga actgagatac ctacagcgtg
     1621 agcattgaga aagcgccacg cttcccgaag ggagaaaggc ggacaggtat ccggtaagcg
     1681 gcagggtcgg aacaggagag cgcacgaggg agcttccagg gggaaacgcc tggtatcttt
     1741 atagtcctgt cgggtttcgc cacctctgac ttgagcgtcg atttttgtga tgctcgtcag
     1801 gggggcggag cctatggaaa aacgccagca acgcggcctt tttacggttc ctggcctttt
     1861 gctggccttt tgctcacatg ttctttcctg cgttatcccc tgattctgtg gataaccgta
     1921 ttaccgcctt tgagtgagct gataccgctc gccgcagccg aacgaccgag cgcagcgagt
     1981 cagtgagcga ggaagcggaa gagcgcccaa tacgcaaacc gcctctcccc gcgcgttggc
     2041 cgattcatta atgcagctgg cacgacaggt ttcccgactg gaaagcgggc agtgagcgca
     2101 acgcaattaa tgtgagttag ctcactcatt aggcacccca ggctttacac tttatgcttc
     2161 cggctcgtat gttgtgtgga attgtgagcg gataacaatt tcacacagga aacagctatg
     2221 accatgatta cgccaagctt tggagccttt tttttggaga ttttcaacgt gaaaaaatta
     2281 ttattcgcaa ttcctttagt tgttcctttc tatgcggccc agccggccat ggcccaggtg
     2341 aagctgcagc agtcaggacc tggcctggtg gcgccctcac agagcctgtc catcacatgc
     2401 accgtctcag ggttttcatt aaccagctat ggtgtacact gggttcgcca gcctccagga
     2461 aagggtctgg agtggctggg agtaatatgg gctggtggaa gcacaaacta taattcagct
     2521 ctcaaatcca gactgaacat cagcaaggac aactccaaga gccaagtttt cttaaaaatg
     2581 aacagtctcc aaactgatga cacagccatg tactactgtg ccagaaactg gggcagctac
     2641 tggtacttcg atgtctgggg ccaaggccac ggtcaccgtc tcctcagtgg aggcggttca
     2701 ggcggaggtg gcggaggtgg ctctggcggt ggcggatcgg acattgagct cacccagtct
     2761 ccagcaatca tgtctgcatc tccaggggaa aaggtcacca tgacctgcag ggccagctca
     2821 agtataagtt ccagttactt gcactggtac cagcagaagt caggcgcttc ccccaaaccc
     2881 ttgattcata ggacatccaa cctggcttct ggagtcccag ctcgcttcag tggcagtggg
     2941 tctgggacct cttactctct cacaatcagc agcgtggagg ctgaagatga tgcaacttat
     3001 tactgccagc agtggagtgg ttacccattc acgttcggtg ctgggaccaa gctcgagatc
     3061 aaacgggcgg ccgcaggtgc gccggtgccg tatccggatc cgctggaacc gcgtgccgca
     3121 tagactgttg aaagttgttt agcaaaacct catacagaaa attcatttac taacgtctgg
     3181 aaagacgaca aaactttaga tcgttacgct aactatgagg gctgtctgtg gaatgctaca
     3241 ggcgttgtgg tttgtactgg tgacgaaact cagtgttacg gtacatgggt tcctattggg
     3301 cttgctatcc ctgaaaatga gggtggtggc tctgagggtg gcggttctga gggtggcggt
     3361 tctgagggtg gcggtactaa acctcctgag tacggtgata cacctattcc gggctatact
     3421 tatatcaacc ctctcgacgg cacttatccg cctggtactg agcaaaaccc cgctaatcct
     3481 aatccttctc ttgaggagtc tcagcctctt aatactttca tgtttcagaa taataggttc
     3541 cgaaataggc agggtgcatt aactgtttat acgggcactg ttactcaagg cactgacccc
     3601 gttaaaactt attaccagta cactcctgta tcatcaaaag ccatgtatga cgcttactgg
     3661 aacggtaaat tcagagactg cgctttccat tctggcttta atgaggatcc attcgtttgt
     3721 gaatatcaag gccaatcgtc tgacctgcct caacctcctg tcaatgctgg cggcggctct
     3781 ggtggtggtt ctggtggcgg ctctgagggt ggcggctctg agggtggcgg ttctgagggt
     3841 ggcggctctg agggtggcgg ttccggtggc ggctccggtt ccggtgattt tgattatgaa
     3901 aaaatggcaa acgctaataa gggggctatg accgaaaatg ccgatgaaaa cgcgctacag
     3961 tctgacgcta aaggcaaact tgattctgtc gctactgatt acggtgctgc tatcgatggt
     4021 ttcattggtg acgtttccgg ccttgctaat ggtaatggtg ctactggtga ttttgctggc
     4081 tctaattccc aaatggctca agtcggtgac ggtgataatt cacctttaat gaataatttc
     4141 cgtcaatatt taccttcttt gcctcagtcg gttgaatgtc gcccttatgt ctttggcgct
     4201 ggtaaaccat atgaattttc tattgattgt gacaaaataa acttattccg tggtgtcttt
     4261 gcgtttcttt tatatgttgc cacctttatg tatgtatttt cgacgtttgc taacatactg
     4321 cgtaataagg agtcttaata agaattcact ggccgtcgtt ttacaacgtc gtgactggga
     4381 aaaccctggc gttacccaac ttaatcgcct tgcagcacat ccccctttcg ccagctggcg
     4441 taatagcgaa gaggcccgca ccgatcgccc ttcccaacag ttgcgcagcc tgaatggcga
     4501 atggcgcctg atgcggtatt ttctccttac gcatctgtgc ggtatttcac accgcatata
     4561 aattgtaaac gttaatattt tgttaaaatt cgcgttaaat ttttgttaaa tcagctcatt
     4621 ttttaaccaa taggccgaaa tcggcaaaat cccttataaa tcaaaagaat agcccgagat
     4681 agggttgagt gttgttccag tttggaacaa gagtccacta ttaaagaacg tggactccaa
     4741 cgtcaaaggg cgaaaaaccg tctatcaggg cgatggccca ctacgtgaac catcacccaa
     4801 atcaagtttt ttggggtcga ggtgccgtaa agcactaaat cggaacccta aagggagccc
     4861 ccgatttaga gcttgacggg gaaagccggc gaacgtggcg agaaaggaag ggaagaaagc
     4921 gaaaggagcg ggcgctaggg cgctggcaag tgtagcggtc acgctgcgcg taaccaccac
     4981 acccgccgcg cttaatgcgc cgctacaggg cgcgtactat ggttgctttg acgggtgcag
     5041 tctcagtaca atctgctctg atgccgcata gttaagccag ccccgacacc cgccaacacc
     5101 cgctgacgcg ccctgacggg cttgtctgct cccggcatcc gcttacagac aagctgtgac
     5161 cgtctccggg agctgcatgt gtcagaggtt ttcaccgtca tcaccgaaac gcgcga
//

质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
         收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
         1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
              ①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
              ②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
              ③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
              ④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
              ⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
              ⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
        2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
              四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
        3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
              穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
        4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
              直接挑取单菌落至液体培养基中。
        5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
              单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
        6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
              收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。

二、转化图片

P1962/pENTR223-TMEM87A人源基因质粒

P1963/pENTR223-CSRP3人源基因质粒

P1964/pENTR223-RPS4X人源基因质粒

P1965/pENTR223-DENR人源基因质粒

P1966/pENTR223-C1orf158人源基因质粒

P1967/pENTR223-RAB39B人源基因质粒

P1968/pENTR223-RGS2人源基因质粒

P1969/pENTR223-LYPD4人源基因质粒

P1970/pENTR223-TESC人源基因质粒

P1971/pENTR223-ABHD14B-A17T人源基因质粒

P1972/pENTR223-SENP8人源基因质粒